实验性鸡包涵体肝炎病毒侵袭过程中免疫细胞的变化

用鸡腺病毒内蒙古毒株（ＦＡＶ－ＨＡ）对１日龄ＳＰＦ雏鸡进行人工感染，经ＨＥ染色发现，各淋巴器官的淋巴细胞严重流失，肝脏等器官中单核－巨噬细胞活化增生；经间接免疫荧光法病毒抗原定位，除法氏囊外，均呈不同程度的抗原阳性反应，单核－巨噬细胞阳性明显，用间接免疫荧光法计数，实验组Ｔ、Ｂ淋巴细胞均明显少于对照组。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。     

禽脑脊髓炎病毒内蒙株分子致病机理的研究

本文应用分子克隆技术获得了鸡白细胞介素１β（ Ｉ Ｌ１β）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段,并对其进行了序列分析,与人及小鼠 Ｉ Ｌ１β基因核酸序列同源性分别为４５％ 和３０％ 。并应用核酸原位杂交、斑点杂交技术检测了正常和禽脑脊髓炎病毒内蒙株（ Ａ Ｅ Ｖ Ｎ Ｈ９３７）感染鸡脑组织中 Ｉ Ｌ１β及其受体（ Ｉ Ｌ１ Ｒ）产生细胞的分布,试图进一步从分子水平阐明禽脑脊髓炎的某些发病机理。     

流行性出血热病毒气溶胶感染乳鼠的免疫病理学研究

采用免疫组化ＢＡ法，对流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）气溶胶感染乳鼠脏器组织中的病毒动态分布进行了观察，并对其抗体消长进行了测定。结果表明：①ＢＡ法为病理诊断ＥＨＦＶ感染提供了一种准确的手段；②ＥＨＦＶ可通过气溶胶途径感染乳小鼠，乳小鼠感染ＥＨＦＶ的ＬＤ５０值可作为环境浓度的参考值；③ＥＨＦＶ气溶胶途径感染乳鼠后，４ｈ即可在心、肺，１ｄ在嗅球部检出，并可在其组织细胞中增殖，经血循、嗅神经、单核巨噬细胞系统等多途径扩散，造成多组织脏器的泛发性感染。感染后１２～１４ｄ，病毒检出率和病毒量均达峰值。动物自身免疫系统对ＥＨＦＶ有一定的清除能力；④感染乳鼠脑、肺、肾等脏器组织的病变与人类感染ＥＨＦＶ的病变有一定的相似性，提示可作为人ＥＨＦＶ的模型动物；⑤抗原检出率高于抗体检出率，ＥＬＩＳＡ法检出率高于ＩＦＡ法检出率。     

鸡包涵体肝炎免疫组织化学动态研究

本试验对１００ 只３ 日龄雏鸡人工感染Ⅷ型腺病毒建立鸡包涵体肝炎（ Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ ｈｏｐｙｔｉｔｉｓ Ｉ Ｂ Ｈ）模型，以免疫金银法进行免疫组织化学动态研究。结果表明，该病毒对雏鸡肝脏、胸腺、法氏囊、脾脏、肾脏、肠及胰腺等器官的上皮细胞以及淋巴细胞、血管内皮细胞、红细胞等均具有亲嗜性，主要定位于细胞核中，以肝脏、胸腺及法氏囊最为明显，揭示了感染鸡中枢 及外周免疫器官的细胞免疫和体液免疫功能呈现抑制的发病学基础。此外，接种后１２ ～４８ ｈ 及９～１１ ｄ，组织的胞核中两次表现胶体金颗粒多量存在，其形态为粗大颗粒状或微细颗粒两种，笔者认为是病毒在鸡体内两次复制高峰引起病毒血症的标志。     

法氏囊病毒感染对肉鸡内分泌机能的影响

用鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）弱毒疫苗免疫和强毒感染艾维菌鸡，采用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定血浆甲状腺素（Ｔ３，Ｔ４）、促肾上腺皮质素（ＡＣＴＨ）和皮质酮（Ｆ）来研究ＩＢＤＶ感染对肉鸡内分泌机能的影响。结果表明：ＩＢＤＶ弱毒疫苗免疫使肉鸡产生高效价抗体，血浆ＡＣＴＨ含量升高；ＩＢＤＭ强毒感染导致肉鸡血浆Ｔ２、Ｆ急剧升高，法氏囊肿大，血清中也出现ＩＢＤＶ抗体，但效价显著低下；而ＩＢＤＶ强毒感染曾     

鸡痘病毒282E4株Bam HI Fa,Fb,Fc片段非必需区筛选与序列分析

将亚克隆获得的分别含有鸡痘病毒（ Ｆ Ｐ Ｖ） Ｂａｍ Ｈ Ｉ相应片段的 ｐ Ｕ Ｆａ、ｐ Ｕ Ｆｃ 和 ｐ Ｕ Ｆｄ ３ 个质粒的单酶切位点,插入 Ｐ１１ Ｐ７．５ Ｌａｃ Ｚ报告基因盒,构建成 ｐ Ｕ Ｆａ１、ｐ Ｕ Ｆｃ１ 和 ｐ Ｕ Ｆｄ１ ３ 个重组载体质粒,在脂质体存在条件下,同 Ｆ Ｐ Ｖ 共同转染鸡胚成纤维细胞（ Ｃ Ｅ Ｆ）,９６ ｈ 后在 Ｘｇａ１ 存在条件下挑选蓝色重组病毒空斑,经３ 次空斑纯化和传代,获得 １ 株可稳定表达 β半乳糖苷酶的重组病毒,并对该重组用质粒作了序列分析。     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析

本研究主要对猪生殖呼吸道综合征（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ） 国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ Ｐ Ｅ Ｇ６０００） 沉淀和差速离心法粗提了经 Ｍａｒｃ１４５ 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ） 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ, 经免疫电镜观察纯化病毒, 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２ ～７８ｎｍ 的病毒粒子周围。经 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定纯化病毒的滴度可达１ １６００ 以上, 并利用 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 两种方法对国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 与欧洲型（ Ｌｅｌｙｓｔａｄ） 、美洲型（ Ｖ Ｒ２３３２） 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为１４５ Ｋ Ｄ,１９２ Ｋ Ｄ 和２６３ Ｋ Ｄ, 并均能被 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 的高免血清识别, 这与国外的同类报道很相似。     

禽肺病毒发病机制比较研究

禽肺病毒（ＡＩＶ）是侵袭家禽上呼吸道的一种高度传染性的病毒，其感染火鸡引起火鸡鼻气管炎（ＴＲＴ），感染鸡则可引起肿头综合症（ＳＨＳ）。关于ＡＰＶ作为ＳＨＳ的原发病原，虽有不少争议，但众多证据显示其与鸡ＳＨＳ密切相关。一般认为，ＡＰＶ原发性感染鸡后，继发或并发细菌感染，从而出现肿头综合症。关于这一说法，在国外众多鸡场采用ＴＰＴ疫苗（如英特威的ＴＲＴ弱毒疫苗和灭活疫苗－－Ｎｏｂｉｌｉｓ ＲＴＶ ８５４     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

鸡血型系统对马立克氏病肿瘤形成的影响

采用 Ａ、 Ｂ、 Ｃ、 Ｄ 血型系统的１０ 种血型因子试剂测定了亚发雏鸡的血型，并对马立克氏病肿瘤病变与各血型因子的关系进行了研究。结果表明，在１４ 日龄感染雏鸡后的 ３０～６０ ｄ 内， Ｍ Ｄ Ｖ 对各个器官肿瘤病变形成上，不同的血型系统因子对其影响有很大的差异，其中带有 Ａ３０８、 Ｂ６９１ 因子的雏鸡对 Ｍ Ｄ Ｖ 较易感，而带有 Ｂ３６５ 因子的雏鸡抗性较强。同样实验还表明，采用鸡的（ Ｍ Ｈ Ｃ） Ｂ Ｆ Ｉ Ｖ 血型分型试剂与 Ａ、 Ｂ、 Ｃ、 Ｄ 血型试剂检测人工感染 Ｍ Ｄ Ｖ ６０ 天后存活鸡表明： Ｂ３６５ 与 Ｂ２１ 均１００％ 存在于这些鸡中，说明二者抗 Ｍ Ｄ能力有一定的相似性。说明 Ａ、 Ｂ、 Ｃ、 Ｄ血型因子可做为选择标记用于抗 Ｍ Ｄ选育。     

EDS—76病毒本地分离株实验感染鸡的研究

ＥＤＳ－７６病毒株（ＥＤＳＶ－ＩＶＲＩ／ＡＤ－８６）经口服感染产蛋鸡，虽然不引起明显的临床症状和眼观病变，但能引起子宫的严重损伤，出现蛋情品质低劣的破壳蛋和软壳蛋。感染鸡的脾脏，子宫和阴道组织内可观察到病毒的特异性免疫荧光。感染后６天，病毒经汇殖腔排出，感染后９～１０天可产生ＨＪ抗体，效价达２＾３～２＾６。     

应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

用免疫酶染色法检测Ｖｅｒｏ细胞培养物，陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的ＡＶＡＶ，并比较了ＡＶＡＶ强毒和弱毒株在组织中情况，结果发现，试验鸡于感染ＡＶＡＶ弱毒株后１－５天、感染ＡＶＡＶ强毒株后１－９天出现病毒血症；跗关节、跖趾关节、趾关节，趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出最高，存在时间也最长；在感染后３－２０天于感染鸡法氏囊、感染后３－１１天于感染鸡胸腺中检出了强毒株，在这两组织中未检出Ａ     

应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

用免疫酶染色法检测Ｖｅｒｏ细胞培养物、陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的ＡＶＡＶ，并比较了ＡＶＡＶ强毒和弱毒株在组织中的分布情况。结果发现，试验鸡于感染ＡＶＡＶ弱毒株后１～５天、感染ＡＶＡＶ强毒株后１～９天出现病毒血症；跗关节、跖趾关节、趾关节、趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出率最高，存在时间也最长；在感染后３～２０天于感染鸡法氏囊、感染后３～１１天于感染鸡胸腺中检出了强毒株，在这两组织中未检出ＡＶＡＶ弱毒株。感染８小时后的Ｖｅｒｏ细胞培养物和陈旧石蜡切片均被检出ＡＶＡＶ。     

H3亚型禽流感病毒分离株与变异株的生物学特性

本研究对分离到的Ｈ３Ｎ８禽流感病毒株（分离株Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９８,以下简称Ｊ１株）和传代过程中发生变异的变异株（Ａ／Ｃｈｉｃｋ／Ｊｉｌｉｎ／９９,以下简称Ｊ２株）进行了生物学和病理学特性的初步研究,发现在相同的时间内,Ｊ１株病毒致死鸡胚数量明显高于Ｊ２株病毒,病毒ＨＡ的滴度也明显高于Ｊ２;Ｊ１株的ＩＰＶＩ为１．４４,而Ｊ２为０．６４;毒株的致病性试验与ＳＰＦ感染鸡的器官变化表明Ｊ１组的病理学变化较Ｊ２组明显,且主要的嗜器官为肺、肝、法氏囊、胸腺、脾等主要的免疫器官;本研究还对ＳＰＦ感染鸡的病变器官进行了病原学检测、病理组织检测和电镜观察。结果表明两者存在较明显的差异。     

鸭肝炎病毒A66弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养：张小飞

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）Ａ６６侏接种于鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了ＤＨＶＡ６６毒株能够在ＣＥＦ上增殖。试验还表明,犊牛血清对ＤＨＶ增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度毒滴度测定结果绘制出了病毒在ＣＥＦ上的生长曲线。     

鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）Ａ６６株接种于鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了（ＤＨＶ）Ａ６６毒株能够在ＣＥＦ上增殖。试验还表明,犊牛血清对ＤＨＶ增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度测定结果绘制出了病毒在ＣＥＦ上的生长曲线。从生长曲线可以看出,接种后８～１６ｈ病毒开始增殖,３６～６０ｈ细胞培养物中病毒滴度达最高水平。这与（ＤＨＶ）Ａ６６死鸡胚的时间基本一致鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养@张小飞$安徽…     

黄曲霉毒素B1和乙型肝炎病毒在鸭肝炎,肝癌发生,发展过程中的意义

以ＤＨＢＶ－ＤＮＡ斑点杂交检测鸭血清中病毒，分别给予一定量的ＡＦＢ１，定期剖杀观察肝脏变化及肝癌发生，并在饲料中加硒观察了ＡＦＢ１诱癌的预防效应，实验结果ＤＨＢＶ阳性实验组的肝脏病变重于ＤＨＢＶ阴性实验组：ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１组病变重于ＤＨＢＶ阳性对照组，ＤＨＢＶ阴性加ＡＦＢ１线病变重于ＤＨＢＶ阴性对照组，而ＤＨＢＶ阳性高毒组与ＤＨＢＶ阳性高毒加硒组之间，以及ＤＨＢＶ阴性高毒组与ＤＨＢＶ阴性高毒     

动物细胞系的染色体组型分析和致癌／致瘤性

为确定供生物制品和生物工程产品生产所用动物传代细胞系有无致癌／致瘤性,对研制生产犬、貉、狐用五联病毒,即犬狂犬病病毒（ＲＶ）、犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＤＶ）、犬腺病毒２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒（ＣＰＩＶ）的活疫苗以及猫、狮、虎、豹用三联病毒,即泛白细胞减少症病毒（ＦＰＬＶ）、猫疱疹病毒１型（ＦＨＶ１）和猫杯状病毒（ＦＣＶ）的活疫苗,所用猫肾细胞系（Ｆ８１,ＣＲＦＫ）、犬肾细胞系（ＭＤＣＫ）、非洲绿猴肾细胞系（Ｖｅｒｏ,Ｖｅｒｏ２）、恒河猴肾细胞系（ＭＡ１０４）和叙利亚金…