卵黄抗体在乳仔猪抗腹泻方面的应用

正卵黄抗体(IgY)作用广泛,今天主要介绍IgY在仔猪抗腹泻方面的应用。卵黄抗体的发现在二十世纪早期,而系统性研究发生在二十世纪七八十年代,这与困扰当时养猪业的仔猪腹泻有关。抗生素滥用问题和食品药物残留问题逐步受到关注,因此非抗生素保健治疗介质的开发越发受到重视。     

卵黄抗体替代抗生素的作用机制及在养猪生产中的应用

抗生素滥用导致的动物产品药物残留及微生物抗药性问题日益受到人们的关注,抗生素的使用受到严格限制,寻求抗生素替代品的研究已成为整个饲料、养殖行业的研究热点。近年来,卵黄抗体(IgY)作为饲料添加剂替代抗生素的研究越来越广泛。在猪生产中,IgY的添加可提高猪的采食量、饲料转化率及生产性能,并能有效降低由大肠杆菌、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性病毒及轮状病毒等病原体引起的腹泻,对提高养猪业的经济效益有重要意义。文章就IgY的结构特点、作用机制及其在猪生产中的应用做一综述,以期为无抗饲料的推广和普及提供佐证和依据。     

卵黄抗体在家禽促生长和疾病防制中的研究进展

当前我国已在饲料端全面禁止抗生素饲料添加剂的使用，因此研发绿色、安全和有效的替抗产品逐步成为行业内的研究热点。卵黄抗体（IgY）具有独特的理化性质和抗菌抗病毒的功能，因而具备替代抗生素的巨大潜力和发展前景。文章对IgY的理化性质、在抗菌抗病毒方面的作用机理以及制备提取加工的方法进行综述，并对IgY在家禽促生长和疾病防制中的研究以及当前存在的主要问题进行总结与展望，以期为IgY在家禽饲料添加剂中的进一步合理开发和推广应用提供参考。     

卵黄抗体提取方法及其在畜禽细菌性肠道疾病防治中的应用

细菌性肠道感染是畜禽养殖过程中的常见疾病，易引起畜禽采食量下降、生产性能降低等问题，严重者甚至造成死亡。在养殖过程中多采用抗生素对其进行治疗，但由于抗生素长期大量使用，特别是不合理使用，使药物残留和细菌耐药性问题日益凸显。因此，发展安全可靠的抗生素替代品已然成为当今畜牧行业的研究热点。卵黄抗体（egg yolk immunoglobulins，IgY）是通过免疫接种产蛋鸡后，在蛋黄中表达的一种免疫球蛋白，可用于相应疾病的预防和治疗。IgY具有产量大、性质稳定、安全高效等诸多优点，目前IgY作为抗生素替代品已被广泛用于畜禽养殖过程中，并取得了显著的效果。文章介绍了IgY的分子结构、理化性质和作用机理，总结并比较了5种IgY提取方法的去脂率、抗体效价、总蛋白含量等指标，最后详细介绍了IgY在防治畜禽常见细菌性感染中的研究现状和应用前景，以期为IgY的高效生产及疾病防治提供研究依据和技术支持。     

抗CDV、CAV卵黄抗体的制备

本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用海藻酸钠—硫酸铵法提取卵黄抗体(IgY)，并对提取的IgY采用了SDS-PAGE和低压层析检测纯度，结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接BUSA测定提取的IgY活性，结果证明提取的抗CAV IgY的活性较高，而抗CDV IgY的活性损失较大。     

抗K88-K99-987P多联蛋黄抗体活性的测定及其特性研究

本文对经弗氏佐剂、白油佐剂混合免疫产蛋鸡得到的抗K88-K99-987P蛋黄抗体(IgY)的活性测定方法进行了研究,并对IgY的生物活性及其特性进行了初步的研究.试验结果为:(1)采用ELISA法测定表明:采用白油佐剂和弗氏佐剂苗免疫产蛋鸡所制得的抗K88-K99-987P IgY比对照组的IgY分别提高32和16倍.(2)IgY的耐热试验表明:纯化的IgY和蛋黄粉中的IgY其活性在20～50℃时差别不大,但当温度继续升高时,蛋黄粉中的IgY的耐热性比纯化的IgY好.(3)IgY的耐酸、碱试验表明:37℃时,当pH为2～4和8～10时,蛋黄粉中IgY活性的影响比纯化的IgY的活性影响显著.(4)胃蛋白酶水解IgY的试验表明:当pH在2.0和3.0时,胃蛋白酶对IgY的水解作用显著;当pH为4.0～6.0时,胃蛋白酶对IgY的水解作用明显降低.在pH为2.0和3.0时,蛋黄粉中IgY的抗胃蛋白酶水解的能力要高于纯化的IgY.(5)K88押茵试验表明:当IgY的添加量在1～10 mg/mL时,能有效抑制细菌的生长繁殖.     

丹顶鹤血清IgY的纯化及其抗血清的制备

利用分离的丹顶鹤血清,应用饱和硫酸铵沉淀法对血清中的IgY进行初步提取,然后通过DEAE-52纤维柱进行纯化,SDS-PAGE测定IgY的纯度,最后以纯化后的丹顶鹤IgY为免疫原常规免疫法制备兔抗丹顶鹤IgY血清。结果表明:提纯后的IgY经电泳检测在分子质量63ku和27ku处出现2条特异性条带,经扫描软件分析其纯度大于90%;常规免疫法制备的兔抗丹顶鹤IgY血清经免疫双扩散法测定效价为1∶32。     

鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的作用机理及应用前景

随着人们对饲料中抗生素残留和耐药性问题的日益关注,寻找抗生素替代产品已成为当今研究的热点.卵黄免疫球蛋白(IgY,immunoglobulin of yolk)可作为口服剂或饲料添加剂用于有效的预防和治疗细菌和病毒引起的消化道疾病.本文从IgY的形成、特性、吸收、作用机理及在仔猪生产中的应用等方面作一综述.     

抗肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌鸡卵黄抗体(IgY)的研究

通过ELISA试验发现鸡抗肠炎沙门氏菌或抗鼠伤寒沙门氏菌卵黄抗体(IgY)具有很高的特异活性。用冻干的卵黄水溶性组分制成的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY粉末分别含有15．5％和10％的特异性IgY。抗肠炎沙门氏菌IgY与鼠伤寒沙门氏菌有53.3％的交叉反应，抗鼠伤寒沙门氏菌IgY与肠炎沙门氏菌有42.4％的交叉反应。曾有报道证明沙门氏菌特异性IgY可以抑制沙门氏菌在液体培养基中的生长。肠炎沙门氏菌在含有鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY的培养基中培养4—6小时的生长速率比对照组少4倍。通过细菌计数发现鼠伤寒沙门氏菌在含有特异性IgY培养基中培养6个小时后的数量比对照组少l.6cfu／ml。用免疫荧光技术和免疫电镜技术对IgY的特异结合活性作进一步的研究，发现沙门氏菌特异性IgY能够结合沙门氏菌表面的抗原上，并导致细菌表面结构改变。     

卵黄抗体IgY在猪生产中的应用

卵黄抗体(YolkImmunoglobulin,IgY)是蛋鸡受特定抗原刺激后体内会产生特异性并被转移和贮存在卵黄中的免疫球蛋白。用鸡卵黄大量生产和制备多克隆抗体是近年来抗体制备技术中新兴的研究领域。IgY可作为替代抗生素的新型绿色饲料添加剂。本文就免疫鸡卵黄抗体在猪生产中的应用作一综述。     

AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY).在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY.同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验.结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1:640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力.以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗.     

抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)免疫产蛋母鸡,然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白(抗-BVDV IgY)。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法,并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明,蛋鸡在首次免疫后第10天,卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY;5次免疫后,抗体效价达到1:6400,半年后仍能维持在该水平。     

卵黄抗体的特性及其在仔猪腹泻防治上的应用

仔猪腹泻是困扰养猪业的一大难题,早期断奶仔猪腹泻尤其严重.过去这一问题的解决通常是依赖抗生素或高免血清,但由于安全性和价格等因素影响了它们在养猪业的应用.卵黄抗体作为一种价格低廉、安全高效的新型兽药,在防治仔猪腹泻上展现出良好的应用前景.本文介绍了IgY的形成、分子结构、特点、吸收和转运以及IgY在防治仔猪腹泻上的应用.     

抗BVDV卵黄抗体的制备

采用牛病毒性腹泻病毒（BVDV）免疫产蛋母鸡，然后用水稀释法成功地从卵黄中分离出抗BVDV免疫球蛋白（抗-BVDV IgY）。建立起测定鸡蛋中特异性抗BVDV活性的间接ELISA方法，并采用此方法检测每次免疫后第10天的抗体滴度。结果表明，蛋鸡在首次免疫后第10天，卵黄中可以检测到抗-BVDV IgY；5次免疫后，抗体效价达到1：6400，半年后仍能维持在该水平。     

蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取和纯化

通过对蛋黄中抗嗜水气单胞菌IgY的提取,分别进行了两种粗提方法(水稀释法、Pectin法)和纯化方法(硫酸铵法、PEG6000法)的比较。结果显示,当蛋黄液经pH5.0蒸馏水10倍稀释粗提后,上清液中脂肪和IgY残余率分别为32.69%和68.34%,效果较好。采用12%(w/v)PEG6000、33%(v/v)饱和硫酸铵纯化IgY,其免疫活性残余率分别为63.5%和64.1%。SDS-PAGE显示,水稀释法和Pectin法提取的上清液中杂蛋白减少,硫酸铵和PEG6000纯化后的上清液中几乎无其他杂带。研究表明,水稀释法和Pectin法提取IgY具有简便、高效和无污染的特点,硫酸铵和PEG6000适合纯化IgY。     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法,本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡,收集免疫后所产的鸡蛋,分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯,然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果,获得可用于规模化生产的提纯方法;同时研究不同温度、pH条件下抗体活性,寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示,本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明,水稀释法提取的IgY浓度最高,为6.204mg/mL;PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之,为4.673mg/mL;水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低,为3.359mg/mL。间接ELISA检测结果表明,水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高,为1∶12 800;其次是PEG-6000,为1∶6 400;而水稀释法最低,为1∶1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价,发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明,提纯的IgY在37~60℃活性稳定;pH为4.0~11.0时具有良好的活性;在酸性条件下,20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。     

IgY在免疫检测及治疗中的应用进展

卵黄抗体(IgY)是存在于卵黄中的免疫球蛋白,是鸟类、爬行动物和两栖类动物体内的主要抗体,具有强大的免疫功能。论文介绍了卵黄抗体的分子结构和理化特性,综述了IgY在寄生虫(弓形虫、血吸虫、球虫)、细菌(肠产毒素大肠埃希菌)、病毒(B型流感病毒、狂犬病病毒)等病原检测、抗生素(卡那霉素、庆大霉素)残留检测及相关疾病如雏鸡球虫病、猪大肠杆菌病、鳗鱼弧菌和利斯顿氏菌病、轮状病毒病治疗中的应用,并指出目前IgY应用中存在的诸如可能存在禽类未知病原、尚无生产标准规程以及稳定性不够理想等问题。因卵黄抗体具有安全、高效、无公害的特点,其在疫病检测和防治中具有广阔的应用前景。     

抗ETEC F18+菌毛特异性IgY的稳定性研究

用间接ELESA方法测定了抗F18^＋ETEC IgY对温度、酸碱度、反复冻融、渗透压、胃蛋白酶、胰蛋白酶的稳定性，并考察非还原性糖（乳糖、蔗糖）对IgY活性的影响。结果表明：60℃水浴30min效价无变化；pH4．0～11．0环境中，IgY活性改变不显著；经7次反复冻融和50％蔗糖渗透压处理，抗原结合活性也几乎未受损失；pH2．5时，该IgY对胃蛋白酶非常敏感，经胃蛋白酶37℃处理4h，效价从1：7200下降到1：450；37℃时分别经胃蛋白酶（pH4）和胰蛋白酶（pH7，5）各处理4h，效价均无变化；在胃蛋白酶的处理中，蔗糖和乳糖对该IgY具有一定的保护作用。     

草鱼细菌性烂鳃病病原菌的分离及其特异性卵黄抗体的初步研究

试验从患典型烂鳃病草鱼病变部位分离到1株柱状黄杆菌(FC-3株),采用0.4%甲醛灭活制成免疫原,接种健康120日龄桃源蛋鸡,收集鸡蛋并提纯卵黄抗体(IgY),并以此IgY为基础建立间接ELISA方法。结果:用FC-3株制备的IgY经初步提纯后电泳分离可见重链和轻链2条蛋白条带,获得了IgY多克隆抗体。建立的间接ELISA方法检测柱状黄杆菌纯培养液的检出限值为1×10^7cfu/mL,抗原包被最佳浓度和抗体最佳工作浓度分别为1∶100和1∶512,辣根过氧化物酶标记兔抗鸡IgY最佳工作浓度为1∶4000。结论:建立的间接ELISA方法对柱状黄杆菌有明显的检测特异性,与其他菌株无交叉反应,重复性好。     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。