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应用四碱基限制性内切酶对鹿结核病流行株和卡介苗基因组分别酶切,以鹿结核流行株酶切产物为testerDNA,卡介苗酶切产物为driver DNA,testerDNA接头连接后与driver DNA进行抑制性消减杂交。将获得的消减PCR产物与pMD-18连接,JM109感受态细胞,进行蓝白斑筛选。结果表明,RsaI酶切产生的酶切产物在0.1~2.0 kb之间,将消减PCR产物克隆后,挑取208个转化子,构建了鹿结核病流行株与卡介苗的差异基因文库。结果表明,应用抑制性消减杂交技术,构建鹿结核病流行株与卡介苗基因组差减文库,可为鹿结核病自然感染和卡介苗免疫的鉴别诊断及鹿结核病的综合防治奠定基础。 相似文献
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应用变态反应方法诊断鹿结核病的研究 总被引:7,自引:1,他引:7
利用牛型新,旧结核菌素(PPD,OT),禽型旧结核菌素(OT)为变应原,采用变态反应点眼法进行了鹿结核病的诊断研究。结果表明:变应原以牛型OT为最好,其敏感性高于禽型OT,检出率高于牛型PDD;一次二回点眼的阳性率可达92.33%,且较一次一回的检出率高44.6%;判定最佳时间为3,6,9h。用牛型OT一次二回点眼法抽检了11个鹿场2450余头成年鹿,其阳性率最高者为99.8%,最低者为1.1%, 相似文献
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为了避免个体差异,在2窝仔猪中各选择6头,共12头仔猪随机分成对照组(6头)和试验组(6头),在40日龄时分别肌注卡介苗(试验组)和等量生理盐水(对照组),于接种前(0d)和接种后3、7、10、14d采血检测,研究结果表明,卡介苗能在3d内提高断卫猪淋巴细胞转化率和血清杀菌能力,分别在第7d和第3d达到高峰,此后,于第10d和第7d开始迅速降低,而对白细胞总数和活性T淋巴细胞则无显著影响。试验结果表明,卡介苗能显著增强断乳仔猪的细胞免疫水平和机体的抗病能力。 相似文献
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以吉林农业大学经济动物疾病实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株的基因组为模板,应用PCR方法从已构建的鹿结核病野毒株与卡介苗差异基因文库中扩增RD1区的Rv3872、Rv3873、Rv3874、Rv3875和Rv3878 5段目的基因,分别与p MD18-T Simple Vector连接,经PCR、酶切鉴定后的阳性重组克隆质粒与原核表达载体p GEX-4T-1连接并进行原核表达,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物的反应原性进行初步研究。基因测序结果显示差异基因与期望的序列一致,并在大肠杆菌中成功诱导表达,获得以可溶形式表达的目的蛋白,经SDS-PAGE分析目的蛋白的相对分子量与理论值相符,经Western blot鉴定纯化好的目的蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,具有良好的反应原性,为其在鹿结核病血清诊断学中的应用奠定了试验基础。 相似文献