棉花外源基因导入及转基因再生植株条件的研究

用５～６ｄ的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培,菌株质粒中Ｇｕｓ基因为标记基因,ＮＰＴⅡ基因为选择基因。在含０．１ｍｇ·Ｌ－１２,４－Ｄ和０．１ｍｇ·Ｌ－１ＫＴ的ＭＳ培养基上共培４８ｈ,转移到添加头孢霉素５００ｍｇ·Ｌ－１,卡那霉素５０ｍｇ·Ｌ－１的ＭＳ培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织,７０～８０ｄ时,进行ＧＵＳ检测,选择ＧＵＳ阳性愈伤组织,经体细胞分化生成转基因再生植株。     

药用作物掌叶半夏组织培养及药物成份分析

药用作物掌叶半夏（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）的种子在附加２，４－Ｄ０．５－６．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ或Ｂ５培养基上均能诱导出大量愈伤组织，但２，４－Ｄ的浓度变化对愈伤组织的形成和生长无明显影响，且无分化现象。愈伤组织生长快，分散性好，适于悬浮培养。种子在附加ＮＡＡ０．１－４．０ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上均能形成愈伤组织并分化出根和芽，随ＮＡＡ     

甘薯和Ipomoea lacunosa的种间体细胞杂种植株再生及鉴定

用ＰＥＧ融合法融合甘薯品种高系１４号和近缘野生种Ｉｐｏｍｏｅａ ｌａｃｕｎｏｓａ的原生质体，将融合原生质体培养在含有０．０５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ ＫＴ的ＭＳ培养基上，愈伤组织迅速增殖。将其中的７０个愈伤组织培养在添加３．０ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ的ＭＳ培养基上，并进一步培养在ＭＳ基本培养基上，获得９株再生植株。过氧化物酶同工酶、酯酶同工酶和ＲＡＰＤ分析表明，其中２株再生植株（ＫＬ１和ＫＬ３）     

苎麻悬浮细胞原生质体培养再生植株

苎麻品种浏阳大叶绿的子叶在含有２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳＢ固体培养基上，形成愈伤组织。愈伤组织经３￣４次继代培养后作液体振荡培养，产生悬浮细胞系。从悬浮系分离的原生质体，只有以海藻酸钠包埋方式培养在ＫＭ８Ｐ培养基中，５０天左右才能形成肉眼可见的小愈伤组织。该愈伤组织在附加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ的ＭＳＢ生长培养基上增殖，然后转入附加６－ＢＡ２．０ｍｇ     

大蒜发芽叶培养体细胞胚发生

将大蒜发芽叶培养于ＭＳ（１／２ＮＨ４ＮＯ３＿＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ上，形成愈伤组织。愈伤组织继代后，转移到ＭＳ（ＫＮＯ３２５２５ｍｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１６５０ｍｇ／Ｌ，无ＮＨ４ＮＯ３）＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ４ｍｇ／Ｌ＋Ａｄｅｎｉｎｅ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ培养基上，２５天后，形成体细胞胚并能再生植株。其中，胚状体发生的必要条件是ＮＯ３／ＮＨ＾＋４＞１，ＫＴ／     

掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株

掌叶半夏成熟胚在含２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上可诱导形成颗粒状胚性愈伤组织。用附加２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．１ ｍｇ／Ｌ，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养基对胚性愈伤组织进行悬浮振荡培养，经３￣４次继代培养即可得到悬浮的单细胞，其细胞多为圆形或椭圆形，具有较强的分裂能力。经测定，悬浮培养过程中细胞生长曲线呈“Ｓ”型，培养２０天时细胞数量和鲜重达到最大值；随着     

甘薯（Ipomoea batatas（L.）Lam.）及其近缘野生种原生质体的…

对甘薯品种高系１４号及其近缘野生种Ｉ．ｔｒｉｌｏｂａＬ．和Ｉ．ｌａｃｕｎｏｓａＬ．进行原生质体植株再生研究。从离体培养植株的叶柄分离出原生质体，将其培养在含有０．００５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ激动素（ＫＴ）的ＭＳ培养基中，从原生质体获得了高频率的愈伤组织。培养８－１２周后，将直径达２－３ｍｍ的小愈伤组织转移到添加０．０５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，转移３－６周后，将愈伤组织进一步转     

掌叶半夏悬浮培养下的体细胞胚胎发生的研究

掌叶半夏种子在附加２，４－Ｄ２．０，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上形成浅黄色或白色颗粒状胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在附加２，４－Ｄ１．０，ＢＡ０．５，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养其中振荡培养，可产生大量的体细胞胚。２，４－Ｄ对体胚诱导效果显著并促进其早期发育，但抑制其进一步发育成熟。ＮＡＡ对体胚诱导效果不如２，４－Ｄ，但可使体胚正常发育。水解酷蛋白明显提高体胚诱导频率。显微观察表明：体胚起源     

甘薯胚性细胞悬浮培养系的建立

地甘薯胚性细胞悬浮增减系的进行了研究。将１２个基因的长约０．５ｍｍ的茎尖培养在含有０．２ｍｇ／Ｌ或２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，形成了胚性愈伤组织。胚性愈伤组织的形成率因基因型和２，４－Ｄ深度不同而很大差异，为０－７５．７％。一方面，将胚性愈伤组织继续增减在含有２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，它们形成了处于各发育时期的体细胞胚。将具有体细胞胚的胚性愈伤组织转移到ＭＳ基本培养基上，体细胞胚发育成     

油菜素内酯在棉花组织培养中的应用研究Ⅰ．油菜素内酯对陆地棉体细胞胚胎发生和根器官发生的影响

本文研究了ＢＲ及其与ＩＡＡ、２，４－Ｄ、ＫＴ和６－ＢＡ等配合使用对陆地棉愈伤组织诱导、继代、分化、体细胞胚胎和根器官发生的影响。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ能使陆地棉Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种分化产生胚性愈伤组织，并有效地保持该种愈伤组织的生活力和胚胎发生能力。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ促进Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种体细胞胚胎发生，ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．０５ｍｇ／Ｌ能诱导所有供试品种产生疏松黄绿色愈伤组织，２，４－Ｄ用量逐步降低或除去后，一些品种便分化产生胚性愈伤组织或体细胞胚状体。另在ＢＲ与ＩＡＡ的某些组合中还观察到根器官的发生。     

海藻糖合酶基因转化黑麦草及耐旱性研究

以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种子成熟胚为外植体,在MS附加5 mg/L 2,4-D、500 mg/L的L-脯氨酸、130 mg/L天门冬酰氨、10 mg/L AgNO3的诱导培养基(MSJ)上诱导胚性愈伤组织.用基因枪法将ubiqutin启动子驱动的海藻糖合酶基因(TPS基因)转入多年生黑麦草的胚性愈伤.在含有5 mg/LBialaphos的选择培养基上经过2个月的抗性筛选,抗性愈伤组织在分化培养基上生成了898株再生植株,其中的220株检测为阳性株,检测的阳性率占供检株数的24.5%.PCR分析及PCR-Southern杂交鉴定表明,TPS基因已整合到黑麦草的基因组中.抗旱性鉴定表明,转基因黑麦草在干旱胁迫条件下的保水能力增强,电解质渗出率明显低于对照,耐旱性提高.     

玉米成熟胚胚性愈伤组织的诱导、高频再生及转化的研究

以玉米自交系CML295、CML304和18-599R的成熟胚为外植体, 结合幼胚离体培养方法, 探讨并优化了成熟胚来源的胚性愈伤组织诱导及继代培养方法。对其愈伤组织的形态和组织切片的研究结果显示, 继代过程可产生良好的Ⅱ型胚性愈伤组织。在分化培养中分别获得68.6%、75.4%和84.8%的高频再生率, 每愈伤组织块成苗数分别为2.45、2.43和2.75。利用基因枪法转化pCAMBIA1301质粒后的GUS瞬时表达效率分别为57.9%、62.5%和73.1%, 转化pCAMBIA1303质粒后检测GFP的瞬时表达效率分别为23.3%、40%和45.5%。以上3种基因型成熟胚来源的愈伤组织转化率与其对应的幼胚来源的胚性愈伤组织转化率相似。这一技术体系为玉米的遗传改良和功能基因组研究提供了重要的技术平台。     

根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化及转基因植株的再生

以甘薯优良品种"新大紫”的茎尖培养再生植株为试材,经根癌农杆菌介导将甘薯块根贮藏蛋白启动子(Sporaminpromoter)调控下的10kD玉米醇溶蛋白基因导入到"新大紫”中,并获得了转化植株.甘薯品种"新大紫”再生植株的茎切段,与携带有表达载体质粒pSP10Z的根癌农杆菌菌株LBA4404共培养后,在含75mg/L卡那霉素(Kan)的筛选培养基上可     

商陆抗病毒蛋白基因在麝香百合中的转化和表达

以麝香百合叶片愈伤组织为受体,利用根瘤农杆菌介导法将美洲商陆蛋白（PAP）基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式转入百合叶片愈伤组织中,然后在含有MS培养基中筛选愈伤组织并得到再生植株,在建立的农杆菌转化百合的遗传转化体系中,获得49株再生植株,经PCR检测表明PAP基因已经转移到有抗性愈伤组织再生出百合植株中。     

表达bar基因的抗除草剂转基因甘薯的获得

用农杆菌介导法将bar基因导入甘薯主栽品种徐薯18的胚性悬浮细胞中,获得了抗除草剂的转基因植株.农杆菌菌株EHA105携带的双元载体pCAMBIA3300上含有bar基因.来自于徐薯18胚性悬浮细胞的直径为0.7～1.3 min的280个胚性细胞团用于遗传转化.共培养3 d后,首先在含有2 mg/L 2,4-D、100 mg/L Carb的液体MS培养基中培养1周,然后将胚性细胞团转移到添加2 mg/L 2,4-D、100 mg/L Carb 和0.3 mg/L PPT的固体MS培养基上进行选择培养.选择8周后,将获得的37个PPT抗性愈伤组织转移到添加1 mg/L ABA、100mg/L carb和0.3 mg/L PPT的固体MS培养基上,其中的34个愈伤组织诱导得到体细胞胚并发芽形成小植株,共获得了164株拟转基因植株.PCR分析表明,其中的123株为转基因植株.Southern blot和Northern blot分析表明,bar基因稳定整合到转基因植株的基因组中并正确表达.除草剂喷洒试验结果表明,转基因植株具有高度除草剂抗性.     

新疆大叶紫花苜蓿(Medicago sativa.L)子叶、下胚轴、根的植株再生

随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展，通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注，植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5~7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体，诱导愈伤培养基为MS+2,4-D 0.1~3.0 mg/L(8种不同水平)或MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.01~0.5 mg/L(10种不同水平)，诱导芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L，生根培养基为MS。结果表明，外植体在MS+2,4-D 2.0 mg/L+ KT 0.2 mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织，子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L培养基中培养40~80d中均可分化芽，子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%，将2 cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根，14d后，生根的小植株炼苗移入花土中，成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株，根也是一种较好的植株再生材料，以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。     

利用农杆菌介导法将反义Wx基因导入水稻的研究

利用根癌农杆菌将含多基因(hpt选择标记基因、反义Wx基因、GFP和GUS报告基因)的pCAMBIA1304载体导入水稻品种(501R、中花9号和日本晴)的幼胚愈伤组织,分别在含35mg/L、45mg/L和65mg/L潮霉素浓度的筛选培养基上筛选获得抗性愈伤。后经PCR检测,从415株T0代再生植株中选出92株(其中501R、中花9号和日本晴分别为4株、43株和45株)。对这些转基因后代植株进行Southern blotting分析表明：hpt、反义Wx基因已经整合进植物基因组中。绝大多数转基因植株后代的表型正常。成熟种子直链淀粉含量分析表明,部分转基因植株的T1代种子中的直链淀粉含量有不同程度的下降,最低的已下降至6．3％,与对照相比下降了9．8％。     

以抗除草剂Bar基因稳定转化谷子技术研究

农杆菌介导的谷子遗传转化效率一直是制约谷子功能基因研究及转基因育种效率的主要因素。本研究以冀谷11谷子幼穗为外植体, 选取0.5~1.0 cm的幼穗, 切成0.5 cm左右的小段, 置改良后的MS培养基上诱导15~20 d形成胚性愈伤组织3120块。愈伤组织侵染转化前用侵染液悬浮浸泡, 并经45°C热激预处理3 min, 可以有效提高26.1%的瞬时遗传转化效率。将转化后的愈伤组织经草丁膦(PPT)筛选后获得513块抗性愈伤组织, 抗性愈伤组织获得率为16.4%。抗性愈伤组织经分化、壮苗培养后获得7株抗性植株, 经PCR和Southern杂交检测得到6株T₀代转基因阳性株, 对T₃代转化植株叶片进行PPT抗性分析, 并结合Bar蛋白抗体试纸条鉴定, 表明Bar基因已稳定整合到谷子基因组中。本研究建立了农杆菌介导转化谷子优良品种的遗传转化体系, 对提高谷子转基因育种效率和谷子模式研究系统的建立有重要意义。     

沙冬青脱水素基因转化紫花苜蓿的研究

为获得抗旱性较强的转基因苜蓿植株,以紫花苜蓿品种中苜2号作为基因转化受体,通过对外植体选择、菌液浓度、选择压确定、侵染时间和共培养时间等因素进行优化,成功建立了农杆菌介导的遗传转化体系。在此基础上,将沙冬青脱水素基因通过农杆菌的介导,转化到中苜2号中。试验结果显示,子叶和下胚轴作为外植体愈伤组织诱导频率最高,可达100%;获得抗性愈伤组织与转基因植株的卡那霉素最佳筛选浓度为25 mg/L;外植体与农杆菌的共培养时间以5 d为最佳。试验共获得126株T0抗性株,PCR检测30株表现为阳性,表明脱水素基因已转入受体植株中。