山羊流产衣原体ompA和CPAF基因的序列分析及原核表达

为了解山羊流产衣原体陕西分离株ompA和CPAF基因的遗传变异情况及制备检测抗原,根据GenBank收录的ompA和CPAF基因序列设计合成特异性引物,分别进行ompA基因和CPAF基因的基因克隆、序列分析及原核表达.结果表明,成功克隆出大小为1 053 bp的ompA基因和大小为1 056 bp的CPAF基因;核酸序...     

牦牛Y染色体PCR扩增产物的克隆和测序

本试验采用牛的一对Y染色体特异引物对牦牛基因组进行PCR扩增,检测到了牦牛公牛的一条特异性产物,经过克隆测序,得到一条长141bp的核苷酸序列,采用BLASTN软件在GenBank中比对,没有发现与其相似的同源序列。该序列与本试验室所测得牛同一引物扩增产物的序列同源性为100%。     

猪链球菌EF基因的PCR扩增

了解近年来猪链球菌甘肃分离株的毒力基因--细胞外蛋白因子(EF)的分布情况,为猪链球菌EF基因的功能研究奠定基础。成功检测出甘肃分离株中所含的EF基因,其检测的EF片段大小与预期结果相符。     

茶叶基因PCR扩增条件研究

本文对茶叶基因PCR扩增条件进行了研究，并对其结果进行了分析。     

中国林蛙Sox基因的PCR扩增

以特异扩增人SRY基因HMG -box保守区的一对引物 ,扩增了中国林蛙Sox基因(SRY -boxgene)。结果表明 ,雄性中国林蛙扩增出了两条带 ,分子长分别为 2 5 0bp和 60 0bp ,而雌性个体中未见扩增带 ,显示了中国林蛙Sox基因在雌雄性别间有差异。本研究为探讨中国林蛙的性别决定机制及性别控制的早期鉴定提供了分子依据     

普通PCR与降落PCR扩增OMPH基因的比较

为了研究牦牛源多杀性巴氏杆菌(C47-8)OMPH基因,试验采用试剂盒法提取菌株基因组DNA,比较了降落PCR与普通PCR扩增OMPH基因片段的特点。结果表明:扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,普通PCR法未扩增到OMPH基因片段,降落PCR法扩增出特异性高的OMPH基因片段;在相同的反应体系中,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,它可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。     

禽波氏杆菌16S rRNA和ompA基因双重PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的禽波氏杆菌(B.avium)16S rRNA和ompA基因序列设计引物,经PCR反应条件优化,建立了检测禽波氏杆菌的双重PCR方法。该方法能够同时扩增B.avium基因组中的16S rRNA和ompA基因的特异序列,而对禽源大肠埃希菌(Escherichia coli)、沙门菌(Salmonella)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等菌株的扩增结果均为阴性。该方法对B.avium基因组DNA检测的敏感性可达1.25×10~4 copies/μL,对其菌液检测的敏感性可达1.2×10~3 cfu/mL,对临床样品的检测结果表明,建立的双重PCR方法与16S rRNA单一PCR检测方法符合率为100%。建立的双重PCR检测方法为B.avium的检测提供了快速、准确、灵敏、特异的检测方法。     

鸭RIG-1基因的PCR扩增及其序列分析

维甲酸诱导基因1(RIG-1)是细胞质中侦测病原相关分子模式的识别受体。论文旨在扩增北京鸭RIG-1编码基因,并对其进行序列分析。通过PCR方法,从北京鸭脾脏中扩增得到RIG-1基因cDNA,并使用LaserGene分子生物学分析软件进行序列分析。结果发现北京鸭的RIG-1基因cDNA开放阅读框全长2 802bp,编码933个氨基酸。结构预测发现鸭RIG-1结构与哺乳动物类似,N端有两个串联CARD区,中间为DExD/H解旋酶区,C端为抑制区,各功能区起重要作用的氨基酸较为保守。同源性及进化树分析发现鸭RIG-1与鹅和斑马鱼的同源性最高分别为93.7%、78.4%,与哺乳动物同源性高于50%,与其他鱼类的同源性低于50%。成功扩增出北京鸭RIG-1基因cDNA编码序列,为鸭RIG-1的深入研究奠定了基础。     

PCR扩增invA基因特异性检测沙门氏菌

建立了扩增invA基因检测沙门氏菌的PCR方法。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种27株非沙门氏菌进行PCR,2％琼脂糖电泳检查,结果所有沙门氏菌都扩增出了300bp的特异性产物,非沙门氏菌都未扩增出此目的条带。产物的特异性由slot blot杂交进一步证实。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中10pg染色体DNA及10~2cfu的纽波特沙门氏菌50029。为下步克隆而设计的两个酶切点（Bam HI,Eco RI）对引物的特异性没有影响。本研究为沙门氏菌的检测提供了简洁、敏感、特异的新方法,同时为克隆invA基因做属特异性探针打下了基础。     

狍Sry基因PCR扩增的初步研究

为研究狍性别决定机制,采用聚合酶链式反应(PCR)技术对野生狍(Capreoluscapreolus)(n♀=2,n♂=2)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增。根据人的SRY基因核心序列设计合成了1对引物1,2。结果在野生狍雄性个体中扩增出1条带,大小约为220bp,而在雌性个体中未见扩增带,表明了Sry基因的性别特异性,为探讨野生狍的性别决定机制提供了分子资料。     

用PCR扩增兔SRY基因的研究

用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。     

静原鸡FOXL2基因PCR扩增及生物信息学分析

为研究FOXL2基因对鸡的性成熟及产蛋性能的影响,试验以优良地方品种静原鸡为研究对象,利用PCR技术成功克隆了静原鸡心脏FOXL2基因的CDS区,其序列长度为918 bp。生物信息学方法分析结果显示,静原鸡FOXL2基因编码了305个氨基酸,分子式为C1491H2267N425O432S15。FOXL2蛋白是亲水性蛋白质,但不存在跨膜区域,不含信号肽。FOXL2蛋白含有28个丝氨酸(Ser)磷酸化位点,含有4个苏氨酸(Thr)磷酸化位点,含有16个酪氨酸(Tyr)磷酸化位点。FOXL2蛋白在第46～132位氨基酸之间只有1个Forkhead结构。FOXL2蛋白二级结构主要的结构形式为α-螺旋与无规则卷曲。在SWISS-MODEL中建立FOXL2蛋白的三级结构,模型以2ef0.1.A(Ornithine Carbamoyltransferase)蛋白为模板,模板的序列同源性高达99.34%。与其他禽类FOXL2基因CDS区序列进行多序列比对,使用MEGA 7.0软件构建进化树。静原鸡与环颈雉亲缘关系较近,与原鸡的亲缘关系最近。     

牛CD14结构基因的PCR扩增及序列分析

在用牛肺巨噬细胞构建了ｃＤＮＡ基因文库的基础上,参照人和小白鼠ＣＤ１４的基因序列设计一对引物,用ＰＣＲ方法成功地扩增出编码牛ＣＤ１４的特异性ＤＮＡ片段,并进行了序列分析。结果表明,牛ＣＤ１４基因的核苷酸在相同区域内与人ＣＤ１４的同源性为７９％,推导氨基酸序列的同源性为７３％,而与小白鼠的核苷酸和氨基酸的同源性分别为７５％和７１％。     

猪PLTP基因的PCR扩增及多态性检测

磷酸脂转运蛋白(PLTP)是脂代谢中重要的转运蛋白之一,在机体脂类代谢中主要介导高密度脂蛋白(HDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)间的磷酸脂转移,具有调控动脉粥样硬化(AS)、降低血浆HDL水平等作用.对云南大河猪85个血样进行了DNA的提取及检测,PCR扩增PLTP基因并进行PCR-RFLP分析(HaeⅢ).结果表明,PLTP基因具有丰富的多态性,为今后研究该基因的生物学功能提供了依据.     

鸡毒支原体PCR检测及特异扩增片断的克隆与测序

根据Ｅ．Ｒ．Ｎascimento等人鸡毒支原体（Ｍycoplasma gallisepricum,ＭＧ）基因文库 分离的种特异性片段fＭＧ－２序列,设计合成一对长２５bp的引物Ｌ１Ｒ１,经ＰＣＲ反 应条伯优化选择,对５株ＭＧＤＮＡ扩增均产生出预期的７３２bp特异扩增片断,而不能扩增滑液支原体（Ｍycoplasma synouiae,ＭＳ）、Ｅ．coli、ＰＵＣ１９质粒ＤＮＡ,符合 设计要求;ＤＩＧ随机引物法标记扩增产物ＤＮＡ探针,与上述菌株ＤＮＡ Ｄot-blot杂交     

猪链球菌的生物学特性及MRP基因的PCR扩增

为研究一猪链球菌甘肃分离株的生物学特性,笔者通过在不同培养基中培养、微量生化反应试验,观察其培养特性;用纸片扩散法药敏试验检测了该分离株对14种药物的敏感性;用PCR方法扩增其毒力基因MRP并验证。     

新疆地区绵羊布鲁氏菌omp25基因PCR扩增研究

根据GenBank发表的绵羊布鲁氏菌标准菌株(63/290)的omp25基因序列设计引物,以新疆地区绵羊布鲁氏菌(80/019)基因组DNA为模板,探索PCR反应的各种条件以确定最适PCR反应条件。结果扩增出清晰的omp25目的基因片段,为今后进行omp25的分子生物学特性的研究奠定基础。