海兰褐蛋鸡盲肠中乳酸菌的分离与鉴定

试验旨在从海兰褐蛋鸡盲肠食糜中分离筛选优质乳酸菌。试验采集健康的海兰褐蛋鸡盲肠食糜,将内容物置于无菌生理盐水中,过滤后倍比稀释,采用平板划线分离法进行划线分离,反复提纯,选择疑似菌株,对其进行菌落形态观测、通过革兰氏染色镜检、16S rDNA基因序列分析鉴定,绘制24 h生长、产酸曲线。结果显示,在蛋鸡盲肠食糜中分离出两株菌,分别为唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）和敏捷乳杆菌（Lactobacillus agilis strain）,命名为JZ1和JZ2。两株菌均在10 h达到生长平台期,培养24 h后JZ1的pH值约为4.2,JZ2的pH值约为5.3。研究表明,JZ1具有生长速度快和产酸能力强的优势,耐酸（pH值3.0）、耐高温（45℃）、耐低温（15℃）和耐盐（6.5%NaCl）能力优于JZ2,更适合作为畜牧养殖中的优质菌源。     

牦牛粪便中乳酸菌的分离与鉴定

为了解青海省共和县牦牛肠道内益生菌的分布种类,筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,采集20份健康牦牛的粪便样品,对粪便中乳酸菌进行分离和纯化,再结合形态学、生化试验及分子生物学方法鉴定。结果表明,从牦牛粪便中成功分离出7株乳酸菌,包括罗伊氏乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌、坚强肠球菌、海氏肠球菌和屎肠球菌各1株。本研究分离的7株乳酸菌,为后期抗牦牛腹泻益生菌产品的研究奠定了基础。     

不同病例动物源大肠杆菌的分离鉴定及16SrDNA同源性分析

为研究不同病例发病动物的发病原因,并对不同病例病料分离出的细菌进行16S rDNA同源性分析,本试验对10种不同病例发病动物病料进行细菌分离培养并对分离获得的细菌进行微生物学鉴定,设计1对16S rDNA基因引物,对分离出的10株细菌进行PCR扩增、测序及16S rDNA同源性分析。结果显示,分离获得的10株细菌经微生物学鉴定均为大肠杆菌,10株大肠杆菌中哺乳类动物病例犬乳房炎、犬子宫蓄脓、犬肺炎、犬皮肤化脓疮、奶牛乳房炎、犊牛腹泻6株大肠杆菌之间16S rDNA同源性为100.0%,家禽类动物病例肉鸽腹泻、肉鸡腹泻、野鸡腹泻和白孔雀腹泻4株大肠杆菌之间16S rDNA同源性也为100.0%,10株不同病例动物来源大肠杆菌之间16S rDNA同源性为97.5%~100.0%。本试验探明了10种不同病例发病动物的发病原因均为大肠杆菌感染引起,且10株大肠杆菌16S rDNA之间具有高度同源性。     

果洛地区传统发酵牦牛酸奶中乳酸菌的分离鉴定

本实验对青海省果洛藏族自治州4县8份传统发酵牦牛酸奶中的乳酸菌进行分离纯化,并利用生化鉴定试剂盒进行鉴定。结果表明,分离得到的16株乳酸菌中,3株为德式乳酸杆菌、2株为干酪乳酸杆菌、2株为罗伊氏乳杆菌、1株为嗜酸乳杆菌、8株为嗜热链球菌。     

健康奶牛肠道中乳酸菌的分离与鉴定

在奶牛饲料中添加优良的乳酸菌微生物制剂对于生产实践有着重要的意义。由于奶牛肠道中的乳酸菌本身已适应奶牛肠道中的环境,并且与奶牛肠道中的致病菌长期拮抗竞争,因而是奶牛饲料中添加益生菌株的最佳来源。本试验利用改良MRS培养基从20头健康的荷斯坦泌乳牛粪便中进行菌群的分离鉴定,采用16S rRNA基因序列对分离的乳酸菌进行鉴定。最终获得瘤胃乳杆菌、乳酸乳球菌等18株乳酸菌。该试验中分离得到的乳酸菌为多角度开发我国乳酸菌资源和微生态制剂在畜牧生产中的应用奠定基础。     

猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

为明确导致新疆某猪场猪急性死亡的病原菌,试验对采集的猪病变淋巴结、肺脏进行病原菌分离培养、形态观察、16S rDNA测定、生化鉴定、药敏试验以及PCR血清型鉴定.将该分离株与国内外13株分离株构建系统进化树进行比对分析.结果 显示:分离菌株镜捡观察为革兰氏阳性长链状球菌,具有β溶血性,可发酵大多数糖类,符合猪链球菌的生...     

一株西藏牦牛源肠球菌的分离鉴定

为了鉴定一株分离自西藏山南病死牦牛的病原菌并了解其耐药特性。本次试验利用生化试验、PCR扩增试验对该菌株进行种属鉴定,通过药敏试验了解该菌株的耐药情况并利用动物试验来测试枯草芽孢杆菌对肠球菌导致的腹泻的治疗作用。试验结果表明,该菌株生化试验、PCR测序结果确定属于肠球菌属。此外,药敏结果显示该肠球菌仅对β-内酰胺类的氨苄西林、苯唑西林表现出固有耐药,而对庆大霉素、链霉素、卡那霉素、阿莫西林、万古霉素等表现出敏感,由动物试验看出,枯草芽孢杆菌对肠球菌导致的家兔腹泻具有明显的治疗作用。本次试验将对今后肠球菌的临床治疗提供一定指导。     

海南天然饲草青贮饲料中乳酸菌分离鉴定及优良菌株筛选

为筛选适合热带牧草的高温发酵优良乳酸菌,改善青贮发酵品质,本试验从海南岛不同气候区采集野生草本植物斑茅(Saccharum arundinaceum)、蔓生莠竹(Microstegium vagans)和木本植物银合欢(Leucaena leucocephala)、构树(Broussonetia papyrifera),青贮60 d后分离纯化乳酸菌,以培养36 h条件下最终发酵液pH≤4且OD(Optical density,吸光度)≥2作为条件初筛乳酸菌。用温度T=40℃,45℃,50℃和pH=3.0,3.5,4.0,6.0,8.0,9.0进行复筛,选取OD值较高的菌株作为优势菌株,再对其进行16S rDNA序列分析、生长和产酸速率测定以及生理生化实验。结果表明,本试验共分离到98株天然乳酸菌,经筛选得到4株优良乳酸菌(15B,10D,13C,14B)。经鉴定,10D,13C,14B为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),15B为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)。菌株15B,10D,13C,14B均耐酸、耐高温、且生长及产酸性能优良,具有良好的青贮潜力并对致病菌具有良好的抑制作用,可作为热带地区制备青贮添加剂的备选菌种。     

牦牛犊牛益生乳酸菌的分离鉴定及其体外筛选

以牦牛犊牛胃肠道内容物作为菌源,筛选出3株同时对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌起抑制作用的乳酸菌,编号分别为A1、A2和A8。经16S rRNA序列分析鉴定,A1、A2为乳酸片球菌,A8为戊糖乳杆菌。经体外评价其益生特性,在培养液pH=4时,所有乳酸菌的活菌数均较高;培养液胆盐浓度在3 g/L时,菌株的存活率均在50%。筛选的3株具有潜在益生性抑菌特性的乳酸菌,可为青海地区牦牛犊牛预防腹泻复合益生菌制剂的研发提供参考。     

牦牛源蜡样芽胞杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了研究牦牛源蜡样芽胞杆菌致病性和耐药性,本实验对其进行了细菌形态学观察、16S rDNA PCR和序列比对、动物回归试验及药敏分析。结果显示：56份牦牛奶样,分离出135株细菌,对分离菌进行16S rDNA PCR并测序,其中有42株为蜡样芽孢杆菌,蜡样芽胞杆菌检出率为75%(42/56),占总检出细菌的31.11%(42/135);其中分离菌株B2019 16S rDNA PCR测序结果与Gen Bank中蜡样芽胞杆菌的同源性为88.6%～99.3%,运用Mega7.0将分离菌株B2019与6株参考菌株的16S rDNA序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树;在动物回归试验中小鼠腹泻,剖检小鼠发现肝脏肿大,肺脏边缘有出血;药敏试验结果显示,分离菌株对麦迪霉素、克林霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、万古霉素、氧氟沙星、环丙沙星、呋喃唑酮和米诺环素等13种抗生素表现出高度敏感,对多粘菌素B表现为中介,对其他16种抗生素均表现为耐药。试验结果表明该分离菌株是一株具有较强致病性的蜡样芽胞杆菌。     

7种鸭源细菌的分离与16S rDNA测序鉴定

从病死鸭的脏器中无菌分离细菌.根据培养特性、菌落形态、革兰染色和生化特性,鉴定出7种细菌分离株.以分离株的基因组DNA为模板,用16S rDNA试剂盒扩增其DNA片段,测序后NCBI网站进行BLAST搜索比对,鉴定出细菌种类,分别为鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、铜绿假单胞杆菌、施氏假单胞菌、浅绿气球菌和麦氏棒杆菌.前3种为鸭的常见分离菌,其余的较为少见.因此在鸭病控制过程中应注意可能存在一些不常见细菌的混合感染.     

16S ribosomal DNA analysis and characterization of lactic acid bacteria associated with traditional Tibetan Qula cheese made from yak milk

Twenty strains of lactic acid bacteria were isolated from six traditional Tibetan Qula cheese made from yak which were collected from northwest China, including Tibet, Qinghai and Gansu province. These isolates were subjected to phenotypic and genetic analyses. All isolates were Gram‐positive and catalase‐negative cocci that produced gas from glucose and formed D(–) isomer of lactate. Most isolates were able to grow in de Man, Rogosa and Sharpe (MRS) broth at pH values 3.0–9.0 and in 6.5% NaCl (w/v). According to analytical profile index 50 carbohydrates (API 50 CH) fermentation patterns of amygdalin and arabinose, these isolates were divided into three groups (A to C). On the basis of the phylogenetic trees of 16S ribosomal DNA (rDNA) sequence, the strains in all groups were placed in the cluster making up the genus Leuconostoc, which showed that all strains should belong to Leuconostoc species. Strains in Group A and Group B exhibited similarity of 16S rDNA sequence of over 99% to Leuconostoc mesenteroides, indicating that they each comprised a single species. Strains in group C were assigned to the Leuconostoc pseudomesenteroides and their 16S rDNA sequence showed a similarity of over 99%. This study demonstrated that Leuconostoc was the dominant member among lactic acid bacteria in Qula cheese.     

牛乳中乳酸菌的分离鉴定

乳酸菌与人类关系十分密切,是人肠道的正常菌群之一,对肠道内微生物群落有一定调节作用。作为益生素菌种在肠道内生长繁殖,对致病菌有一定拮抗作用,能够改善肠道环境,提高抗病力。人们对乳酸菌的分类、生理特性和作用机理等进行了较全面的探索,并已有效地应用于食品、医药工业,但在乳酸菌作为益生素饲料添加剂方面,     

新疆棉花秸秆中乳酸菌的分离与鉴定

实验用MRS+CaCO3固体培养基,以新疆吐鲁番地区棉花秸秆为实验对象,分离纯化得到乳酸菌4株。经形态学、生理生化特性和16S rRNA序列同源性分析进行鉴定,结果表明:Z1、Z2菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),Z4、Z5菌株为戊糖片球菌(pediococcus pentosaceus)。同时测定已鉴定的4株乳酸菌的产酸速率,结果发现,Z2和Z5表现出较强的产酸速率,可进一步研发成青贮饲料添加剂。     

全自动微生物分析系统和16S rDNA序列分析技术对奶牛乳腺炎病原菌的鉴定

从四川成都、绵阳和眉山地区部分奶牛场共分离奶牛乳腺炎病原菌120株,采用VITEK全自动微生物分析系统和16S rDNA序列分析技术对分离菌株进行鉴定。研究发现引起四川成都、绵阳和眉山奶牛乳腺炎以细菌混合感染为主,主要致病菌有葡萄球菌、大肠杆菌、单胞菌属、鲁氏不动杆菌、吉氏库特氏菌和芽孢杆菌属。其中,葡萄球菌的感染最为普遍,检出率最高(33株,27.50%);其次为大肠杆菌(17株,14.17%)、单胞菌属(12株,10%)、鲁氏不动杆菌(11株,9.17%)、吉氏库特氏菌(9株,7.50%)和芽孢杆菌属(9株,7.50%);再次为巨型球菌(6株,5%)、阴沟肠杆菌(6株,5.00%)、产吲哚金黄杆菌(6株,5.00%)和链球菌属(4株,3.33%);最低的是棒杆菌属(3株,2.50%)、粪肠球菌(2株,1.67%)、弗氏志贺菌(1株,0.83%)和普通变形杆菌(1株,0.83%)。本研究为防治奶牛乳腺炎奠定了基础。     

猪源乳酸菌的分离、筛选、鉴定及产酸性能的研究

试验旨在分离、筛选出具有强抗逆性、产酸能力强的同源菌株。从28日龄断奶健康仔猪粪便分离得到30株乳酸菌,应用体外筛选法,筛选出在pH值2.5处理2h后的菌株13株;将此13株菌株通过浓度为0.2%胆盐后剩7株。采用牛津杯法进行抑菌试验,从7株菌中筛选出对大肠杆菌、沙门氏菌有较强抑菌作用的4株,分别为R11、R15、R18、R22,对此4株菌株进行产酸试验验证,都表现出强的产酸能力。对这4株菌进行鉴定性试验,结果R11为屎肠球菌,R15为鸡肠球菌,R18为嗜酸乳杆菌,R22为口乳杆菌。     

分泌抗金黄色葡萄球菌细菌素乳酸菌的分离鉴定

为分离和筛选产抗金黄色葡萄球菌乳酸菌素的优势乳酸菌,利用乳酸菌分离培养基MRS从收集的各种腌制菜汁中分离培养乳酸菌,通过细菌培养特性、革兰氏染色特点、生理生化特性初步鉴定,同时根据Genbank中乳酸菌的16SrDNA序列设计特异性引物,采用PCR方法进一步鉴定,并以金黄色葡萄球菌为指示菌对乳酸菌的发酵上清液进行抑菌特性研究。结果表明,从腌渍菜汁中分离获得90株产酸菌,通过形态学、生理生化特性和PCR鉴定,结果73株产酸菌为乳酸杆菌;分泌产物抑菌试验表明,有10株菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性,经酸排除和过氧化氢排除试验,仍然有5株乳酸菌的分泌产物具有抑制金黄色葡萄球菌活性。可见,从腌渍菜汁分离到的乳酸菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性的特性,主要是通过分泌乳酸菌素来发挥作用。     

西藏豆科牧草青贮饲料中耐低温优良乳酸菌的筛选

本研究对西藏地区豆科牧草青贮饲料中的乳酸菌进行分离、鉴定,以期得到优良的乳酸菌菌株。以苜蓿和箭筈豌豆青贮饲料为试验材料,共分离得到6株同型发酵乳酸菌,经传统微生物培养和16S rRNA序列分析,3株(LCG9,CG35和AG11)为戊糖片球菌,2株(LCG3和LAG1)为植物乳杆菌,1株(LA3)为弯曲乳杆菌;除AG11和LAG1在5℃,LCG9和AG11在pH 3.0和8.0生长微弱外,其余乳酸菌菌株均在5~20℃,pH 3.0~8.0及3.0%和6.5% NaCl培养液中生长良好。从耐低温特性、产酸能力和发酵速率3个指标考虑,植物乳杆菌LCG3最适宜用于西藏青贮饲料生产的乳酸菌菌种。     

山羊奇异变形杆菌的分离鉴定及16SrDNA和ZapA基因的PCR-RFLP分析

从发病山羊分离到5株病原菌,对分离株进行游散行为分析,生化试验、动物试验、药敏试验及16SrDNA和ZapA基因克隆测序,选用限制性内切酶对分离株16SrDNA和ZapA基因进行PCR-RFLP分析。结果表明分离株出现游散生长现象,对丁胺卡那霉素和复达欣敏感,小鼠LD5。为2．5000×10 ^7CFU／mL-4．4453×10^7CFU／mL;分离株16SrDNA与奇异变形杆菌的同源率为99．5％～99．8％,ZapA基N与奇异变形杆菌的同源率为99．5％;PCR—RFLP分析发现,分离株酶切片段数目和大小与标准株相同。结果表明分离株是奇异变形杆菌,多态性较为单一。     

应用16S rDNA全序列同源性分析鉴定致羔羊脑炎性粪肠球菌

选用通过常规生理生化特性鉴定的疑似粪肠球菌菌株3株,采用16S rDNA的通用引物对其可变区基因进行克隆、测序和同源性比对,并用CLUSTAL和MEGA软件分析其遗传距离并构建系统进化树.结果表明,此3株菌株通过同源性比对,与GenBank数据库中粪肠球菌的同源性均大于99.8%,经遗传距离分析和系统进化树的构建均表明为粪肠球菌.肠球菌属细菌有40个种,各种之间的生化生理特性差别甚微,在无法通过生化生理特性准确鉴定到种的情况下,用粪肠球菌的16S rDNA全序列的测定及系统进化树的分析是鉴定该菌的一个科学可靠的方法.