黄色瘤胃球菌木聚糖酶基因xynB的异源表达与酶学性质研究

该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明,XynB理论大小为47 kDa,预测等电点为4.49,不含信号肽,含有1个糖苷水解酶11家族结构域和1个碳水化合物结合结构域。酶学性质研究结果表明,该酶的最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,金属离子Mg²⁺、Na⁺、K⁺和Ba²⁺对木聚糖酶XynB有较好的激活效果。综上可知,黄色瘤胃球菌木聚糖酶XynB属于GH11家族,最适pH值为5.0,最适温度为40℃,酶比活力为62.94 U/mg。     

瘤胃厌氧真菌纤维素酶的研究与开发进展

瘤胃厌氧真菌被归为壶菌纲,在超显微结构和生物化学性质上与需氧真菌有严格的区分.瘤胃厌氧真菌能够分泌活性很高的纤维素酶,甚至是酶活最高的超级酶,这些酶是降解植物细胞壁纤维素所必需的.本文介绍了主要瘤胃厌氧真菌所产纤维素酶的研究现状,对瘤胃厌氧真菌纤维素酶开发利用的各种途径进行了综述,重点是瘤胃厌氧真菌纤维素酶基因的克隆表达、转基因动植物的研究以及瘤胃厌氧真菌纤维素酶的分子改造.     

瘤胃厌氧真菌的研究进展

文章主要综述了瘤胃厌氧真菌的生物学特性、消化特性、微生态学特性以及影响瘤胃真菌种群变化因素的研究进展。     

反刍动物瘤胃厌氧真菌的研究进展

瘤胃厌氧真菌是瘤胃微生物区系中的一种功能菌,在反刍动物瘤胃中纤维物质的分解消化过程中发挥着重要的作用,而且还参与瘤胃内淀粉以及蛋白质的降解过程。本文就瘤胃厌氧真菌的生理特性、影响瘤胃厌氧真菌的一些因素以及真菌在饲料降解中的作用进行阐述。     

瘤胃厌氧真菌与产甲烷菌的关系及应用研究进展

反刍动物的瘤胃是一个天然的发酵系统,里面栖息着大量的微生物.微生物在长期的进化过程中形成动态平衡关系,共同维持着瘤胃的机能.瘤胃厌氧真菌与产甲烷菌是瘤胃中主要的产氢菌和氢利用菌,他们之间的营养互作关系一直都是研究热点.文章综述瘤胃厌氧真菌与产甲烷菌的关系,以及二者共培养体系的特点及未来应用,为瘤胃厌氧真菌与产甲烷菌的关...     

瘤胃厌氧真菌对粗饲料的降解机制研究进展

瘤胃厌氧真菌利用其特有的假根系统，优先附着于粗饲料的木质化组织，同时分泌大量的高活性纤维降解酶，裂解植物木质化组织，从而有利于瘤胃细菌对粗饲料的附着和降解。本文对厌氧真菌对粗饲料的附着和侵袭及其分泌的纤维降解酶进行了综述。     

蜡样芽孢杆菌W-3木聚糖酶xynA基因原核表达及其酶学性质研究

【目的】克隆蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)W-3菌株的木聚糖酶基因xynA并进行生物信息学分析,探究其异源表达及酶学特性。【方法】采用同源扩增法克隆xynA基因,构建原核表达载体pCola-xynA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行异源表达,通过镍柱亲和层析分离纯化并通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白,利用在线软件对xynA蛋白进行生物信息学分析。以榉木木聚糖为底物探究xynA在不同温度、不同pH条件下的酶学性质。【结果】xynA基因全长642 bp,含1个完整的开放阅读框,编码213个氨基酸。序列比对结果显示,xynA和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)亚种FZB42木聚糖酶(AJD80562.1)相似性为96%,和类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)NBRC15307木聚糖酶(AAZ17386.1)及高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)同家族木聚糖酶(WP-007407578.1)相似性为94%。xynA蛋白N-端含1个信号肽,理论等电点为9.42,分子质量为23.3 ku,蛋白结...     

木聚糖酶固态发酵工艺及酶学特性研究

筛选出一株高产木聚糖酶的菌株U6-5,菌体固态发酵产酶条件的研究表明,最佳发酵培养基配方为:麸皮50g、花生壳粉30g、玉米芯粉20g、NH4NO30.5g、水110ml,每克原料接种量为3.05×105个孢子,最适发酵温度28～30℃,在此培养条件下发酵26～28h,木聚糖酶酶活达到6105U/g。该木聚糖酶具有较高的耐热、耐储藏性能。     

瘤胃厌氧真菌对木质纤维素降解的研究进展

瘤胃厌氧真菌在木质纤维素的降解中起着重要作用,它不仅能分泌降解含有微晶纤维素的天然木质纤维素的酶系,而且能组装成具有高效催化活性的纤维小体类似复合体。主要围绕瘤胃厌氧真菌在木质纤维素降解中的作用、瘤胃厌氧真菌的木质纤维素降解系统、瘤胃厌氧真菌的纤维小体类似复合体作一综述。     

厌氧真菌的培养进行瘤胃微生物发酵的体外刺激

肉鸡生产是一项高产高效养殖业。首先，肉鸡生长速度快，饲料转化率高。在良好的饲养管理条件下，49日龄时公母混养群平均活重约为初生重的45～50倍。料重比可达2：1，比猪高。其次，肉鸡可适当加大饲养密度。与蛋鸡相比，肉仔鸡性情温顺，很少跳跃、啄斗，因而饲养密度可比同样方式饲养的蛋鸡高一倍左右。第三，由于肉鸡生产周期短，因而可提高鸡舍、设备的利用率，加快资金周转，故投资回收期短，生产效率高。第四，肉鸡适于集约化生产，经济效益好。     

Influence of an aerobic fungus grown on solid culture on ruminal degradability and on a mixture culture of anaerobic cellulolytic bacteria

In this work, the effect of a solid fungal culture of Aspergillus niger (An) grown on coffee pulp on the in situ ruminal degradability (RD) of corn stover was evaluated. In addition, the effect of its extracts on the in vitro dry matter disappearance (IVDMD) and on a mixed culture of anaerobic cellulolytic bacteria (MCACB) was also investigated. The solid ferment was a crude culture of An, grown on coffee pulp. Regarding in situ RD, a significant difference (p < 0.05) was found between treatment with 200 g/day of the solid culture and control (no solid culture added) on dry matter, crude protein and neutral detergent fibre on RD. All the water extracts (pH 4, 7 and 10) enhanced IVDMD and stimulated the cellulolytic activity on a MCACB. Ultrafiltration results showed that active compounds with a molecular weight lower than 30 kDa were responsible for the effect on MCACB. Such results suggest that the effects of the solid An culture in RD are related to the presence of water soluble compounds having a molecular weight lower than 30 kDa.     

禽致病性大肠杆菌pilA基因的克隆及其在乳酸菌中的表达

根据GenBank中禽致病性大肠杆菌pilA基因序列设计合成1对引物,以本实验室分离的禽致病性大肠杆菌基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增得到pilA基因片段,经测序鉴定准确后将其克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36e中,构建重组质粒并将其电转入乳酸乳球菌MG1363,得到重组乳酸乳球菌。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白约为19 ku,与预期相符。Western blot进一步证实了该蛋白的免疫反应性。     

杜氏利什曼原虫NH36基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

应用RT—PCR技术扩增并克隆杜氏利什曼原虫（Leishmania donovani）NH36编码基因，经鉴定及序列分析，构建其原核重组表达载体，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western-blotting鉴定其表达产物。结果显示，获得的NH36开放阅读框为945bp，编码314个氨基酸残基，与GenBank上发表的国际标准株NH36编码基因序列以及氨基酸序列同源性分别为88．57％（837／945）和89．17％（280／314）。表达蛋白为36ku，经1mol／L IPTG诱导6h后的表达量最高；薄层扫描显示表达的蛋白占菌体蛋白总量的57％；该蛋白可被抗杜氏利什曼原虫的多克隆抗体血清识别。     

Molecular characteristics of ESBL-producing Escherichia coli isolated from chickens with colibacillosis

BackgroundAvian pathogenic Escherichia coli (APEC) causes colibacillosis, resulting in significant economic losses in the poultry industry.ObjectivesIn this study, the molecular characteristics of two extended-spectrum beta-lactamase (ESBL)-producing APEC isolates were compared with previously reported ESBL-producing E. coli isolates.MethodsThe molecular characteristics of E. coli isolates and the genetic environments of the ESBL genes were investigated using whole genome sequencing.ResultsThe two ESBL-producing APEC were classified into the phylogenetic groups C and B1 and ST410 and ST162, respectively. Moreover, the ESBL genes of the two isolates were harbored in different Inc plasmids. The EC1809182 strain, harboring the bla_CTX-M-55 gene on the plasmid, exhibited extensive homology to IncFIB (98.4%) and IncFIC(FII) (95.8%). The EC1809191 strain, harboring the bla_CTX-M-1 gene, was homologous to IncI1-I (Gamma) (99.3%). All chromosomes carried the multidrug transporter, mdf(A) gene. Mobile genetic elements, adjacent to CTX-M genes, facilitated the dissemination of genes in the two isolates, analogous to other ESBL-producing E. coli isolates.ConclusionsThis study clarifies the transmission dynamics of CTX-M genes and supports strengthened surveillance to prevent the transmission of the antimicrobial-resistant genes to humans via the food chain.     

蚕类抗菌肽异源表达与应用研究进展

蚕类抗菌肽作为昆虫抗菌肽之一,具有分子量小、热稳定性好、抗菌谱广等优点,是新世纪抗生素最理想的替代药物。目前已经成功鉴定40个家蚕抗菌肽基因,包括Cecropins、Enbo-cins、Attacins、Moricins、Gloverins、Lebocins和Defensins。本文综述了蚕类抗菌肽的家族分类、抗菌肽应用等内容,着重阐述了蚕类抗菌肽异源表达研究。     

鸡大肠杆菌iss基因的克隆测序及原核表达

本实验对鸡大肠杆菌O2血清型菌株进行iss基因克隆测序，并在此基础上设计出两对套式引物，分别对含信号肽Miss基因序列和不含信号肽Miss基因序列进行扩增，并与原核表达载体pGEX-6p-1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表Miss基因序列进行比对，其同源性达100％。SDS—PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达，融合蛋白分子量分别约为36kD和33kD。     

鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因(papA)的克隆与序列测定

根据国外发表的 4种来源不同的人尿道致病性大肠杆菌 pap A基因序列 ,在其保守区设计了带有 Sac /Bam H 酶切位点及保护碱基的 1对引物 ,应用 PCR从 1株带有 MRHA特性的鸡大肠杆菌染色体上扩增到 1个阳性产物 ,经酶切、连接、转化和筛选 ,得到 PCR产物的阳性克隆。通过对 PCR产物核酸序列测定 ,确证所扩增和克隆的 DNA片段为 pap A基因     

重组犬IL-2在原核细胞中的高效表达

应用RT-PCR技术克隆犬IL-2基因，并插入到原核表达载体PJLA605中，构建pRL-CaIL-2表达质粒；采用M9培养基摇瓶发酵，确定诱导时机和诱导表达时间。结果表明：工程菌pRL-CaIL-2在30C培养至对数生长后期（OD600为1．5）42C诱导4h时。菌体收得量湿重达17．8g／L，目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的29．7％。外源基因在该基因工程菌中得到了高效表达。     

芽孢杆菌CY1—3株碱性纤维素酶基因celC的克隆及其在大肠杆菌中的表达

芽孢杆菌CY1-3株基因组DNA经Sau3A Ⅰ部分消化后回收2～7 kb片段,构建了部分文库.通过刚果红染色鉴定,筛选出6个纤维素酶基因的阳性克隆子,经酶切鉴定为同一克隆子,命名为pGJc-1.经测序分析,该片段包含一个由1 593个核苷酸组成的开放阅读框（ORF）,命名为celC.经推导,celC基因编码由一531个氨基酸残基组成的CelC蛋白.氨基酸序列分析表明,CelC蛋白的氨基酸序列与多种细菌的β-1,4-内切葡聚糖酶具有很高的同源性.粗酶液的SDSPAGE分析表明,celC基因在大肠杆菌中所表达的CelC蛋白具有纤维素酶活力,其分子质量约为58 ku.     

Prevalence,O-genotype and Shiga toxin (Stx) 2 subtype of Stx-producing Escherichia coli strains isolated from Argentinean beef cattle

The aims of this study were to investigate prevalence, O-genotype, and virulence gene profile including Shiga toxin (Stx) 2 gene-subtype of Stx-producing Escherichia coli (STEC) in beef cattle from the Bahía Blanca in Argentina. Rectal swabs were collected from 283 beef cattle in 2012. stx genes were detected in 90 (32%) out of the 283 rectal swabs by stx gene-specific PCR assay. The positive cases were 13 with stx1, 58 with stx2, and 19 with both stx1 and stx2. Among 90 stx gene-positive samples, 45 STEC strains were isolated, which included 3 stx1, 34 stx2, and eight stx1 and stx2 genes positive isolates. O-genotyping grouped 45 STEC strains into 19 different O-genotypes such as Og8, Og145, Og171, Og185 (4 from each), Og22, Og153, Og157 (3 from each) and others. Various stx2 gene-subtypes were identified in 42 STEC strains: 13 positive cases for stx2a, 11 for stx2c, 3 for stx2g, 10 for stx2a and stx2d, 4 for stx2a and stx2c, and 1 for stx2b, stx2c and stx2g. efaI gene, generally prevalent in clinical strains, was detected in relatively high in the STEC strains. These data suggest that stx2a and stx2c were distributed not only in O145 and O157 but also in minor O-genotypes of STEC in Argentina.