油松成熟胚的不定芽诱导及植株再生试验

以油松成熟种胚为材料,研究不同培养基、不同激素水平及光照条件对油松不定芽诱导的影响。结果表明：在光照培养条件下,诱导油松不定芽的最佳培养基为DCR＋2.0mg/L 6-BA＋0.1mg/L NAA,诱导率达到36%。幼苗在1/2DCR＋0.1mg/L NAA＋0.1mg/L IBA＋0.1mg/L KT培养基上能生根并形成完整植株,诱导率达到25%。     

奥地利黑松离体胚培养诱导不定芽的研究

培养基种类、激素种类及浓度、培养基中蔗糖浓度对奥地利黑松离体胚培养不定芽诱导影响显著.研究表明,以3/4WPM为基本培养基,附加2.0 mg·L-16-BA、蔗糖3.0,对诱导种胚产生不定芽最为有效,诱导率56.53.NAA不利于外植体不定芽的产生.     

白皮松离体胚培养与不定芽的诱导

以白皮松成熟胚为外植体进行离体培养诱导不定芽.采用L(45)16正交试验,结果表明:基本培养基和植物生长调节剂均对白皮松胚诱导不定芽起关键作用,Ms+6-BA3.5 mg·L-1+NAA0.4 mg·L-1+IBA0.1 mg.L-1对不定芽诱导率最高,达71,增殖系数为9.激素不利于不定芽的生长,培养基中加入1的活性炭有利于不定芽的形成和生长.     

籼稻成熟胚愈伤组织诱导及不定芽分化

以不同籼稻品种的成熟胚为研究材料,通过对比实验,结果表明,采用DNB为诱导愈伤组织培养基,DMS与DNB培养基交替继代,籼稻愈伤组织诱导率高、质量较好;采用MSRc3(MS+casamino acids 500mg·L-1+gluttamine 300mg·L-1+proline 500mg·L-1+mannitol 36.4g·L-1+maltose 30g·L-1+TDZ 0.2mg·L-1+phytagel 5g·L-1pH 5.8)为分化培养基,愈伤组织不定芽分化率在90%以上,较对照MSR1提高300%～500%.     

白皮松成熟胚不定芽诱导分化技术的优化

以白皮松成熟胚为外植体进行不定芽诱导分化技术的优化,以此建立白皮松的再生体系.探讨了基本培养基、激素配比、糖浓度和不同摆放方式及不定芽继代增殖等问题.结果表明:成熟胚不定芽诱导以MS培养基最好,不定芽的平均增值系数超过4;MS中加入6-BA3～4 mg·L-1+NAA0.1～0.5 mg·L-1时不定芽的诱导率接近60%,平均分化系数可达6.0以上; 35 g·L-1的蔗糖浓度能有效的防止不定芽的玻璃化;垂直摆放有利于不定芽的分化;不定芽继代增值的最佳培养基为:MS+6-BA 0.3 mg·L-1 + NAA 0.05 mg·L-1.     

氮、磷、钾元素形态配比及浓度对油松胚培养的影响

以M S为基本培养基,以油松成熟胚为外植体进行离体培养诱导不定芽。试验和统计分析表明,硝态氮与氨态氮的配合使用有利于不定芽的诱导,NO3-/NH4 比值为4是不定芽诱导的最适氮源配比;磷素浓度为M S培养基中磷素浓度的2倍,更有利于不定芽的诱导;钾素浓度可保持M S培养基中的浓度不变。     

外植体预处理对胡桃楸成熟胚不定芽的诱导

以胡桃楸成熟胚为外植体,研究了外植体消毒及培养预处理(低温、暗培养)对胡桃楸不定芽诱导的影响。结果表明:外植体消毒处理中以紫外线直射5 min+0.1%HgCl_28 min处理效果好于其他处理,染菌率为13.45%,褐化率为22.78%。培养预处理中暗培养随着时间延长愈伤组织诱导率增加。低温处理是随着时间延长呈现抛物线形式,先升后降,低温14 d的愈伤组织诱导率最高,为42.71%。经过预处理后,在低温处理14 d的不定芽诱导率最高,为42.8%。随着种子贮存年限的延长,胡桃楸发芽率、愈伤组织诱导率、不定芽诱导率越低。     

白沙枇杷成熟胚子叶诱导不定芽再生

枇杷(Eriobotrya japonica L.)是原产中国的特色树种,分红沙、白沙两大品系.因其基因型高度杂合,童期长,传统的育种方法周期长,所以采用现代生物技术手段育种显得尤为重要.基因工程是品种改良快速和有效的育种手段,而基因工程的遗传转化操作系统的建立依赖于不同类型的外植体高频植株再生.枇杷的离体培养植株再生主要集中在幼胚、胚乳、花药以及原生质体等方面 [1～6],目前存在再生频率低下、培养难度较大等问题[7].近几年在枇杷成熟胚子叶诱导再生方面相继展开了一些研究,但诱导产生不定芽仅限于红沙系品种[8,9],白沙系品种至今未有报道.为此,本试验拟进行白沙枇杷成熟种子子叶再生不定芽研究,试图建立白沙枇杷成熟子叶再生体系,为以后通过基因工程改良枇杷品种奠定基础.     

文冠果成熟胚离体培养及细胞学研究

以文冠果成熟胚为外植体,进行了初代培养、继代培养和生根培养研究,结果表明:初代培养诱导文冠果成熟胚形成不定芽的适宜培养基是MS+2.0mg.L-16-BA+0.1mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,分化率可达94.7%;继代高生长的适宜培养基是MS+0.5mg.L-16-BA+0.5mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,培养50d后,苗高大于0.5cm芽数量平均达11.67株;生根培养的适宜培养基是WPM+1.0mg.L-1IBA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,生根率为70.30%,平均根数为3.57条。并通过石蜡切片技术,观察愈伤组织诱导、愈伤组织分化不定芽以及不定芽发育过程。     

油松同工酶位点选择研究

为筛选出国内适于油松遗传研究的同工酶位点及其有效的电泳和染色程序，该文用水平淀粉凝胶电泳方法，分析了油松１８种同工酶系统在不同电泳缓冲系统和染色系统下的表现，研究建立了新的不连续缓冲系统，获得了良好的分析效果；从中筛选了ＧＯＴ，ＬＡＰ，ＡＣＰ，ＳＫＤ，ＭＤＨ，ＡＤＨ，ＭＮＲ，ＰＧＭ和ＣＡＴ９种酶系统，有１５个可作为遗传标记的位点，统计了各位点的等位基因数量．讨论了影响同工酶分析的主要因素     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

油松雌性不育系(28号无性系)的RAPD分析

辽宁兴城油松种子园中的28号无性系是雌性不育变异体.为了探索不育原因,揭示与育性相关的分子机制,该实验运用RAPD技术对28号雌性不育系及部分可育系进行分析,目的在于寻找与28号不育系遗传背景最相近的可育系,为进一步研究提供选材依据.实验结果表明,59个10碱基的随机引物共扩增出236个条带,其中具有多态性的条带有42个,占17.8 %,证明供试油松无性系间遗传变异性较小.用NTSYS2.0软件包进行结果分析,发现可育系中15号无性系与28号不育系遗传距离较近,此组材料可用作研究油松雌性不育分子机制的对比材料.用S37号引物从28号雌性不育系基因组扩增出一条分子量为750 bp的特异DNA片段.     

油松雌性不育系(28号无性系)的RAPD分析

辽宁兴城油松种子园中的 2 8号无性系是雌性不育变异体 .为了探索不育原因 ,揭示与育性相关的分子机制 ,该实验运用RAPD技术对 2 8号雌性不育系及部分可育系进行分析 ,目的在于寻找与 2 8号不育系遗传背景最相近的可育系 ,为进一步研究提供选材依据 .实验结果表明 ,5 9个 10碱基的随机引物共扩增出 2 36个条带 ,其中具有多态性的条带有 4 2个 ,占 17 8% ,证明供试油松无性系间遗传变异性较小 .用NTSYS2 0软件包进行结果分析 ,发现可育系中15号无性系与 2 8号不育系遗传距离较近 ,此组材料可用作研究油松雌性不育分子机制的对比材料 .用S37号引物从2 8号雌性不育系基因组扩增出一条分子量为 75 0bp的特异DNA片段 .     

油松雌性不育性与胚珠发育过程中物质代谢关系的初探

该文在不育系雌配子体休眠解除期(Ⅰ)、游离核停止分裂期(Ⅱ)、败育期(Ⅲ)时,取油松可育系和不育系胚珠、珠鳞及由胚珠诱导的悬浮细胞为材料,比较了它们在重量(w)、可溶性糖(ss)、游离氨基酸(aa)和可溶性蛋白质(sp)含量上的变化.结果表明:不育系连体胚珠在Ⅰ期,ss、aa和sp低于可育系;Ⅱ期,ss、aa高于可育系,sp低于可育系;到Ⅲ期,只有aa高于可育系.不育系连体胚珠在3个发育时期,w和aa呈上升趋势,ss和 sp分别呈下降趋势.而可育系连体胚珠的鲜重(fw)、sp呈上升趋势,ss、aa呈下降趋势.在相同营养物质和植物激素条件下,相应连体胚珠发育时期离体培养的两系胚珠和悬浮细胞在fw、ss、aa、sp含量的变化上呈现与可育系连体胚珠相似的趋势,但不育系的fw、sp均高于可育系,ss、aa均低于可育系.不同育性和3个发育时期的连体及离体胚珠的fw、ss、aa、sp差异极显著,不同育性悬浮培养细胞的ss、aa、sp差异极显著.珠鳞的发育与胚珠的发育表现出相关性.我们认为,不育系胚珠内营养物质和植物激素在含量上的不足或配比上的不协调,使胚珠在 ss、aa和sp代谢上出现紊乱,可能导致了不育系胚珠的败育.      

大气O_3浓度升高对城市油松光合作用的影响

为了揭示臭氧(O3)浓度升高对城市森林光合作用的影响机理,利用开顶式气室研究了高浓度O3对沈阳城内油松光合生理特性的影响。结果表明:与对照(自然O3浓度,约45 nmol/mol)相比,在O3浓度升高(80±8)nmol/mol条件下,油松针叶的叶绿素含量降低,而类胡萝卜素含量则呈现出先升高后降低的变化趋势;净光合速率和Hill反应活力明显下降,降幅分别为18.36%~45.95%和11.35%~20.84%;羧化效率降低,降幅为7.50%~26.59%;叶绿体ATP酶活性受到抑制,但Ca2+-ATP酶活性与Mg2+-ATP酶活性的变化趋势略有差异。同时O3浓度升高抑制了油松针叶可溶性糖和淀粉含量的积累,说明O3浓度升高对油松光合作用具有较强的抑制作用。     

油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立

油松是我国特有的重要乡土针叶树种,开发合适的油松PCR-SSR引物并建立优化的反应体系,是开展油松天然群体和种子园人工群体遗传研究的基础.该研究以油松总DNA为材料,分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度以及引物浓度对PCR SSR扩增结果的影响,筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物12对,建立了稳定的、可重复的油松PCR-SSR最佳反应体系及PCR扩增参数.研究结果表明:在15 μL SSR -PCR反应体系中,样本最适宜浓度为30 ng,Mg2+的最适浓度为0.25 mmol/L,dNTP最适浓度为0.2 mmol/L,单引物的最适浓度均为250 nmol/L;Taq聚合酶在15 μL反应体系中宜加入0.375 U.统计利用所选12对引物,对辽宁兴城油松种子园内49个建园无性系进行了SSR-PCR反应,通过6%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测,每对引物扩增产物在100～250 bp之间的等位谱带数最大为10,最小为5,不同无性系间DNA谱带多态性丰富.油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立,为今后利用SSR标记技术开展油松种子园的父本分析及选择性受精研究提供了一个标准化程序和强有力的工具.      

外生菌根真菌促进油松人工幼林生长的应用研究

从不同林型下分离获得的外生菌根真菌纯培养菌株中，选择了其中劣味乳菇、赫丝膜菌、褐环乳牛肝菌、毛边滑锈伞4株优良菌处，对油松人工幼林（5年生）进行菌剂混合接种试验。结果表明：采用外生菌根真菌对油松幼林接菌，能够使土壤微生物种群数量发生变化；接菌后的土壤中的细菌、真菌、放线菌总数比不接菌的有明显的增加，其中真菌增加732.35%。对接菌油松进行菌根调查发现，接菌后的油松菌根侵染率为75％，不接菌的为20％；对连续两年接种菌剂的油松幼林调查发现，与不接菌剂的相比施用菌剂的油松地径、株高显增加。由此认为，外生菌根真菌作为一项生物接种技术对促进油松幼材的生长具有重要作用。     

油松无性系雌雄配子体的形成及胚胎发育

油松雄球花于６月下旬开始分化，小孢子发生在翌年的４月２０日左右，４月底或５月初散粉．成熟的花粉粒为４个细胞．雌球花７月中旬分化，次年４月下旬或５月上旬形成大孢子母细胞，经减数分裂后，形成大孢子．雌配子体经历游离核、细胞化、颈卵器及卵细胞形成等阶段后，５月下旬受精，从传粉到受精约需１３个月．胚胎发育包括原胚、胚胎选择及发育和胚胎成熟３个阶段，历时３个半月．不同无性系在雌雄球花发端时间和大小孢子发育进程上存在较大差异，观察的５个无性系进入同一发育阶段的时间最多可相差１０ｄ，平均变幅为一周上下．该文还对新梢生长与花芽分化、胚珠和花粉败育作了讨论．