利用微卫星DNA标记进行杂交水稻种子纯度鉴定的研究

利用微卫星分子标记，对湖南目前推广的6个杂交稻组合及其亲本之间的多态性进行了研究。在已筛选的178对引物中，有52对能在一个或多个组合中显示稳定的多态性，杂种表现为父母本互补带型。不同组合间多态性的比例具有差异。用表现多态性的两对引物分别对掺假的威优46和金优207进行纯度鉴定，都能有效地将掺入组合中的假种子区分开。该方法具有准确可靠、多态性高、稳定性好、易于操作的特点。     

汕优63杂合性的RAPD和AFLP分析

 利用57个RAPD引物和15个AFLP引物分析了明恢63与珍汕97A之间1209个位点的杂合性。结果表明,57个RAPD引物能扩增出394条带,平均每个引物扩增6.9条,多态性带129条,汕优63的杂合性为32.74%;15个AFLP引物共扩增出815个位点,平均每个引物扩增54.33条,多态性带289条,汕优63的杂合性为35.46%。1209个位点显示汕优63的杂合性为34.57%。     

利用微卫星标记鉴定北方杂交粳稻种子纯度的研究

利用48对SSR引物对7个北方杂交粳稻组合的杂种F1与其父母本间的多态性进行了筛选，每个组合获得4-11对多态性好的特异引物，利用特异性引物可将杂交种与其相应的不育系、保持系和恢复系分开，说明SSR标记可应用于北方杂交梗稻种子纯度鉴定，具有较高的实用价值。     

我国主要杂交水稻组合及其亲本SSR标记和纯度鉴定

选用分布于水稻12条染色体上的26对SSR引物对我国9个主要的杂交水稻组合及其亲本进行了SSR标记分析,21对多态性引物共扩增出62条条带,平均2.95条,能够有效地区分所有恢复系和大部分不育系。杂交种条带均为父母本的互补型,很适合做杂交种纯度鉴定。用引物RM17对杂交稻组合汕优63和两优培九进行了100粒单种子SSR鉴定,所测纯度分别为96.0%和98.0%,与田间纯度96.2%和97.7%非常接近,显示出SSR技术在品种认证和纯度鉴定中有广阔的前景。     

两系杂交稻亲本SSR指纹图谱的建立及其在种子纯度鉴定中的应用

利用筛选到的20对SSR引物建立了两系杂交稻32个亲本(24个光温敏不育系和8个恢复系)的DNA指纹图谱,针对所涉及的9个杂交稻组合,获得能在父、母本间表现出多态性的特异SSR标记48个.以杂交稻组合两优932为例,在实验室用一个特异SSR标记(RM302)对200粒种子样本进行了纯度鉴定,结果鉴定纯度为90.50%,与田间种植鉴定结果90.60%(海南鉴定)和91.57%(武汉鉴定)基本一致,表明SSR标记技术适用于构建DNA指纹图谱和种子纯度鉴定.     

利用SSR分子标记鉴定杂交稻种子金优299纯度研究

利用微卫星分子标记,对杂交稻组合金优299的双亲及F1之间的多态性进行了引物筛选和检测技术研究。结果如下：在已筛选的332对引物中,有29对引物显示稳定的多态性,杂种表现为父母本互补的带型。用表现多态性的引物17对人为掺假的金优299杂交稻种子进行纯度鉴定,能将掺入组合中的假种子区分开。该方法具有准确可靠、多态性高、稳定性好、易于操作等特点。     

利用微卫星标记分析浙江省近年来主要水稻品种的遗传多样性

 利用12个DNA微卫星标记分析了浙江省近年来主要的44个常规水稻品种和54个杂交水稻组合,共检测到等位基因68个,每个标记2~10个;带型数共127种,每个标记3~18种;平均多态性频率0.752,变幅为0.567~0905。常规品种和杂交组合均表现为亚种间遗传差异明显、亚种内遗传差异较小,籼型遗传多样性高于粳型。平均遗传相似系数,常规品种籼型为0.672,粳型为0.711,籼粳间为0.103,杂交组合籼型为0.636,粳型为0.669,籼粳间为0.343。聚类分析显示,以遗传相似系数0.618为阈值将常规品种分成6类,以0.601为阈值将杂交组合分成7类,且多数同类型品种或组合聚为同一类。     

水稻DNA分子标记的特点与应用

DNA标记是一种新类型的遗传标记,在水稻育种研究和品种鉴定中发挥了越来越大的作用。本文简要介绍了DNA标记的一般特点和检测技术,以及常用水稻DNA标记的基本特点和主要应用价值。     

DNA分子标记在茶树种质资源鉴定中的应用

分子标记具有多态性高、检测手段简单迅速、无基因多效性、能够明确辨别等位基因、实验重复性好等优点。目前最常用的分子标记技术主要有限制性片段长度多态性技术（restriction fragment length polymorphism，简称RFLP）、随机扩增多态性DNA技术（randomom amplified polymorphic DNA，简称RAPD），微卫星DNA技术（inter—Simple Sequence Repeat，简称ISSR）、扩增片段长度多态性技术（Amplified Fragment Length Polymorphism，简称AFLP）等。分子标记技术在茶树研究中得到了广泛的应用，在茶树遗传多样性、种质资源保护、遗传图谱的构建、基因定位与辅助选择育种、指纹图谱应用于作物品种鉴定等研究方面均取得较好的应用效果。     

真、假杂交水稻Ⅱ优63的RAPD鉴定

 以鉴定杂交水稻汕优63种子纯度PCR技术体系为基础，对也采用明恢63为父本的杂交水稻Ⅱ优63与在生产上造成严重损失的假冒Ⅱ优63进行了分子标记鉴定。     

两系杂交水稻亲本间多态性的SSR分析

以培矮64S和5个恢复系等6个两系杂交水稻亲本的DNA为模板,进行微卫星分子标记(SSR)分析,结果表明,在60对微卫星引物中有47对在6份材料中均有清晰带型扩增产物.以根井标准遗传距离D为亲本间多态率的指标分析,培矮64S与9311之间的多态率最高,达到26.9%;其次是与E32之间的多态率,为25.9%;而与特青的多态率最低(17.0%),说明培矮64S与9311之间亲缘关系最远,而与特青的亲缘关系最近.聚类结果显示,微卫星分子标记可将6份亲本分为3个大群.认为用SSR标记可以快速有效地鉴定亲本间的亲缘关系,从而预测杂种优势,为亲本选配提供参考.     

利用SSR分子标记快速鉴定杂交水稻种子纯度技术体系的优化

针对目前SSR分子标记技术快速鉴定杂交水稻种子纯度方法商业化应用的限制因素,从DNA提取、PCR反应体系和程序及凝胶电泳等方面进行了技术体系的优化。原方法经优化后,DNA提取时间从每次5h以上减少到2.5min,PCR反应过程从200min缩短至65min,改聚丙烯酰胺凝胶电泳为琼脂糖凝胶电泳,电泳时间由3.0-3.5h缩短为1h,且通过减少dNTP、Taq酶的用量,对琼脂糖凝胶反复利用,大大降低了成本,减少了废弃物的污染,从而建立了准确、简单、快速、成本低廉的快速鉴定杂交稻种子纯度的技术体系。     

我国杂交水稻主要恢复系的DNA多态性研究

利用RAPD引物对我国杂交稻主要的31个恢复系进行了DNA多态性分析。从152个随机引物中筛选出48个引物扩增恢复系的基因组DNA,选取9个引物的扩增结果进行分析,共获得78条带,其中61条带为多态性标记,每个引物平均提供8.7个标记信息。由UPMGA方法得到的聚类分析结果表明了31个恢复系间的亲缘关系,聚类结果与它们的系谱关系基本吻合。     

杂交稻米必需氨基酸含量与亲本的关系

根据9个不育系、5个恢复系以及由此配制的45个不完全双列杂交组合氨基酸含量的测定结果,分析了不同组合氨基酸含量的差异及其与亲本的关系。结果表明不育系和恢复系的必需氨基酸平均含量为3.202%～4.889%,占氨基酸总量的31.796%～33.394%;而杂交组合的必需氨基酸平均含量为3.616%～4.858%,占氨基酸总量的32.176%～33.016%;必需氨基酸含量依次是亮氨酸＞缬氨酸＞异亮氨酸＞苏氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸＞蛋氨酸。平均氨基酸总量和必需氨基酸含量都有一定的杂种优势,但各组合间差异明显。     

A Set of SCAR Markers Efficiently Differentiating Hybrid Rice

Molecular markers have been widely used in crop genetic improvement,seed test and genetic mapping.Of which,sequence characterized amplified region(SCAR) markers are particularly popular for its diversity,stable reproducibility,and suitability for analyzing large number of samples.In this study,500 random amplified polymorphic DNA(RAPD) primers were tested,and a set of SCAR markers comprising 37 pairs of loci-specific primers were developed from the DNA fragments ranging from 300 to 1000 bp which correspond to the stable,distinctive RAPD banding patterns.Using these SCAR markers,59 hybrid rice combinations were assessed and distinguished into 58 subgroups at the similarity coefficient of 0.97 in a genetic clustering tree based on the allele diversities of the SCAR markers.Furthermore,13 hybrid rice combinations were reassayed with 40 randomly selected simple sequence repeat(SSR) markers to evaluate the effectiveness of these SCAR markers.SSR markers produced similar results to SCAR markers as the 13 hybrid rice combinations were completely separated at the similarity coefficient of 0.91 in the clustering tree established from SSR patterns.Taken together,SCAR markers prove to be effective tools for identifying and differentiating hybrid rice combinations.     

两优培九种子纯度的RAPD快速鉴定

用100个0peron引物，对两优培九及其双亲之间的多态性进行扩增RAPD分析，发现OPN9等4个引物能显示稳定的多态性。用OPN9对人为混有培矮64S的两优培九种子样本进行纯度鉴定，结果该引物能准确地将掺人杂种中的不育系鉴别出来。该方法具有快速、准确、成本低等特点。