嘉兴市主栽葡萄品种中主要病毒病原的检测

为调查嘉兴市主栽葡萄品种上病毒发生状况,本研究采集了嘉兴市5个县区的6个主栽葡萄品种162份样品,采用RT-PCR技术结合PCR产物测序对葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄卷叶病毒1(GLRaV-1)、葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄病毒B(GVB)、沙地葡萄茎痘病毒(GRSPaV)和葡萄斑点病毒(GFkV)发生情况进行检测。结果表明,嘉兴市葡萄主栽品种带病毒率高达91.4%,且复合侵染率为60.5%。以上7种病毒,除GFLV以外,其他6种病毒均可检测到,且GFkV发生率高达84%。     

四川葡萄病毒病田间普查及血清学鉴定

对四川葡萄主产区病毒病的发生和危害状况进行田间普查,并采集了48份葡萄枝条样本进行病毒病的血清学检测和鉴定。经双抗体和三抗体夹心酶联免疫法测试后．从采自四川的这批样本中分别检测出了葡萄茎沟病毒(GVA)、葡萄栓皮病毒(GVB)、葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄斑点病毒(GFkV)、葡萄卷叶病毒-2(GLRaV-2)和葡萄卷叶病毒-3((GLRaV-3)6种危险性的病毒(株系),它们的检出率分别为14.6％、8．3％、10．4％、27.1％、14.6％和20．8％,另外两种靶标病毒(株系)葡萄卷叶病毒-1(GLRaV-1)和南芥菜花叶病毒(ArMV)则未被发现。在四川省内一些老龄葡萄园内．以及部分引进的葡萄新品种上,病毒病的发生和流行极为普遍,并给葡萄的正常生长和生产造成了严重危害。     

上海地区葡萄病毒种类及传毒介体检测鉴定

2017—2018年对上海市嘉定区、宝山区、奉贤区、浦东新区葡萄种植园进行病毒病调查及传毒介体检测,将采集的叶片混合后通过小RNA测序方法确定侵染病毒种类。结果表明:混合样品带有葡萄双生病毒A(Grapevine geminivirusA,GGVA)、葡萄卷叶伴随病毒2(Grapevine leafroll-associated virus2,GLRaV-2)、岩生葡萄茎痘伴随病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)和葡萄蚕豆萎蔫病毒(Grapevine fabavirus,GFabV)等5种植物病毒;RT-PCR或PCR复验结果与小RNA测序结果一致。同时,对浦东新区葡萄园种植点周边的昆虫带毒情况检测发现,葡萄双生病毒A普遍存在于烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)、茶黄蓟马Scirtothrips dorsalisHood、狭领纹唇盲蝽Charagochilus angusticollis、菊方翅网蝽Corythucha marmorata(Uhler)、桃蚜Myzus persicae和寡脉蝇Asteia amoenaMeigen体内,此外在狭领纹唇盲蝽体内还检出GFk V,其他病毒未检出。该结果可为进一步研究上海地区葡萄上发生的病毒病种类及传毒介体提供参考。     

贺兰山东麓主栽葡萄品种病毒病鉴定及健康状况评价

对贺兰山东麓7个葡萄主产区的9个葡萄品种,共计52份样本进行葡萄病毒病的ELISA检测和健康状况分析。9个测试葡萄品种中,2个酿酒品种感染了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3),病毒感染率为22.22%;1个酿酒葡萄品种感染了葡萄扇叶病毒(GFLV),病毒感染率为11.11%;1个鲜食葡萄品种感染了卷叶病毒(GLRaV-3),病毒感染率为11.11%。在2个受测目标病毒中,GLRaV-3的发生和危害最为严重,其单个采样点的样本感染率为14.29%~50.00%;其次为GFLV,单个采样点的样本感染率为100.00%。蛇龙珠是贺兰山东麓携带GLRaV-3的主要葡萄品种,西拉是携带GFLV的主要葡萄品种。     

葡萄卷叶伴随病毒3号抗血清的制备及应用

为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3),本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品中GLRaV-3不同分离物检测。     

葡萄叶片植株再生及GFLV-CP基因的转化

利用无核白和黑王等12个品种的无病毒葡萄试管苗叶片为外植体,在NN69培养基(Nitsch and Nitsch 1969)试验了不同浓度的IBA和BA对其植株再生的影响.其中无核白、黑王、红地球和红宝石4个品种获得了稳定高频率的再生植株.以GUS基因为报告基因,通过根癌农杆菌介导,建立了葡萄离体叶片外源基因的遗传转化体系,而后将葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因转入葡萄叶片,通过卡那霉素筛选和PCR检测证明获得了转葡萄扇叶病毒外壳蛋白(GFLV-CP)基因的无核白葡萄植株.     

山东省葡萄主要病毒病的分布及病原鉴定

葡萄病毒病严重影响葡萄的产量和品质,是制约葡萄产业发展的重要因素。为明确该病害在山东省的最新分布状况及病原种类,2016—2018年采用田间调查结合RT-PCR检测等方法对山东省葡萄主要病毒病进行了研究。结果表明,186份样品中共检出GLRaV-1、GLRaV-3、GRSPaV、GFLV、GFkV 5种病毒,检出率分别为18.82%、9.68%、16.67%、1.61%、33.87%,且复合侵染发生普遍,检出率为16.67%;树龄较大的葡萄园以GLRaV-1、GLRaV-3病毒侵染为主,新建葡萄园以GRSPaV、GFkV病毒侵染为主。研究结果可为山东省葡萄病毒病的早期预防提供理论指导。     

宁夏地区葡萄卷叶伴随病毒遗传变异的PCR-SSCP分析

宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄卷叶病病株率较高,严重影响了酿酒葡萄产业的健康发展,但有关其病原葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus, GLRaVs)的遗传变异情况则鲜有报道.利用RT-PCR技术对宁夏酿酒葡萄不同种植区的7个主栽品种的GLRaV-1和GLRaV-3进行分子检测,利用SSCP技术对扩增片段进行遗传变异分析.试验结果共获得8个GLRaV-1和13个GLRaV-3的阳性样本. 8个GLRaV-1分离物基于CP基因分析差异明显,可分为3类; 13个GLRaV-3分离物基于RdRp基因分析差异明显,可分为3类,而基于CP和HSP70基因分析可分为2类.说明宁夏酿酒葡萄不同种植区、不同品种的GLRaV-1和GLRaV-3种群分子特性存在差异且遗传变异明显.这有助于宁夏地区酿酒葡萄GLRaVs流行学调查和分子诊断分析,为该病害的防控提供理论依据.     

PAS-ELISA检测GFLV和GLRaV-3技术的研究

以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究。从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检测部位对结果的影响,建立了一套完整的ELISA检测GFLV和GLRaV-3程序;通过试验分析,该方法快速,简便,经济且灵敏度高,不失为葡萄病毒检测的一种新方法。通过检测,还了解到GFLV的发病高峰在春季,主要发病部位在上部叶片,而GLRaV-3的发病高峰在秋季,重要发病部位在下部叶片。     

抗病毒药剂处理脱除淮山药温和花叶病毒试验

【目的】比较3种不同抗病毒药剂处理脱除淮山药温和花叶病毒（YMMV）的效果,以期在对植物材料伤害较低的同时达到脱除病毒的目的,为淮山药脱毒苗的培育提供新途径。【方法】采用经RT-PCR检测确定感染YMMV的淮山药品种粤北3号（YB3）为材料,以不同终浓度（10、20、30、40、50 mg/L）的抗病毒药物利巴韦林、盐酸吗啉胍和阿昔洛韦加入培养基,处理带毒淮山药茎段3个月,至其形成再生苗,再用RT-PCR检测其中的YMMV。【结果】利巴韦林对淮山药植株生长有明显抑制作用,盐酸吗啉胍和阿昔洛韦对淮山药植株生长的抑制作用不明显;利巴韦林终浓度超过40 mg/L处理的样品、盐酸吗啉胍和阿昔洛韦终浓度超过30 mg/L处理的样品中均未检测出YMMV,其余浓度处理的样品可部分检出YMMV。【结论】终浓度30-50 mg/L的盐酸吗啉胍和阿昔洛韦处理3个月可有效脱除YB3淮山药中的YMMV,脱毒效果好于相同浓度的利巴韦林。     

Elimination of grapevine fleck virus and grapevine rupestris stem pitting-associated virus from Vitis vinifera 87-1 by ribavirin combined with thermotherapy

Vitis vinifera 87-1 plants infected by grapevine fleck virus(GFkV) and grapevine rupestris stem pitting-associated virus(GRSPaV) were used as the plant materials for virus elimination treatment. This study evaluated the effects of ribavirin at different concentrations(15 and 25 μg mL~(–1); R15 and R25, respectively), thermotherapy(37°C; T), and the combination of ribavirin and thermotherapy(R15+T and R25+T) on eliminating viruses from grapevine plants in vitro. Both R15 and R25 had phytotoxic effects and weakened plant growth. Thermotherapy positively affected the growth of grapevine plants. Plant height was significantly greater in T, R15+T, and R25+T than in CK, R15 and R25. The proportion of dead plants after T, R15+T, and R25+T was 51.4, 11.4, and 8.6%, respectively. The survival rates of regenerated plants after all treatments were 68.0%. Ribavirin concentration and treatment time were related to the regeneration of shoot tips and elimination efficiencies of the two viruses. The survival rates of plants after R15+T for 30, 40, and 50 days were 97.3, 90.7, and 74.4%, respectively. The elimination rates of GRSPaV from plants in the three time quantum were 55.6, 84.6, and 93.8%, respectively. The elimination rate of GFkV was 23.9% higher in R25(35/44) than in R15(25/45), and that of GRSPaV was 7.0% higher in R25 than in R15. The combination of thermotherapy and chemotherapy was found to have a positive effect on the eradication of GFkV and GRSPaV, and R25+T for 50 days was able to completely eliminate the two viruses from in vitro grapevines.     

云南葡萄病害研究初报

 本文报道云南22种葡萄真菌性病害,国内未报道的病害有9种,其中5种有描述和附图,即葡萄小褐斑病Anaphysmene sp,叶斑病Discosia sp,黑星病Fusicladium viticis,枝枯病Massamia phomeioides,大叶斑病Pestalotiopsis sp,后3种进行单孢分离接种;另4种为省内未报道的病害,即葡萄灰霉病Botrytis cinerea,黑点病Septoria sp,黑斑病Alternaria viticola,叶枯病Monochaetia uniseta,亦进行描述并附图。     

葡萄卷叶伴随病毒1号河北和辽宁分离物CP基因序列分析

为获得葡萄卷叶伴随病毒1号(Grapevine leafroll-associated virus 1,GLRaV-1)中国分离物的分子信息,提高其检测可靠性,本研究从河北怀来和辽宁兴城地区带有明显卷叶症状的葡萄样品中提取的叶柄韧皮部总RNA,采用RT-PCR克隆了GLRaV-1的河北(GLRaV-1-HB)和辽宁分离物(GLRaV-1-LN)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因,并进行了序列分析。结果表明:GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN的CP基因核苷酸同源性为90.7%,由此推导的氨基酸同源性为93.8%;与已报道的国外3个GLRaV-1分离物的CP基因全序列相比,其核苷酸与氨基酸序列同源性分别为90.0%～96.0%和92.9%～97.5%。以CP基因序列构建的进化树表明,现有的5个分离物可分为3组,其中本研究得到的GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN,分别与巴西分离物(GLRaV-1-PS,GenBank登录号为GQ332536.1)和伊朗分离物(GLRaV-1-IR-S7,FJ952151.2)为一组;澳大利亚分离物(GLRaV-1-AUS,AF195822.1)单独为一组。     

Advancements in plant regeneration and genetic transformation of grapevine(Vitis spp.)

Grapevine(Vitis spp.) is one of the most economically important fruit crops worldwide, and there is considerable interest in improving its major agronomic and enological traits in response to ever-changing agricultural environments and consumer demands. Molecular genetic techniques in particular, associated with rapid technological advancements, provide an attractive alternative to conventional breeding approaches for developing new grapevine varieties with enhanced yield performance, quality, stress tolerance and disease resistance. To date, several grapevine varieties have been transformed with genes associated with diverse functions through biolistic bombardment and/or Agrobacterium-mediated transformation, and transgenic grape lines have been obtained using established regeneration systems. Nevertheless, a wide range of factors, including genotype, explant source and culture medium, have been shown to affect the efficiency of plant regeneration. Moreover, the selection and use of acceptor materials, bacterial strain and cell density, selectable markers and selection methods also influence transformation efficiency. This paper provides an overview of recent advances in grapevine regeneration and genetic transformation and in-depth discussion of the major limiting factors, and discusses promising future strategies to develop robust plant regeneration and genetic transformation in grapevine.     

几种营养液 药液及脱毒粉蚧对剑麻紫色卷叶病的影响

继排除紫色卷叶病非细菌、真菌、线虫病引起外,围绕病毒、营养匮乏、药剂和害虫分泌的毒物与紫色卷叶病关系,开展剑麻植株体内点滴营养与药剂及非抗性麻苗接种已在南瓜上脱毒3~4代的粉蚧若虫,探讨对紫色卷叶病发生的影响。初步结果为营养和药剂对该病没作用或作用不大;该病与粉蚧(新菠萝灰粉蚧)害虫分泌的毒物有密切关系。