水杨酸诱导下人参培养物差异表达基因片段的克隆

本研究以人参愈伤悬浮细胞为材料,在其生长的第28天添加1×10^-3mg／L水杨酸,测定水杨酸添加后,过氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶等3种酶在72h内的变化及皂苷含量,结果表明：水杨酸添加后对过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的活力影响最大,分别在24h和48h达到最大峰值,在18h开始影响多酚氧化酶的活力,培养物生长的第28天添加水杨酸可以明显提高人参愈伤组织中皂苷的合成。确定添加水杨酸后24h提取总RNA,进行cDNA-RDA分析,筛选差异片段。确定差异基因并在GenBank中注册,注册号为FE900130。为探讨水杨酸作为诱导子对人参次生代谢的影响奠定基础。     

草菇菌丝体与原基差异表达基因分析

采用Solexa测序技术,对草菇菌丝体和原基进行了数字基因表达谱（DGE）测序,在菌丝体和原基文库中分别得到5701781个和5659262个高质量测序标签（cleantags）,对应的标签种数（distinct clean tags）分别为85626和95363。将所有高质量测序标签与参考基因库进行比对,在菌丝体和原基文库中,占标签种数的43.32%和52.57%的标签可以唯一定位（map）到参考序列上,占标签种数的21.65%和21.47%的标签可以被定位到基因组序列上。最终,被菌丝体和原基标签唯一定位的基因数（unambiguous tag-mapped genes）分别为14794和15534。差异基因分析显示,两个文库中共有显著性差异表达的基因4163个,其中在原基中上调、下调的基因数分别为2486和1677,只在原基中表达的基因321个。经过Blastnr比对,在原基中特异表达的基因,涉及蛋白质（氨基酸）合成与代谢、糖代谢、脂类代谢和抗逆反应等多个代谢途径。GO功能富集分析结果表明,葡萄糖、己糖和乙醇等代谢途径大部分基因下调表达。Pathway功能富集分析结果表明,合成核糖体蛋白的基因均下调表达,表明原基形成时细胞代谢减弱,蛋白质合成量减小。     

菜粉蝶提取物诱导黄瓜抗炭疽病相关基因cDNA片段的分离与分析

摘要：采用mRNA差异显示技术，以菜粉蝶提取物作为诱导剂，研究黄瓜幼苗抗炭疽病相关基因的差异表达，共得到67条差异表达基因片段。选其中5条被诱导表达的差异片段(D1、D2、D3、D4、D5)进行克隆、测序。生物信息学分析表明：D1片段序列(344bp)与来自叶绿体psbB基因编码的47kD蛋白结合叶绿素a构成的蛋白复合物photosystemIICP47同源性高达95.0%，其可能具有类似CP47的反复折叠的跨膜蛋白，在系统获得抗性信号途径中介导细胞壁和细胞质之间的信号传导；其余片段与已登记的基因同源性较低。     

利用Cre/loxp定位重组系统构建雄性不育基因和恢复基因表达载体

结合Cre/lox定位重组系统和杂种一代的育种特点，构建了反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pCABARTAAct和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pSTAAct中的反义肌动蛋白雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、反向插入TA29启动子下游的Actin基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp两个同向lox位点之间，再将上述表达盒连同lox位点切下插入pcAMBar，获得以除草剂Basta为筛选剂的反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pcABARTAAct。PCR方法从溶原菌BM25．8基因组DNA扩增出Cre基因，克隆测序验证无误后插入PBl525 CaMV35S-35S双启动子和Nos终止子之间，再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点，得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。     

黄瓜单性结实候选基因预测与表达分析

为发掘黄瓜单性结实基因并通过表达分析预测相关基因的功能,以黄瓜单性结实性状QTL定位结果为基础,对主效QTL区段内的基因进行生物信息学分析,发现118个基因与细胞周期、细胞生长以及激素信号传导等生物学过程有关。结合黄瓜单性结实转录组研究结果,共筛选出10个在黄瓜单性结实过程中转录水平有剧烈变化的基因。利用q RT-PCR技术分析这些基因在授粉、未授粉及单性结实的黄瓜果实发育过程中的转录变化,结果表明,Cs CRT1、Cs LON、Cs TRAPPC4、Cs RABEPK和Cs POT基因在单性结实坐果过程中特异性的上调表达,Cs5NG4基因在单性结实和授粉结实过程中呈相反表达趋势,因此推测这6个基因为黄瓜单性结实候选基因。本研究为进一步利用候选基因资源改良现有黄瓜栽培品种的单性结实性奠定了基础。     

Effect of Foliar Salicylic Acid Applications on Growth,Chlorophyll, and Mineral Content of Cucumber Grown Under Salt Stress

The objective of this study was to determine the effect of foliar salicylic acid (SA) applications on growth, chlorophyll, and mineral content of cucumber grown under salt stress. The study was conducted in pot experiments under greenhouse conditions. Cucumber seedlings were treated with foliar SA applications at different concentrations (0.0, 0.25, 0.50, and 1.00 mM). Salinity treatments were established by adding 0, 60, and 120 mM of sodium chloride (NaCl) to a base complete nutrient solution. The SA was applied with spraying two times as before and after transplanting. Salt stress negatively affected the growth, chlorophyll content and mineral uptake of cucumber plants. However, foliar applications of SA resulted in greater shoot fresh weight, shoot dry weight, root fresh weight, and root dry weight as well as higher plants under salt stress. Shoot diameter and leaf number per plant increased with SA treatments under salt stress. The greatest chlorophyll content was obtained with 1.00 mM SA treatment in both saline and non-saline conditions. Leaf water relative content (LWRC) reduced in response to salt stress while SA raised LWRC of salt stressed cucumber plants. Salinity treatments induced significant increases in electrolyte leakage. Plants treated with foliar SA had lower values of electrolyte leakage than non-treated ones. In regard to nutrient content, it can be interfered that foliar SA applications increased almost all nutrient content in leaves and roots of cucumber plants under salt stress. Generally, the greatest values were obtained from 1.00 mM SA application. Based on these findings, the SA treatments may help alleviate the negative effect of salinity on the growth of cucumber.     

冷激结合水杨酸处理对黄瓜果实冷害及能量和脯氨酸代谢的影响

为探讨冷激结合水杨酸处理减轻黄瓜果实冷害的作用及其机理,本试验分别研究了冷激(0℃冰水混合物)、水杨酸(1 mmol·L-1)以及二者结合(含有1 mmol·L-1水杨酸的0℃冰水混合物)3种处理方式对黄瓜果实低温贮藏期间能量和脯氨酸代谢的影响.结果表明,冷激、水杨酸以及二者结合处理均能抑制黄瓜果实冷害程度、相对电导率...     

不同砧木嫁接黄瓜蜡质合成基因表达分析及其miRNA预测

为研究不同砧木嫁接中黄瓜果实蜡质合成相关基因的表达量变化,本试验以3461黄瓜为接穗,黑籽南瓜和白籽南瓜为砧木,研究黑籽南瓜嫁接株、白籽南瓜嫁接株和自根苗不同果实生长时期(开花前2 d、开花当天、开花后4 d、开花后6 d、开花后8 d)中蜡质合成基因(Cs CER1、Cs CER3、Cs CER4、Cs CER6、Cs CER8、Cs CER10)的表达变化,并利用RNAhybrid、psRNATarget及RegRNA软件对调控这6个蜡质基因的microRNA(miRNA)作出预测。结果表明,不同砧木嫁接处理中蜡质基因表达差异主要体现在开花后4 d的果实中,Cs CER1、Cs CER3、Cs CER6、Cs CER8、Cs CER10基因在黑籽南瓜嫁接株中的表达量明显高于白籽南瓜嫁接株和自根苗。miRNA预测结果显示,cme-miR164可能调控Cs CER1、Cs CER3、Cs CER4、Cs CER6和Cs CER10基因,cme-miR168可能调控Cs CER3、Cs CER4、Cs CER6和Cs CER10基因,cme-miR390可能调控Cs CER6、Cs CER8和Cs CER10基因。推测Cs CER1、Cs CER3、Cs CER6、Cs CER8、Cs CER10这5个基因与黑籽南瓜嫁接导致的蜡质含量增加密切相关,cme-miR164、cme-miR168和cme-miR390可能参与调控黄瓜蜡质合成。本研究结果为探究嫁接导致蜡质含量变化的机制提供了新的理论依据。     

水杨酸调控芥菜芽苗生理及褪黑素代谢研究

为探讨水杨酸(SA)处理对芥菜芽苗生理及褪黑素代谢的影响,本研究设置喷施SA处理,并以喷施蒸馏水为对照,研究发芽期间芥菜芽苗主要生理生化变化,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究褪黑素合成关键酶基因表达的变化.结果表明,SA处理抑制了芽苗生长,生物量显著下降(P＜0.05),电解质渗透率、游离蛋白质含量、...     

猪不同生长阶段脂肪酸合成酶基因的表达差异

动物的体脂沉积所需要的脂肪酸大多是由脂肪酸合成酶(FAS)催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A合成脂肪酸。熊文中等(2001)研究发现,猪脂肪组织中脂肪酸合成酶与胴体脂肪量、胴体的脂肪率呈极显著正相关。FAS基因的表达直接影响着脂肪酸合成酶多寡。Kameda和Goodrige(1991)和Matthe     

缺锌对SD大鼠垂体基因表达谱的影响

锌参与动物体内300余种酶和功能蛋白的组成,它们在动物体内不仅参与DNA、RNA、蛋白质、糖类、脂类、维生素和矿物质代谢,而且还与胰岛素、胰高血糖素、前列腺素等的功能和活性有关(Brandao-neto et al.,1995)。本实验应用表达谱基因芯片筛选锌缺乏SD大鼠垂体差异表达的基因,检测缺锌对SD大鼠垂体基因表达谱的影响。1材料和方法1.1材料SD雄性大鼠240只,体重(95±5)g,随机分为2组,正常组(ZA)和缺锌组(ZD),含锌量分别为35.94和3.15mg/kg。饲料配制参照AIN-93G大鼠纯合日粮;大鼠cDNA表达谱基因芯片V1.2由上海生物芯片有限公司提供。1.…     

基因表达系列分析技术及其在植物抗病性研究中的应用

基因表达系列分析(SAGE)技术不仅能够全面地分析特定组织或细胞内表达的基因，还可以比较不同组织在不同时间、空间条件下基因表达的差异，从而发现新基因。SAGE技术在植物抗病性研究中的应用近几年发展很快。综述介绍了SAGE技术的原理、特点、实验方案、技术发展与演变。     

2个抗病相关基因与高油酸油菜病害关系分析

为快速筛选抗病性强的高油酸油菜品种,本研究以20个高油酸油菜品系为试验材料,调查不同材料的抗病情况,并通过RT-qPCR测定经miRNA测序筛选得到的与抗病相关基因HSP90和ATG3的表达情况,同时分析其与病情指数的关系。结果表明,20个高油酸油菜品系的发病率与病情指数呈线性正相关关系,且差异极显著;HSP90基因从苗期至花期表达量呈逐渐降低的趋势,角果期有先升高后降低和逐渐升高2种表达模式;ATG3基因从苗期至花期表达量也呈逐渐升高的趋势,角果期表达模式与HSP90基因相同。用HSP90基因在花期-叶中表达量≥1.5倍内参时进行抗病材料筛选,有95%的准确率;用ATG3基因在花期-叶中表达量≥1.8倍内参时进行抗病材料筛选,有80%的准确率,此外,也可用HSP90在花期-叶结合ATG3在五~六叶期-叶中表达情况进行预测,有80%的准确率。本研究结果为高油酸油菜抗病材料的早期筛选和油酸油菜育种提供了一定的理论依据。