奶牛TLR2基因遗传变异与乳房炎体细胞评分的相关研究

选用中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛共207头奶牛为研究对象,采用PCR-RFLP和创造酶切位点RFLP（CRS-RFLP）技术对其TLR2基因进行多态性研究,发现TLR2基因第2外显子上T/G,G/A和G/A 3个突变,分别是EcoRⅤ,HaeⅢ和HhaⅠ限制性内切酶的酶切多态位点,其中T/G突变引起蛋白质氨基酸天冬氨酸/谷氨酸的变化。对3个酶切多态位点进行基因型分析,χ^2检验表明：中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点都达到了Hardy-Weinberg平衡。中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点PIC为最高。运用SAS9.0软件,采用最小二乘拟合一般线性模型分析了3个酶切多态位点与中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛体细胞评分（SCS）的关系,结果表明：在这3个酶切多态位点中,只有EcoRⅤ酶切多态位点BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体（P〈0.05）,说明BB基因型可能为抵御乳房炎的有利基因型。     

奶牛TLR2基因EcoR V酶切多态性与体细胞评分的关联分析

利用PCR-RFLP技术对中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛3个奶牛品种207头个体的TLR2基因进行多态性分析.结果表明：3个奶牛群体的扩增片段为448 bp,PCR产物经限制性内切酶EcoRV酶切后均表现出中度多态,其中中国西门塔尔牛PIC为最高,且3个奶牛品种在该基因座位均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P＞0.05）.最小二乘值表明：该酶切多态位点对3个奶牛品种SCS的影响达到了显著水平（P＜0.05）,且BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体（P＜0.05）,说明BB基因型为抗乳房炎的有利基因型.     

奶牛TLR2基因EcoRⅤ酶切多态性与体细胞评分的关联分析

利用PCR-RFLP技术对中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛3个奶牛品种207头个体的TLR2基因进行多态性分析。结果表明:3个奶牛群体的扩增片段为448bp,PCR产物经限制性内切酶EcoRⅤ酶切后均表现出中度多态,其中中国西门塔尔牛PIC为最高,且3个奶牛品种在该基因座位均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。最小二乘值表明:该酶切多态位点对3个奶牛品种SCS的影响达到了显著水平(P<0.05),且BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体(P<0.05),说明BB基因型为抗乳房炎的有利基因型。     

CXCR2基因多态性与奶牛体细胞评分的关联性

利用基因测序技术对CXCR2基因进行了多态性筛查,结果发现存在+612A→G、+684G→A、+777G→C、+855G→A、+858C→A和+861G→A等6个突变位点,其中+855为新发现的SNP。6个位点都处于连锁不平衡状态,+684与+861位点之间和+777与+858之间的相关程度高(r2分别为0.635和0.541)。基因效应模型分析表明:+855和+861位点不同基因型对奶牛体细胞评分的影响没有显著性差异(P0.05)。+612位点不同基因型对体细胞评分的影响具有显著性差异(P0.05),AA基因型个体的体细胞评分最低为4.19,乳房炎抗性最强。+777位点不同基因型对体细胞评分的影响差异性显著(P0.05),GG基因型个体体细胞评分最低为4.17,对乳房炎的抗性较强,说明该基因+612和+777SNPs可作为奶牛乳房炎抗性分子标记位点。     

荷斯坦母牛TLR6基因多态性及其与体细胞评分关系的研究

本研究旨在阐明Toll样受体6(TLR6)基因的多态性与荷斯坦母牛乳房炎抗性之间的关系.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术检测208头荷斯坦母牛TLR6基因多态性,用最小二乘法分析该基因多态性与荷斯坦母牛钵细胞评分(somatic cell score,SCS)的关系.结果发现,TLR6基因mRNA序列中存在T853A、G855A、G1793A、C1859A、G1934A和A1980G 6个多态位点,其中T853A突变使编码氨基酸由缬氨酸变为谷氨酸,G855A突变使天冬氨酸变为天冬酰胺,A1980G突变使异亮氨酸变为缬氨酸.T853A和G855A突变位点经SSCP检测发现3种基因型AA、AB和BB,其频率分别为0.308、0.490和0.202;X~2检验表明荷斯坦母牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡;BB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AB和AA基因型所对应的值(P<0.01);AB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AA基因型所对应的值(P<0.01).G1793A突变位点经BsiY Ⅰ酶切产生2种基因型CC和CD,其频率分别为0.332和0.668;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡,CC和CD基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).C1859A突变位点经BstX Ⅰ酶切产生2种基因型EE和EF,其频率分别为0.178和0.822;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;EE和EF基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).G1934A突变位点经BsiY Ⅰ酶切产生2种基因型GG和GH,其频率分别为0.356和0.644;荷斯坦母牛在该位点偏离了Hardy-Weinberg平衡;GG和GH基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05).A1980G突变位点经Bcl Ⅰ酶切产生3种基因型II、IJ和JJ,其频率分别为0.260、0.567和0.173,荷斯坦母牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡;JJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于IJ和II基因型所对应的值(P<0.01);IJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于II基因型所对应的值(P<0.01).对于奶牛乳房炎抗性,BB和JJ是有利基因型,AA和II是不利基因型.本研究结果初步表明TLR6基因T853A和G855A突变位点的B等位基因以及A1980G突变位点的J等位基因是提高奶牛乳房炎抗性的2个潜在的DNA标记.     

牛TLR4基因的遗传多态性与乳房炎的关联分析

TLR4通过识别病原体而激活免疫细胞，在先天免疫和适应性免疫防御中起着重要作用。以中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛共397头为研究对象，利用创造酶切位点PCR法扩增243bp的目的片段，通过限制性内切酶HinfⅠ酶切来检测TLR4第3外显子的多态性，结果发现扩增产物的27bp处C到T的突变使得多态位点产生，编码的氨基酸由苏氨酸变为异亮氨酸。A、B2个等位基因在3个群体中均有分布，A等位基因占优势（大于78％），经χ^2适合性检验，三河牛在该位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P〈0．05）。运用SAS8．2软件采用最小二乘法拟合线性模型，将该基因座不同基因型与奶牛乳房炎进行了关联分析，结果表明：AA基因型为乳房炎抗性基因型（P〈0．05），A等位基因为乳房炎抗性的有利基因。     

奶牛隐性乳房炎抗性相关基因多态性与体细胞评分关联分析

为了探讨中国荷斯坦奶牛隐性乳房炎相关基因NOD2c.4500、CXCR1+777、SPP1-1301、 TLR4+2021、CXCR2+777、 BRCA1c.46126单核苷酸多态性(SNPs)位点与体细胞评分的关联性，试验利用PCR-SSCP及Sanger测序技术对135头中国荷斯坦奶牛的6个SNPs位点进行基因分型，分析SNPs位点与中国荷斯坦奶牛体细胞评分的相关性，并运用多座位外显方差分析法(MPVA)对不同多基因聚合与奶牛体细胞数的相关性进行研究。结果表明：在6个SNPs位点上均检测到碱基突变，在NOD2c.4500 C>A、CXCR1+777 G>C、SPP1-1301 G>A、TLR4+2021 C>T位点上均检测到3种基因型，其中优势基因型分别为CA、CC、AA、CC,优势等位基因分别为A、G、A、C。在CXCR2+777 G>C、BRCA1c.46126 G>T位点上均检测到2种基因型，其中优势基因型均为GG,优势等位基因均为G。SPP1-1301 G>A、TLR4+2021 C>T位点均处于低度多态(PIC<0....     

患隐性乳房炎的奶牛乳汁pH变化与体细胞关系的研究

采集新疆垦区奶牛乳样若干份(604份)，利用奶牛隐性乳房炎诊断液、光学显微镜，以及pH211酸度计测定乳汁的pH与体细胞的含量，确定奶牛隐性乳房炎与牛乳pH的变化关系。结果表明，牛乳pH的变化与体细胞和炎性细胞的含量呈正相关，即泌乳奶牛乳汁的正常pH在6．4～6．6之间；体细胞在20万～50万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．6～6．8之间；体细胞在50万～150万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在6．8～7．0之间；体细胞在150万～500万个／ml区间时，奶牛乳汁pH在7．0～7．2之间；体细胞大于500万个／ml时，奶牛乳汁pH在7．2以上。     

牛乳电导率值与体细胞数相关性的研究

试验以随机采集的奶牛乳样为研究对象，对乳样的电导率值与体细胞数进行了测定与分析。结果显示，体细胞数在50万个/ml以下时，电导率值在4．40～4．75ms／cm之间；体细胞数在50万～500万个／ml时，电导率值在5．20～9．00ms／cm之间；体细胞数在500万／个ml时，电导率值在9．00ms／cm以上。结果表明，牛乳电导率的变化与体细胞数呈正相关，可利用牛乳体细胞数与电导率变化的相关关系判断奶牛隐性乳房炎发病程度。     

中国荷斯坦牛乳铁蛋白基因外显子1多态性与泌乳性状及体细胞评分的关联分析

利用PCR-SSCP技术对中国荷斯坦牛的乳铁蛋白(lactoferrin,LF)基因外显子1的遗传多态性进行了检测,利用最小二乘均数对LF基因外显子1多态位点与测定日产奶量、测定日乳脂率、测定日乳蛋白率和305 d校正产奶量及测定日体细胞评分5个性状进行了关联分析。结果显示:外显子1存在133 G>C突变,共检测到了3种基因型GG、GC和CC,频率分别为0.571、0.129和0.300。该突变位点对测定日产奶量影响达到极显著水平(P<0.01),对体细胞评分(SCS)的影响达到显著水平(P<0.05)。多重比较发现,GG型测定日产奶量极显著高于CC型(P<0.01),SCS显著高于GG型和CC型(P<0.05)。因此,LF基因的133 G>C位点的GG基因型为乳房炎抗性的优良基因型,可作为分子标记应用于中国荷斯坦牛乳房炎抗性筛选。     

Association of toll‐like receptor 2 polymorphisms with somatic cell score in Xinjiang Brown cattle

This study aims to identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) and haplotypes in the TLR2 gene, and analyze the association of SNPs or haplotypes and somatic cell scores in 151 Xinjiang Brown cattle and 138 Holsteins to evaluate the role of TLR2 during intramammary infections. TLR2 coding region was amplified by PCR and screened for SNP sequencing. Genotypes and frequencies of SNPs were identified. Finally, the associations of genotypes or haplotypes and somatic cell scores (SCS) were analyzed. The results showed that: (i) 15 SNPs (E+653, E+945, E+978, E+1010, E+1250, E+1688, E+1707, E+1779, E+1782, E+1891, E+1995, E+2025, E+2055, E+2214 and E+2295) were observed and detected from 289 cows; (ii) distribution of the 14 SNPs were significantly different from Xinjiang Brown cattle and Holstein (P < 0.001) except for the E+945 (P > 0.05); (iii) in 11 SNPs (E+945, E+978, E+1010, E+1688, E+1707, E+1779, E+1782, E+1995, E+2025, E+2055 and E+2214), the SCS of AB genotype was lower than AA (P < 0.05) in Xinjiang Brown cattle; and (iv) haplotypes composed of the above‐mentioned 11 SNPs were constructed. The SCS of cattle with Hap5 was lower than that of Hap3 (P < 0.05). This suggests that Hap5 might play an important role in sub‐mastitis resistance in Xinjiang Brown cattle.     

中国荷斯坦牛Toll样受体4基因的遗传多态性与体细胞评分的关联分析

试验旨在研究中国荷斯坦牛Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因的遗传多态性及其与体细胞评分(somatic cell score,SCS)的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种。利用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛TLR4基因进行多态性检测,用最小二乘均数法对TLR4基因的多态位点与SCS进行相关分析。结果发现,试验共检测到2个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs),TLR4基因5'侧翼区存在SNP -226 G>C突变,经PCR-RFLP检测发现3种基因型:GG、GC和CC,基因型频率分别为0.208、0.482和0.310;外显子3存在SNP 1760 C>T突变,经PCR-SSCP检测发现3种基因型:CC、TC和TT,基因型频率分别为0.738、0.225和0.007,以上2位点均偏离Hardy-Weinberg 平衡。对于SNP -226 G>C位点,基因型个体的SCS差异不显著;对于SNP 1760 C>T位点,CC基因型个体的SCS最小二乘均值极显著低于TT和TC基因型个体(P<0.01)。SNP 1760 C>T的CC基因型对于中国荷斯坦牛的SCS有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于奶牛乳房炎抗性筛选。     

新疆地区荷斯坦牛乳中体细胞评分对产奶量与乳成分的影响

为了探究牛乳中体细胞评分（SCS）对日产奶量（DMY）和乳成分之间的关系,了解奶牛乳房的健康状况,本研究使用新疆昌吉地区规模化牛场共2 338头荷斯坦牛的33 290条DHI记录和生产性能数据,将DHI记录中的体细胞数（SCC）转化为SCS后分析SCS对DMY与乳成分的影响。运用SAS 9.2软件对产奶量和乳成分进行最小二乘方差分析及多重比较,并对SCS与产奶量和乳成分进行相关性分析,其固定效应主要包括SCS、场、年份、季节及胎次效应。结果表明：SCS、场效应、年份效应、季节效应和胎次效应均对DMY与乳成分有极显著影响（P<0.01）。随着SCS的增加,DMY和乳糖率（MLP）呈下降趋势,当SCS为0水平,且SCC为9×10³~17×10³个/mL时,DMY和MLP极显著高于其他SCS水平（P<0.01）;MFP和MPP呈上升趋势,当SCS为9水平,且SCC为4 529×10³~4 904×10³个/mL时,MFP和MPP最高。相关性分析结果显示,SCS与DMY、MLP呈极显著负相关（P<0.01）;SCS与MFP、MPP呈极显著正相关（P<0.01）。因此,通过分析SCS对产奶量和乳成分间的关系,可为规模化牧场奶牛日常管理提供科学依据,预防和降低患乳房炎的风险。     

呼和浩特近郊奶牛乳样体细胞分与乳成分相关性分析

本试验旨在研究呼和浩特近郊两个奶牛场荷斯坦奶牛体细胞数(somatic cell count,SCC)变化规律及体细胞分(somatic cell score,SCS)与乳成分的相关性。试验按常规方法采集奶样,并借助Bentley FTS/FCM 400 Combi奶牛生产性能测定仪测定奶样,然后对所得数据用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果显示,奶牛各胎次中SCC在第1胎时最低(P<0.01),在第7胎时最高(P<0.01);随着泌乳天数的增加奶样SCC亦明显增加;奶样SCC<100×10³/mL到SCC>1000×10³/mL的过度中,奶牛日产奶量和奶样乳糖含量明显降低(P<0.01),分别降低了6.07 kg(22.97%)和0.40%(8.06%),而奶样乳脂率和乳蛋白率显著升高(P<0.01),分别增加了0.32%(8.31%)和0.26%(8.05%)。秋、冬季奶样乳脂率要明显高于春、夏季奶样乳脂率(P<0.01),秋季奶样乳蛋白率最高,春季奶样乳蛋白率最低;春季奶样乳糖含量最高,秋、冬季奶样乳糖含量相对较低;冬季奶样SCC最高,而秋季奶样SCC则最低。SCS与日产奶量(-0.172)和乳糖含量(-0.283)之间存在极显著负相关(P<0.01),SCS与乳脂率(0.034)和乳蛋白率(0.111)之间存在极显著正相关(P<0.01)。因此,随着胎次增高,SCC有逐渐升高趋势;随着SCC的升高,日产奶量和乳糖含量有降低趋势,而乳脂率和乳蛋白率有升高趋势;季节对乳成分和SCC均有不同程度的影响;SCC对奶牛日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、乳糖含量均有明显影响。     

4个品种鸡Toll样受体4基因第2内含子的多态性分析

本研究采用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测了4个品种鸡(仙居鸡、白耳鸡、清远麻鸡和安卡鸡)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)基因第2内含子的单核苷酸多态性。结果表明,4个品种鸡TLR4基因的第2内含子上均发现了G1894C的突变,共产生了AA、AB和BB 3种基因型,4个品种鸡该位点的多态信息含量(PIC)分别为0.570、0.597、0.583和0.588,均属于高度多态性,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);4个品种鸡G1894C多态位点的基因型在感染鸡白痢沙门氏菌阳性组和阴性组间的分布差异均不显著(P>0.05);G1894C多态位点在仙居鸡与白耳鸡2个品种间基因型分布差异极显著(P<0.01)。     

牛ACAA1和ACAA2基因多态性及其与生产性状的关联分析

以鲁西牛、秦川牛、安格斯、海福特和西门塔尔与蒙古牛杂交牛5个品种共178头为试验材料,通过等位基因特异性聚合酶链式反应（AS-PCR）技术,发现牛乙酰辅酶A酰基转移酶1（ACAA1）基因的A1066G（GenBank登录号：EF576938）和A1452G（GenBank登录号：EF576938）2个单核苷酸多态（SNP）,其中A1066G突变位于外显子9,是同义突变,A1452G突变位于3′非翻译区（UTR）;发现牛乙酰辅酶A酰基转移酶2（ACAA2）基因的C33119T（GenBank登录号：EF583005）单核苷酸多态,位于内含子8上。对ACAA1基因的2个SNP进行分析没有发现单倍型。2个基因多态性与牛生长性状的关联分析表明：ACAA1基因A1066G突变位点的3种基因型间眼肌面积差异显著（P〈0.05）,AA型最高,AG型次之,GG型最低;ACAA1基因A1452G突变位点的3种基因型间眼肌面积差异显著（P〈0.05）,GG型最高,AG型次之,AA型最低;ACAA2基因C33119T突变3种基因型间日增重差异极显著（P〈0.01）,其中CT型最高,TT型次之,CC型最低;眼肌面积差异显著（P〈0.05）,其中CC型最高,TT型次之,CT型最低。     

PLIN2基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达规律及基因多态性与肉质性状的关联分析

试验旨在研究围脂滴蛋白2（PLIN2）基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况及基因多态性与肉质性状的关联分析。采用实时荧光定量PCR检测PLIN2基因mRNA在不同月龄（6~60月龄）秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达情况;选取18~24月龄的健康秦川肉牛536头,采集血样并测定肉质性状指标,研究PLIN2基因单核苷酸多态性（SNP）和氨基酸突变,并与秦川肉牛肉质性状进行关联分析。结果发现,PLIN2基因在秦川肉牛皮下脂肪组织中的表达量呈先上升后下降趋势,18月龄时表达量最高。测序共发现9个SNPs位点,其中g.C7919>T位点不同基因型肌内脂肪含量差异显著（P<0.05）,CT基因型显著高于TT和CC基因型;g.C7933>T位点不同基因型背膘厚及肌内脂肪含量均呈显著差异（P<0.05）,CC和CT基因型个体背膘厚显著高于TT基因型,CT基因型个体肌内脂肪含量显著高于TT和CC基因型;g.G8015>C位点CC基因型个体肌内脂肪含量显著高于GG和GC基因型（P<0.05）;3'UTR区域g.T8496>C位点TC基因型个体肌内脂肪含量显著高于CC和TT基因型（P<0.05）;g.C8578>T位点TT基因型个体背膘厚显著高于CT和CC基因型（P<0.05）。综上,PLIN2基因对秦川肉牛肉质性状发育有一定影响,可作为秦川肉牛现代分子选育的候选参考基因。     

牛DGAT2基因第6内含子MspI-RFLPs和TaqI-RFLPs及其与牛经济性状相关性研究

利用PCR-RFLPs方法分析牛DGAT2基因第5、6和7内含子内部的MspI和TaqI等11种酶切多态性,并在第6内含子检测到MspI-RFLPs和TaqI-RFLPs 2个多态位点。分析表明,该MspI-RFLPs普遍存在于鲁西牛、晋南牛、秦川牛、利木赞×鲁西牛、西门塔尔×延边牛、夏洛来×延边牛、安格斯×延边牛和三河牛、中国荷斯坦牛等9个试验群体中,TaqI-RFLPs只在鲁西牛、晋南牛和秦川牛3个地方品种和利木赞与鲁西牛的杂交群体中检测到,而且等位基因B(T碱基)在除鲁西牛外的群体中分布频率很低。统计分析表明,MspI-RFLPs与肉牛的体脂没有相关,但显著影响屠宰率,AA型个体的屠宰率显著高于AB和BB型(P<0.05)。DGAT2基因第6内含子MspI酶切多态性与三河牛群体平均乳脂率和平均干物质含量有极显著或显著的相关性(P<0.01和P<0.05),AA型个体的平均乳脂率和平均干物质含量均高于BB型个体的均值,但在荷斯坦牛群体中却没有得到相同的结果。研究分析了鲁西牛中TaqI-RFLPs的AA型与AB型个体之间屠宰性能的差异,结果表明这2种基因型与鲁西牛的屠宰性能没有显著的相关(P>0.05),有待在更大的鲁西牛群体中检验TaqI-RFLPs是否影响屠宰性状。