兰州百合叶片快速繁殖体系的建立

本实验以兰州百合叶片为外植体,在相同的培养条件下,通过比较不同激素的浓度配比对外植体进行芽诱导及生根诱导效果,选择适合兰州百合快速繁殖的最佳体系,为兰州百合大规模生产提供技术支持。研究结果表明：MS＋6-BA1．0mg/L＋NAA0．5mg／L为诱导芽的最佳培养基,诱导丛生芽增殖的最佳培养基是：Ms＋6-BA1．0mg/L＋NAA0．2mg／L,I／2MS＋IBA0．1ms／L诱导生根效果最好。     

兰州百合花丝组培诱导完整植株的研究

采用组织培养技术对兰州百合花丝愈伤组织的诱导、分化、继代和增殖培养及再生苗的生根进行的研究结果表明，在不同激素组合的培养基上兰州百合花合丝均能诱导出愈伤组织，但一次性成苗能力不同。在诱导愈伤组织的形成及分化中以MS＋BA1．0mg/L NAA0.5mg/L培养基的效果最佳，其发化率达41．67％，分化苗色绿、生长健壮；继代和增殖培养基以MS＋BA1．5mg/L＋NAA0．3－0．5mg/L为好，试管苗月增殖率5倍左右，再生植株生根的理想培养基为B5＋IAA0．2mg/L，生根率达90．5％。     

兰州百合微繁的研究

以兰州百合的鳞茎增殖为基础,进行了离体微繁研究。鳞茎增殖的适宜激素组合为0.9mg/LBA 0.1~0.2mg/LNAA。培养基中总离子浓度和氮浓度过高或过低都会影响兰州百合增殖,3种基本培养基N6、MS、和1/2MS以N6增殖效果最好。适当提高糖浓度对鳞茎增殖有促进作用,在各处理中以蔗糖浓度为40g/L增殖倍数高。兰州百合的适宜生根培养基为1/2MS IBA0.1mg/L,生根率达100%,生根苗移栽成活率达90%。     

兰州百合外植体的建立

本试验以兰州百合带腋芽的嫩茎为外植体,通过无菌芽诱导、丛生芽增殖及芽苗生根的培养,对兰州百合进行组织培养及快速繁殖技术研究。研究表明：选用6-BA和NAA两种不同浓度的植物生长调节剂对不定芽进行诱导培养,筛选出诱导不定芽的适宜培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L,分化率可达88%,平均苗高为3.1cm;选用6-BA和IBA两种不同浓度的植物生长调节剂进行继代增殖培养时,筛选出丛生芽增殖的适宜培养基为MS+IBA0.3mg/L+6-BA0.5mg/L,增殖倍数可达3.4,平均苗高4.6cm;选用IAA和IBA这两种不同浓度的植物生长调节剂进行诱导生根培养,筛选出生根培养的适宜培养基为1/2MS+IAA0.1mg/L+IBA0.2mg/L,生根率90%,平均生根数3.2条。     

毛百合鳞片组织培养再生体系的建立

以毛百合鳞片为外植体,比较了不同激素种类及浓度对鳞片小鳞茎等诱导的影响,旨在建立毛百合鳞片组织培养再生体系.结果表明:最佳不定芽诱导培养基为MS+ 0.5 mg/L NAA+ 0.5 mg/L 6-BA,诱导率达到86.7％,分化系数6.77;最佳增殖培养基为MS+ 0.1 mg/L NAA+ 1.0 mg/L 6-BA,增殖系数7.8;毛百合小鳞茎生根较容易,最佳生根培养基为1/2MS +0.3 mg/L NAA,生根率91.7％,平均生根数7.20.     

兰州百合连作土壤水浸液自毒作用研究

【目的】探讨兰州百合(Lilium davidii var.unicolor salisb)连作土壤水浸液对自身幼苗生长的障碍因素及其作用机制。【方法】设置蒸馏水(CK)及正茬、连作2年、连作4年兰州百合根际土壤水浸液各50,100,200,300 mg/mL,共13个处理,以兰州百合种球为受试对象,测定不同条件下兰州百合幼苗生长、抗氧化酶活性、渗透调节物质及细胞膜透性的变化,并利用GC-MS技术分析各处理土壤中存在的主要自毒物质。【结果】正茬、连作2年及连作4年兰州百合根际土壤水浸液对兰州百合幼苗的生长均存在"低促高抑"现象,且抑制作用随连作年限的延长而增强。随水浸液质量浓度的增加,兰州百合幼苗CAT和SOD活性逐渐升高,POD活性先上升后下降,MDA含量、相对电导率、脯氨酸及可溶性糖含量的变化呈不断上升趋势,当水浸液质量浓度上升至300 mg/mL时,3个处理中各指标的上升或下降程度与对照相比均达显著差异水平(P0.05)。兰州百合正茬、连作2年及连作4年根际土壤中分别鉴定出9,15和17种化合物,主要包括2,3-丁二醇、1,2,3-三甲苯、邻苯二甲酸二丁酯、对苯二甲酸二辛酯、抗氧剂2246等化合物,其中大部分为自毒物质。【结论】兰州百合正茬、连作2年及连作4年根际土壤水浸液质量浓度达到300 mg/mL时,对其幼苗的生长会产生显著抑制作用。连作土壤中存在的自毒物质可以改变兰州百合植株体内的抗氧化酶活性,破坏细胞膜结构和功能,抑制兰州百合植株的生长,是导致兰州百合连作障碍发生的重要原因之一。     

兰州百合组培快繁体系的构建

以兰州百合新鲜鳞茎为外植体,选择MS和1/2 MS培养基为基本培养基,采用正交设计研究不同消毒剂组合对外植体存活率、不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导率和发芽率的影响;并用响应面法优化不同激素组合对生根率的影响。结果表明:(1)最佳消毒剂组合为75%乙醇消毒20 s+2%次氯酸钠溶液浸泡10 min,外植体成活率可达96.30%。(2)愈伤组织诱导最佳培养基配方为MS+0.3 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA,诱导率可达96.33%。(3)促进发芽的最佳培养基配方为MS+0.3 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA,发芽率可达98.00%。(4)促进生根的最佳培养基配方为1/2 MS+0.5 mg·L^-1 NAA+3 mg·L^-1 6-BA+2 mg·L^-1活性炭,生根率可达94.00%。本研究建立的组培快繁体系可用于兰州百合的快速大量繁殖,可为兰州百合组培苗的工厂化生产提供参考。     

有斑百合的组织培养及无性系建立的研究

以有斑百合嫩茎为材料,进行了愈伤组织培养的诱导、愈伤组织及不定芽的分化、试管苗的生根、移栽、扦插和移植的研究,建立起有斑百合的无性系.结果证明:MS BA 0.4 mg/L 2,4-D 1.6 mg/L是诱导嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;1/2 MS AgNO3 0.4 mg/L BA 0.5 mg/L是嫩茎愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基;1/2 MS IAA 0.8 mg/L是生根培养的理想培养基;炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质;移植到山坡上的试管苗具有生长旺盛、根系发达的特点.     

索邦和西伯利亚百合的离体再生体系建立

【目的】确定索邦（Sorbonne）和西伯利亚（Siberia）百合的离体再生体系适合的诱导培养基、增 殖培养基、生根培养基以及最佳转化受体系统。【方法】选用索邦和西伯利亚百合的鳞茎球作为外植体,比较 它们在添加不同激素配比的培养基中的生长状况,得出两种百合诱导愈伤组织和不定芽、继代增殖、诱导生根 培养基和对卡那霉素敏感的最适条件。【结果】索邦百合最佳诱导培养基是 MS+2,4-D 1.5~2.0 mg/L,西伯利亚 百合最佳诱导培养基为 MS+2, 4-D 1.0~1.5 mg/L;两种百合的最佳继代增殖培养基均为 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L：两种百合的最佳生根培养基为 1/2MS+NAA 0.2 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L;筛选转化植株时,质量浓度为 150 mg/L 的卡那霉素足以抑制非转化细胞或细菌的生长。【结论】为东方百合品种种球工厂化生产及遗传转化再 生体系充实理论依据。     

野生泸定百合鳞片的组织培养技术

为野生泸定百合资源的保护及开发应用提供依据,以其鳞片为外植体,观察其不定芽的诱导、增殖以及生根培养情况。结果表明:野生泸定百合鳞片用0.1%升汞消毒15 min,效果较好;MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L为野生泸定百合鳞片最佳不定芽诱导培养基,平均每鳞片分化芽数达5.4个;MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.05mg/L为鳞片最佳增殖培养基,增殖系数达7.66;1/2MS+IBA 1.0mg/L为鳞片最佳生根培养基,生根率达95.2%,平均根数5.3条,平均根长3.9cm。     

兰州百合快速繁殖研究

【目的】优化兰州百合组织培养体系,提高其植株再生率,建立高频植株再生体系。【方法】采用正交试验设计,以鳞片为外植体,以MS和1/2MS培养基为基本培养基,附加不同浓度NAA（0.2～1.0mg/L）、6-BA（0.5～2.0mg/L）、KT（0.1～1.0mg/L）、IBA（0.2～1.0mg/L）、IAA（0.2～1.0mg/L）,对兰州百合进行鳞茎诱导、增殖和生根培养,筛选最佳激素配比。【结果】6-BA浓度过低或过高均不利于小鳞茎形成,当1.0mg/L6-BA与0.2～1.0mg/LNAA配比时,鳞茎诱导率和平均生成鳞茎数较高;随着NAA浓度的增加,平均生成鳞茎数不断增加,其中以1.0mg/L6-BA＋1.0mg/LNAA组合的平均小鳞茎最多,为5.9个。与0.5～1.0mg/LKT＋0.2NAAmg/L组合相比,添加0.5～1.5mg/L6-BA＋0.5～1.0mg/LKT或0.2NAAmg/L组合的培养基更利于芽增殖,但其丛芽长势较弱,其中以添加0.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA培养基的丛芽长势和小鳞茎长势较好,平均分化鳞茎较多。在以MS、1/2MS为基本培养基、分别添加0.2～1.0mg/LIAA或IBA的培养基中,随着IAA或IBA浓度的升高,鳞茎生根率不断降低,根质量不断下降,而平均根数和根长表现有所不同。从根的质量来看,MS培养基的根质量不如1/2MS培养基;而在1/2MS培养基中,1/2MS与IBA组合优于与IAA组合。【结论】鳞茎诱导的最佳培养基为MS＋1.0mg/L6-BA＋NAA0.5～1.0mg/L,不定芽增殖的最适培养基为MS＋0.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA,最佳生根培养基为1/2MS＋0.2mg/LIBA,生根效果最好,生根率为100.0%,根中等长度、粗壮,质量最好。     

兰州百合快速繁殖研究

【目的】优化兰州百合组织培养体系,提高其植株再生率,建立高频植株再生体系。【方法】采用正交试验设计,以鳞片为外植体,以MS和1/2MS培养基为基本培养基, 附加不同浓度NAA（0.2~1.0 mg/L）、 6-BA（0.5～2.0 mg/L）、KT（0.1～1.0 mg/L）、IBA（0.2~1.0 mg/L）、IAA（0.2～1.0 mg/L）, 对兰州百合进行鳞茎诱导、增殖和生根培养,筛选最佳激素配比。【结果】6-BA浓度过低或过高均不利于小鳞茎形成,当1.0 mg/L 6-BA与0.2～1.0 mg/L NAA配比时,鳞茎诱导率和平均生成鳞茎数较高;随着NAA浓度的增加,平均生成鳞茎数不断增加,其中以1.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA组合的平均小鳞茎最多,为5.9个。与0.5～1.0 mg/L KT+0.2 NAA mg/L组合相比,添加0.5～1.5 mg/L 6-BA+0.5～1.0 mg/L KT或0.2 NAA mg/L组合的培养基更利于芽增殖,但其丛芽长势较弱,其中以添加0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基的丛芽长势和小鳞茎长势较好,平均分化鳞茎较多。在以MS、1/2MS为基本培养基、分别添加0.2～1.0 mg/L IAA或IBA的培养基中,随着IAA或IBA浓度的升高,鳞茎生根率不断降低,根质量不断下降,而平均根数和根长表现有所不同。从根的质量来看,MS培养基的根质量不如1/2MS培养基;而在1/2MS培养基中,1/2MS与IBA组合优于与IAA组合。【结论】鳞茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+NAA 0.5～1.0 mg/L,不定芽增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L IBA,生根效果最好,生根率为100.0%,根中等长度、粗壮,质量最好。     

兰州百合鳞茎再生繁殖体系的建立

[目的]建立兰州百合鳞茎快繁体系,并测定丛芽与鳞茎的淀粉含量,为系统研究兰州百合鳞茎离体再生过程中淀粉的代谢奠定基础.[方法]以兰州百合鳞片为外植体,探讨不同消毒剂组合、激素与蔗糖用量对鳞茎诱导培养过程的影响.[结果]随着75％乙醇（10～30 s）与0.1％升汞消毒时间（7～10min）的延长,外植体鳞片污染数不断下降,但诱导芽数表现为先上升后下降的趋势,以75％乙醇消毒30 s＋0.1％升汞消毒10 min组合的消毒效果最好,外植体污染率和芽诱导率分别为12.33％和91.00％.使用1000倍多菌灵处理10 min后,再使用75％乙醇30 s ＋0.1％升汞7～13 min组合进行消毒,可明显降低鳞片污染率3.00％～5.00％（绝对值）.在MS＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂培养基中添加6-BA 0.5～1.0 mg/L,可显著提高平均芽诱导数;在MS＋5.0 g/L琼脂培养基中添加30.0～60.0 g/L蔗糖,对外植体芽诱导无明显影响;培养基MS＋1.0 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂是外植体芽诱导的最适培养基.MS＋0.50 mg/L 6-BA＋0.03 mg/L NAA＋30.0 g/L蔗糖＋5.0 g/L琼脂为适宜增殖培养基,芽增殖系数达最高,为3.67.在MS培养基中添加60.0～90.0 g/L蔗糖可明显促进鳞茎的形成,以添加90.0 g/L蔗糖处理的鳞茎重量最高（99.30mg）.小鳞茎的淀粉质量分数比丛芽增加62.34％.[结论]以鳞片为外植体建立的兰州百合鳞茎再生繁殖体系具有可行性;在丛芽至小鳞茎形成阶段淀粉含量明显升高,小鳞茎的形成与淀粉含量升高密切相关.     

兰州百合与川百合试管苗结鳞茎研究

以兰州百合与川百合组培苗为材料进行了试管内结鳞茎的诱导研究，结果表明：兰州百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1／2MS＋0．5mg／LIBA，平均每株结鳞茎数可达3．1个，鳞茎平均直茎为1．0cm，鳞茎形成部位在试管苗的底部。川百合试管内诱导形成鳞茎的最适培养基为1／2MS＋1．0mg／LIAA，平均每株结鳞茎数为1个，鳞茎平均直茎为0．7cm，鳞茎形成部位在试管苗的顶端。     

东北百合鳞片离体培养研究

以东北百合(Lilium distichum Nakai)的鳞片为外植体进行离体培养,探讨不同外源激素水平对其小鳞苇诱导、增殖与不定根形成的影响,建立了东北百合鳞片再生体系.结果表明:MS+BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.5～1.0mg·L~(-1)培养基的不定芽诱导和增殖效果最好,诱导率为80.0%以上,增殖系数为4.1～4.6;1/2MS+NAA0.5～1.0mg·L~(-1)或1/2MS+IBA0.1mg·L~(-1)培养基的生根效果最好,生根率为96.0%;试管苗在草炭+珍珠岩(1:1)基质中扦插成活率为96.0%.     

不同外植体对兰州百合组织培养的影响

以兰州百合的鳞片、叶片、根的不同部位为外植体成功获得再生植株,并建立了快速无性繁殖体系.在组织培养中不同外植体不同部位在培养时诱导分化能力是不同的.本试验以MS为基本培养基加不同的植物生长调节剂配比进行培养,发现不同外植体不同部位分化能力存在差异,其差异由强到弱为:鳞片、根、叶片.同时鳞片不同部位的分化能力由强到弱为:下＞中＞上,叶片不同部位的分化能力由强到弱为:叶片基部＞中部＞叶尖,根的不同部位分化能力由强到弱为:根基部＞根尖＞根中部.     

新疆百合鳞片离体培养研究

以新疆百合鳞片为外植体,建立新疆百合鳞片组织培养再生体系。结果表明,新疆百合鳞片最佳消毒方法为70%酒精处理30 s后0.1%HgCl_2浸泡15 min;最适诱导培养基为MS+1 mg·L~(-1)6-BA+1 mg·L~(-1)NAA;不同部位鳞片诱导率为内层中层外层、中部下部上部。最适增殖培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,增殖系数达3.46;最适生根培养基为1/2 MS+0.2 mg·L~(-1)NAA+0.2 mg·L~(-1)IBA,生根率达100%。     

4 种观赏百合的组培快繁技术研究

以观赏百合莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个品种的鳞片为材料进行组培快繁技术研究。结果表明:用75%酒精消毒10 s,0.1%升汞消毒10 min,再用无菌水清洗5次的灭菌效果最好,污染率最低;MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L为最佳诱导培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为最佳增殖培养基;MS+IBA 0.5 mg/L为最佳生根培养基;蛭石∶黄心土=1∶1为最佳移栽基质。整套组培快繁技术在莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个观赏百合品种中均适用。