鸡巨型艾美耳球虫卵囊呼吸作用的研究

采用纯种巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)卵囊,人工感染3周龄的石歧杂雏鸡,及时收集卵囊,以0.1N硫酸溶液悬浮,用微量呼吸检压仪检测卵囊呼吸作用。试验表明:孢子化过程中最初十小时内该球虫卵囊的耗氧量为3.59μl/小时/10~6个卵囊。耗氧量的变化与其细胞分裂过程相对应,耗氧量在三次核分裂前夕降低,但在分裂期升高。最高耗氧量出现于子孢子形成期,达18.91μl/小时/10~6卵囊。孢子化后卵囊的呼吸作用较缓慢,耗氧量为0.85μl/小时/10~6个卵囊。完成孢子化所需时间为26小时。     

密度梯度离心法纯化柔嫩艾美耳球虫子孢子

本文以蔗糖为介质,经密度梯度离心后旨在获得一种简便、经济和高效的纯化球虫子孢子的方法。1材料与方法1.1实验动物AA肉鸡购自北京华都肉鸡公司,未落地前放在专用鸡盒中运回;饲料为全价育雏料,购自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,不含任何药物添加剂。并且在饲喂前用烘箱75     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构进行了观察。结果表明，大配子体和小配子体寄生于相邻的宿主细胞内，相伴产生。大配子体的发育、大配子的形成、受精及卵囊形成均于带虫空泡内完成。大配子体系由末代裂殖子侵入肠上皮细胞后，缩短、长大、变圆而形成，大配子体和大配子外被单位膜，细胞核位于大配子体中央，早期大配子体的细胞核有1个明显的核仁，细胞质内逐渐形成大量成囊体1、成囊体2、大量支链淀粉和脂肪体，成囊体1比成囊体2形成的早。卵囊壁有5'层，内有大量支链淀粉和指肪体。含有大配子体、大配子和合子的带虫空泡内有丰富的泡内小管，它们是大配子体、大配子和合子获得营养物质和排出代谢废物的途径。     

柔嫩艾美耳球虫研究概况

本文简要介绍柔嫩艾美耳球虫生活史、生物学特性、卵囊形状、以及卵囊产量的影响因素，对柔嫩艾美耳球虫日龄与粪便卵囊产量进行科学的分析，旨在为疾病的治疗和预防提供依据。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子的变化

纯化的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，经消毒，水洗处理后放入玛瑙乳钵内研磨。研磨后的卵下混入适量消化液，在４０℃恒温水浴消化３０分钟即成为球虫子孢子粗提液。此粗提液经ＤＥ５２纤维素层析柱过滤，用甘氨酸洗脱液冲洗，收集滤液经离心沉淀即得纯化的柔嫩艾美耳球虫子孢子。     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106pfu/mL,插入片段约100~3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。     

柔嫩艾美耳球虫的抗原分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳，免疫印渍技术，用抗柔嫩艾美耳球虫抗体分析了第二代型殖子、子孢子和未孢子化卵囊的蛋白质。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳银染表明第二代裂殖子主要蛋白质为：１７．６ＫＤ，２９．９ＫＤ，３８．９ＫＤ和５３．７ＫＤ，但用抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ抗体免疫印渍法检测出的主要抗原为：７８．０ＫＤ，８３．２ＫＤ和９５．５ＫＤ，这说明并不是含量高的蛋白质就是产生抗体的抗原；子孢子蛋白质含     

柔嫩艾美耳球虫氯嗪苯乙氰抗性株与氯羟吡啶抗性株的实验室诱导

在药物浓度递增的情况下，经过10次传代，诱导出对1．25mg/kg氯嗪苯乙氰产生抗花药性的E.tenella虫株，初始诱导浓度为0．07mg/kg；经过6次传代，诱导出对150mg/kg氯羟吡啶产生抗药性的E.tenella虫株，初始诱导浓度为75mg/kg，低浓度（0．125mg/kg)氯嗪苯乙氰即具有高效抗球虫作用，在诱导过程中，E.tenella一旦对浓度（0．07mg/kg,0.125mg/kg)氯嗪苯乙氰产生了较为稳定的抗药性，诱导过程便进行得很快，一步一个台阶，即于虫的抗药性突破某一阈值后容易对高一级浓度的药物产生抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定柔嫩艾美耳球虫（Eimenatenella）早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个／羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×10^4个／羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以存活率、增重、肠道病变记分、血便数量、卵囊减少率为观测指标。对免疫保护效果较好的3个免疫剂量进行重复试验,同时设置商品化球虫疫苗对照组,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验。结果显示：攻虫后,不免疫攻虫组出现5％死亡,而各免疫组来出现死亡;各免疫组卵囊减少率在61．57％～69．52％;200～2000免疫组的增重与不免疫不攻虫组差异不具备显著统计学意义（P〉0．05）;600～2000免疫组的肠道病变记分和血便数量均明显少于不免疫攻虫组（P〈0．05）。用600、800和1000进行重复试验,三个免疫组攻虫期间均来出现死亡,而不免疫组和疫苗对照组均出现5％死亡;三个免疫组的增重均明显高于不免疫攻虫组和疫苗对照组（P〈0．05）;早熟株免疫组的肠道病变记分和血便数量明显低于不免疫攻虫组（P〈0．05）,而疫苗对照组与不免疫攻虫组的相当（P〉0．05）;卵囊减少率在66.30％-78．75％,高于疫苗对照组的51．82％。结果表明,该柔嫩艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中600、800和1000个／羽的免疫效果均优于疫苗对照组,可考虑以600个／羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株的实验室诱导

采用药物浓度递增法,以0．07mg／L地克珠利为起始诱导浓度连续传代,以最适抗球虫指数（POAA）、病变记分减少率（RLS）和相对卵囊产量（ROP）3项指标综合判定抗药性。经12次传代,该诱导虫株对1．5mg／L地克珠利具有完全抵抗力。试验结果表明,用实验室方法诱导柔嫩艾美耳球虫抗药株完全可行。     

柔嫩艾美尔球虫裂殖子免疫原性的研究

本文评价了柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子的免疫原性。试验采用弗氏完全佐剂乳化的裂殖子抗原及从组织中分离得的活游离殖子，以不同剂量的不同时间接种健康小鸡，随后用同源球虫进行攻击。效果评价指标为：（１）比较各抗原组的鸡只死亡率及盲肠病变记分；（２）各抗原组鸡只的增重差异。结果表明，柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子抗原不能刺激鸡体产生保护性免疫力；具有活力的裂殖子接种于健康鸡盲肠能诱发部分免疫力，但较自然感染者为     

鸡球虫微线基团Etmic—2的一种蛋白异形体的发现

本文利用PCR技术，分别从柔嫩艾美耳球虫的第二代裂殖子和孢子化卵囊基因组DNA中出微线蛋白EtMIC-2基因序列，并进行了克隆和核苷酸序列测定，核苷酸序列表明Etmic-2基因包含有二种 cDNA序列，并含有3个内含子，每一个内含子都有真核生物内含子典型剪切共有序列（GT／AG），与二种 cDNA序列比较发现，Etmic-2基因的pre-mRNA可以通过内含子的3端的不同剪切位点而产生不同的mRNA，生成至少两种蛋白异形体，本文从基因序列上解释了EtMIC-2蛋白的二种蛋白异形体产生过程。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

鸡柔嫩艾美耳球虫广西株的分离与鉴定

目的建立一种简单、实用的单卵囊分离方法，并对一株广西柔嫩艾美耳球虫进行分离。方法采用电泳制胶槽来制作琼脂块进行球虫单卵囊的分离，单卵囊实验感染9只1日龄雏鸡，感染后收集粪便，用饱和盐水漂浮法进行卵囊检测。纯种卵囊经口感染10只1日龄雏鸡，观测卵囊寄生部位、最短孢子化时间，以及其潜在期和排卵高峰期。结果2只雏鸡粪便中检出卵囊，单卵囊感染成功率为22％。通过对其中一株球虫的研究，根据其卵囊的形状、大小、寄生部位、潜在期、卵囊最短孢子化时间、排卵高峰期等生物特征，鉴定该株球虫为柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）。结论本研究成功建立一种单卵囊分离技术，可作为球虫单卵囊分离的常规方法。     

柔嫩艾美耳球虫裂殖生殖阶段超微结构的研究

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella)裂殖生殖阶段的超微结构进行了观察描述。其第二次裂殖生殖方式为外裂殖生殖，裂殖子侵入宿主细胞后，裂殖子逐渐变圆形成裂殖体，此过程中裂殖子的棒状体首先消失，引后锥体和极环消失、最后微浅、淀粉颗粒和折光体消失。裂殖体长大后，细胞膜下陷，将裂殖体分成几个部分，随后裂殖体进行核分裂成多核裂殖体，此后在靠近细胞核处细胞膜加厚外突，临近部位的细胞膜凹陷，同时近突起部位内膜复合体加厚形成极环，随着时间的推移逐渐形成幼稚裂殖子，幼稚裂殖子后部与残体相连，此过程中裂殖子的锥、极环、微线、棒状体、淀粉颗粒、折光体依次逐渐形成。裂殖子成熟的标志为从残体脱离，裂殖子的膜下微管24根纵向贯穿裂殖子直达顶端和极环相连，裂殖子内部由锥体、锥体前环1、锥体前环2、极环、微线、线粒体、折光体和3－多个棒状体等组成。