大肠杆菌O157 SYBR Green I实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

肠出血性大肠埃希菌O157：H7（E．coli O157：H7）是一种强致病的病原性细菌,可引起出血性结肠炎（HC）、溶血性尿毒综合征（HUS）和血栓性血小板减少性紫癜（TTP）等。E．coli O157：H7对人的致病力较强,感染剂量较低,每克感染载体含菌10个以上即可能引起感染。感染此病菌的人会出现严重腹泻、发烧等症状,病情严重者更会引起肾脏衰竭并发症,甚至导致死亡,我国部分地区在食品和动物中有此类检测方面的报道。     

大肠杆菌O_(157)多重PCR快速检测方法的建立

E. coli O157∶H7是肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)最有代表性的血清型,感染后能够导致人的出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综合征(HUS)和血小板减少性紫癜(TTP)[1].     

大肠杆菌O157：H7的生物学特性

O157:H7大肠埃希氏菌是一种新发现病原微生物,感染大肠杆菌O157:H7主要引起婴幼儿腹泻,出血性结肠炎(haemorrhagic colitis,HC)、溶血性尿毒综合症(Haemolytic Uraemic Syndrome,HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(thrombocytopenlc purpura,rrP)及死亡等[1-4].     

检测冻肉中大肠杆菌O157∶H7的两种方法比较

大肠杆菌O157∶H7属于肠出血性大肠杆菌(en-terohemorrhagic E.coli,EHEC),是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌O157∶H7可使人患腹泻、出血性结肠炎,也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫(Colloidal gold immunoassay,GIA)检测卡和荧光PCR技术,对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157∶H7进行了检测,并对2种方法的检测效果进行了分析比较。1材料与方法1.1材料东莞市各镇(区)冻肉库中的冻肉,共108份。大肠杆菌O157∶H7、O1、O48、沙门菌等菌株,由华南农业大学兽医学院郭霄峰教授惠赠…     

两株鸡源性大肠杆菌O157的分离鉴定与药敏试验观察

大肠杆菌(E.coli)病是危害养鸡业的主要细菌性传染病之一,已报道的致病性E.coli血清型多,病变类型复杂.在对我县鸡群开展鸡E.coli病防制研究时,我们分离到了90株致病性E.coli,共确定血清型种类达12种62株,其中分离到2株E.coli O157[1].对分离到的这两株E.coli O157进行了生物学特性测定和药敏试验观察.已知E.coli O157为食源性致病菌,能引起暴发性出血性胃肠炎[2].本次分离菌充分说明,鸡是E.coliO157病原的携带者,这在公共卫生上有重要意义.现将有关结果报告如下.     

肉类大肠杆菌O157∶H7污染情况调查

大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人兽共患病原微生物,人感染大肠杆菌O157∶H7可出现腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征及血栓性血小板减少紫癜等严重并发征,严重者可导致死亡[1].1983年,Riley LW等[2]首先报道了一种罕见的可引起食物中毒的大肠杆菌,该菌即为大肠杆菌O157∶H7.目前,大肠杆菌O15...     

动物及动物产品中大肠埃希氏菌O157带菌情况的调查

大肠埃希氏菌O157（Escherichia coli O157）是一种出血性致病性大肠杆菌,能引起人类出血性腹泻和溶血性尿毒综合征,其感染已成为世界性公共卫生问题。1982年美国首次报道了大肠埃希氏菌O157：H7引起的出血性肠炎暴发,此后世界各地相继有由该菌所致疫情的报道,尤其在1996年5～8月日本发生了迄今为止最大的一起O157：H7大肠埃希氏菌的流行,累积患者近万人。     

大肠肝菌O157:H7紧密素研究进展

WHO不久前指出在过去的20年里,世界上出现了约30种新的传染病,1982年美国首次报告的由大肠埃希菌O157:H7引起的出血性肠炎就是其中之一。大肠肝菌O157:H7属于肠出血性大肠埃希氏菌(EnterohemorrhagicE.coliEHEC),尽管大肠杆菌O157:H7高致病力的机制尚未明了,但已确定紧密素(int     

中药抗大肠杆菌O157:H7的筛选及其在体外瘤胃发酵中的应用

为了研究中药对肠出血性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7的抑制活性,为中药替代抗生素作为反刍动物饲料添加剂来抑制E.coli O157:H7等病原菌提供参考。采用水提法和醇提法从11种中药中提取抑菌活性成分,应用牛津杯法抑菌试验检测其抑菌能力,通过体外瘤胃发酵试验和RT-PCR评估其抑制E.coli O157:H7的应用效果以及半数致死量(LD_(50))来检验其毒性。结果显示,肉桂醇提液、丁香水提液、厚扑醇提液和黄芩醇提液对E.coli O157:H7抑制效果好、无毒(大鼠急性经口LD_(50)>15 000 mg/kg体重),但其抑菌具有广谱性。表明肉桂醇提液和丁香水提液具有代替抗生素作为反刍动物料添加剂抑制的应用前景。     

如何降低宰后肉牛E.coli O_(157):H_7感染率

<正>肉牛体内溶血性大肠杆菌(EHEC)可以在肠道中和谐共生,但当肉牛屠宰后肠道内脱落的EHEC会感染肉质,致使人类食用感染EHEC的肉而致病。在美国每年治疗因EHEC导致的疾病耗资高达10亿美元。为了更好地控制溶血性大肠杆菌病暴发,可以在肉牛屠宰前对牛体进行处理,以达到降低肠道内E.coli O157:H7菌群数量,从而降低肉质感染的机率,控制疾病暴发的目的。1 E.coli O157:H7     

进口冻肉大肠杆菌O157∶H7的污染状况调查及鉴定

肠道出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli, EHEC)是出血性肠炎(haemorrhagic colitis, HC)的病原体,其主要血清型为O157∶H7.     

检测冻肉中大肠杆菌O157：H7的两种方法比较

大肠杆菌O157：H7属于肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E．coli，EHEC），是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌0157：H7可使人息腹泻、出血性结肠炎，也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫（Colloidal gold immunoassay，GIA）检测卡和荧光PCR技术，对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157：H7进行了检测，并对2种方法的检测效果进行了分析比较。     

进口冻肉大肠杆菌O157：H7的污染状况调查及鉴定

肠道出血性大肠杆菌 ( enterohemorrhagic E.coli,EHEC)是出血性肠炎 ( haemorrhagic colitis,HC)的病原体 ,其主要血清型为 O157∶H7。自 1 982年被首次确认为一种重要的人类肠道致病菌以来 ,该菌在美国、加拿大、英国、日本及南美某些国家出现严重的公共卫生问题 ,发生多次暴发流行及散发大量腹泻、出血性肠炎及溶血性尿毒综合征 ( HUS)等病例 ,成为新的凶险传染病之一。据 Reily报道 ,大肠杆菌 O157∶ H7基本上是一种食源性疾病 ,5 2 %是动物性食品引起 ,1 6%是人与人接触引起 ,1 4%是水果与蔬菜引起 ,1 2 %是水引起 ,因此加强进出…     

牛源大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定

为调查新疆部分地区E.coli O157∶H7的感染情况和菌株致病性,从新疆阿克苏、伊犁、塔城3个地区的牛场采集新鲜粪样564份,对E.coli O157∶H7进行分离与鉴定。利用E.coli营养肉汤(EC肉汤)对样品进行增菌后,用山梨醇麦康凯培养基(SMAC)平板选择性培养,再经过4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷培养基(MUG)的筛选,对疑似菌株进行生化和PCR鉴定,并将分离鉴定到的菌株进行小鼠攻毒试验。结果显示,从伊犁地区采集的样品中共分离出2株E.coli O157∶H7(Y166和Y226),其检出率为0.88%;小鼠攻毒试验中,Y166和Y226试验组小鼠在48h内全部死亡,具有一定致病性;从阿克苏、塔城所采样品中未分离到E.coli O157∶H7。     

饲料中肠出血性大肠杆菌O157∶H7双重PCR检测方法的建立

根据肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的O抗原编码基因rfb E和H抗原编码基因fli C分别设计引物,建立双重PCR方法。饲料样品人工污染EHEC O157∶H7后进行增菌培养,利用双重PCR进行检测EHEC O157∶H7。结果表明:建立的PCR方法能够特异性扩增出目的条带,敏感性可达到100 cfu细菌。双重PCR方法可以有效地检测出饲料中人工污染的EHEC O157∶H7,人工污染饲料样品经4 h预增菌处理后,该方法的检测下限为20 cfu细菌。本研究建立的双重PCR方法可快速、特异地检测出饲料中污染的EHEC O157∶H7,可用于饲料中EHEC O157∶H7的检测及流行病学调查。     

出血性大肠杆菌噬菌体933W的分离鉴定

出血性大肠杆菌(EHEC) O157主要引起感染人的腹泻、出血性结肠炎或尿路感染综合症[1].本试验于2010年9～11月份,使用国际标准菌株EHECO157:H7 EDL933,将编码Stx2的噬菌体933W从细菌染色体上分离出来,并对其增殖和保存特性进行研究,以保持培养噬菌体933W具有较高的感染性和活力,为进一步进行该噬菌体研究和开发噬菌体生物制剂奠定基础.     

规模化养鸭场鸭源大肠杆菌分离株的致病性及系统发育分析

为研究鸭源大肠杆菌(E.coli)的致病性,明确鸭病原性E.coli与人和其他动物E.coli的亲缘关系及O血清型与菌种间遗传关系的相关性,本研究从我国西南地区规模化养鸭场患典型E.coli败血症的雏鸭体内分离37个血清型共82个E.coli分离株(其中优势血清型32株,其他血清型50株),以每株0.2 mL (109 cfu/mL)腿部肌肉接种7日龄健康鸭进行致病性试验;并对其中14个鸭源E.coli代表株进行16S rRNA基因克隆、测序及系统发育分析.结果表明:所有分离株全部为致病性E.coli,其中高致病株、中等致病株和低致病株分别占受试菌株的80.5％(66/82)、17.1％ (14/82)和2.4％(2/82),4个优势血清型全部为高致病株和中等致病株,分别占受试菌株的84.4％(27/32)和15.6％(5/32);14个代表株鸭源E.coli的16S rRNA形成2个主要分支,3株新发现的血清型单独形成一个较远的分支,11株常见血清型与人及其他动物源E.coli形成另一个大的分支,其中有6株与人的O157亲缘关系较近,2株与出血性E.coli O157:H7 sakai聚为一个小分支;从遗传进化的关系分析,这些菌株有可能是人类的潜在病原菌;同时还发现不同血清型的分离株可以聚为一支,而同一血清型的分离株可以处于不同的分支,常规的O血清学分型不能体现菌种间遗传关系的远近.     

动物性食品中O157：H7大肠杆菌污染及防止措施

O_(157):H_7大肠杆菌(Eschericha coli O_(157):H_7)是肠出血性大肠杆菌的最主要的一种血清型。对人的致病性很强。该菌污染动物性食品后随食物进入人体,引起出血性肠炎,导致出血性肠炎。 1.国内外流行情况 近年来由于O_(157):H_7大肠杆菌污染食品导致食用者感染的情况较为多见。在1982年美国发生了两起该菌食物中毒事件,有19人死亡,该事件是由当地一家快餐店售出的汉堡包中牛肉饼受O_(157):H_7大肠杆菌污染所致。在1983年美国西部地区也发     

季节对新疆牛源E.coli O157∶H7分布的影响研究

试验旨在研究季节对牛源E.coli O157∶H7分布的影响。在新疆地区A、B、C 3个牛场中,分别于春、夏、秋、冬4个季节采集牛肛拭子(399份)、粪便(68份)、水(29份)和饲料(43份)样本,先用EC肉汤增菌,再用山梨醇麦康凯培养基(SMAC)与4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷(MUG)选择性培养,然后进行PCR鉴定和毒力基因检测。结果显示,从3个牛场539份样本中共检出E.coli O157∶H7菌株5株(0.93%,5/539),其中春季样本检出2株(1.44%,2/139),秋季样本检出1株(0.56%,1/180),冬季样本检出2株(1.38%,2/145),未能从夏季样本中检出目标菌;B牛场的菌株检自肛拭子样本(0.69%,1/145),C牛场的菌株分离于饲料(20.00%,3/15)和肛拭子(0.66%,1/152)样本,水中未分离到目标菌。牛源E.coli O157∶H7的分布具有明显的季节性,B牛场只在秋季的肛拭子样本中检出了1株E.coli O157∶H7,C牛场分别在春季和冬季各检出2株,春、冬季E.coli O157∶H7分离率高于夏、秋季。因此,在新疆特殊的气候特点和饲养模式下,防控牛源E.coli O157∶H7的传播时,要十分注意寒冷季节圈舍内卫生的管理,尤其要严防饲料被粪便污染。     

控制大肠杆菌O157∶H7对食品、水源等的污染

大肠埃希菌O157∶H7感染性腹泻是人类新发生的传染病,已成为世界关注的公共卫生问题[1-2]。大量研究证实,家禽、家畜是大肠埃希菌O157∶H7的重要宿主[3-4]。近年来,由肠出血性大肠杆菌O157∶H7引起的食源性疾病的暴发、流行呈逐年上升的趋势。它能引起出血性肠炎、溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癫等临床症状,致病性强、死亡率高,对人体的健康造成很大的威胁[5]。要从源头控制大肠杆菌O157:H7对食品、水源等的污染需从食品生产、加工、贮藏、销售以及消费的各个环节着手,即控制农场到餐桌等的全部过程,可以采取以下几项措施[6]…