黄芩苷通过抑制核因子-κB和激活核因子-E2相关因子2信号通路缓解脂多糖诱导的小鼠空肠炎症和氧化应激

本试验旨在探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠空肠炎症和氧化应激的缓解作用及其分子机制。将36只小鼠随机分为对照组、阴性对照组、模型组以及低、中、高剂量黄芩苷组,每组6只。适应性生长7 d后开始试验。对照组小鼠不作处理,阴性对照组和模型组小鼠每天灌胃0.2 mL磷酸盐缓冲液(PBS),黄芩苷组小鼠每天灌胃黄芩苷药液0.2 mL(根据小鼠体重计算黄芩苷用量,低剂量组为100 mg/kg BW,中剂量组为200 mg/kg BW,高剂量组为400 mg/kg BW),连续灌胃7 d,第7天给模型组、黄芩苷组小鼠腹腔注射0.2 mL LPS(3.5 mg/kg BW)。注射LPS 24 h后处死小鼠,取空肠进行形态学观察,检测空肠中炎性因子mRNA表达量和含量以及核因子-κB(NF-κB)和核因子-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路关键蛋白表达量的变化。结果显示：相比于对照组,模型组小鼠空肠组织绒毛结构损伤,绒毛高度与隐窝深度比值显著降低(P<0.05),空肠中Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达量显著升高(P<0.05),炎性因子[白细胞介...     

活性氧参与脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7活化诱导凋亡

研究活性氧(ROS)与脂多糖(LPS)诱导后巨噬细胞活化诱导凋亡的关系。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用不同浓度LPS诱导细胞,添加100μmol/L H2O2增加细胞内ROS,或用姜黄素(7.5μmol/L)降低细胞内ROS;流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和ROS。结果显示,RAW264.7细胞凋亡和细胞内ROS水平均随LPS浓度增加而增加,高浓度的LPS导致MMP下降;与LPS(8μg/m L)单独作用组比,H2O2增加ROS,并导致凋亡细胞百分率增加;姜黄素降低LPS诱导的细胞凋亡,同时减少细胞内ROS。表明活性氧参与LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化诱导凋亡。     

黄芩苷对热应激小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

研究旨在探讨黄芩苷对热应激小鼠卵巢抗氧化和细胞凋亡的作用机制。将小鼠分为常温对照组(生理盐水)(C组)、黄芩苷(50 mg/kg体重)组(C+B组)、41℃热应激组(H组)和热应激加黄芩苷(50 mg/kg体重)组(H+B组),连续注射7 d,第8天41℃热应激2 h,立即处死,取卵巢组织进行切片观察并检测丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活力。Western Blot检测Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达。免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase 3蛋白表达。结果显示,热应激引起小鼠卵巢组织氧化损伤。黄芩苷能显著降低组MDA和NO含量,显著或极显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。此外,热应激可显著增加Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达,黄芩苷干预后Nrf2等蛋白的表达降低。黄芩苷干预后Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2、Caspase 3蛋白表达显著升高。上述表明,黄芩苷能缓解热应激下小鼠卵巢组织的氧化损伤及细胞凋亡,其机制可能与提高抗氧化能力及Nrf2蛋白的表达有关。     

橄榄苦苷对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用

为了探讨橄榄苦苷对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用,选用80只健康昆明系小鼠分成正常对照组、模型组、地塞米松组和橄榄苦苷组。结果显示,橄榄苦苷能减少炎症细胞浸润,使肺泡壁增厚减轻;能降低血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素6(IL-6)的含量(P0.05,P0.01);能提高肺组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性,降低丙二醛(MDA)的含量(P0.01);能提高肺组织闭锁蛋白表达水平(P0.01)。说明橄榄苦苷对LPS诱导的急性肺损伤具有明显的保护作用,其机制可能与减少自由基损伤、抑制炎症因子水平及提高肺组织细胞连接蛋白的表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对H9N2猪流感病毒诱导小鼠肺损伤中Toll样受体-4表达的影响

旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对猪源H9N2流感病毒感染诱导小鼠肺损伤及氧化应激相关信号通路Toll样受体(TLR)-4表达的影响。将6~8周龄、雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为病毒感染致急性肺损伤(H9N2)组、H9N2+EGCG组、模拟感染(Mock)组、Mock+EGCG以及TLR-4抑制剂Eritoran5564(H9N2+E5564)对照组,观察各组小鼠肺组织病理学变化,测定肺湿/干重比;测定肺组织内MPO、T-SOD、抗HO·能力、MDA、IL-1β和TNF-α的含量;Western blot和RT-PCR方法检测肺内TLR-4 mRNA及蛋白质的表达。结果表明,H9N2组小鼠精神沉郁、呼吸困难、体重下降明显;肺组织学表现为肺泡壁水肿、炎性细胞浸润、出血为特征的弥漫性肺组织损伤。EGCG干预后,与H9N2组相比,EGCG治疗组小鼠临床症状较轻,一定程度上降低了死亡率,并明显延长小鼠存活时间(P0.01);其肺组织损伤程度较轻,肺湿/干重比极显著下降(P0.01);MPO和MDA的含量显著降低,与之相反T-SOD及抗HO·能力升高;同时,EGCG显著降低肺组织内IL-1β和TNF-α的含量。肺组织内TLR-4mRNA以及蛋白表达显著降低;E5564呈现与EGCG相似的干预效果,显著降低TLR-4mRNA以及蛋白表达,降低肺组织MPO、MDA、IL-1β和TNF-α的含量,减少T-SOD的消耗以及提高抗HO·能力。EGCG明显缓解小鼠肺损伤过程,其机制可能与其影响活性氧自由基的产生或清除进而显著降低TLR-4的表达有关,提示其在辅助预防和干预H9N2-SIV诱导的肺损伤方面具有潜在的应用前景。     

黄芩苷对H6N6禽流感感染小鼠肺损伤的影响

为探究黄芩苷对H6N6禽流感病毒感染小鼠肺损伤的影响，选取108只昆明小鼠，随机平均分为6组(对照组、阳性组、西药组和低、中、高剂量黄芩苷组)。攻毒3 d后用不同剂量黄芩苷连续治疗9 d,各组在第3,6,9天时随机选6只小鼠，取其肺脏进行病理观察及HE染色制作切片，检测肺组织病毒含量及小鼠血清中IL-1、TNF-α、IFN-γ和5-HT含量。结果表明：攻毒3 d后，相比对照组，其余各组小鼠肺脏出现病理损伤；治疗3 d时，相比阳性组，高剂量黄芩苷组小鼠肺脏指数、病理评分和病毒含量均显著降低(P<0.05),治疗6 d时，相比阳性组，低、中、高剂量黄芩苷组小鼠血清中IL-1、TNF-α、5-HT含量均极显著降低(P<0.01),中、高剂量黄芩苷组IFN-γ均极显著升高(P<0.01);相比西药组，高剂量黄芩苷组小鼠肺脏指数、病理评分、病毒含量及血清中IL-2含量均无显著差异(P>0.05)。说明黄芩苷通过降低病毒在肺脏中的复制，调节血清中炎性因子(IL-1、TNF-α、IFN-γ和5-HT)含量，减轻H6N6禽流感患鼠肺的损伤。     

黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪的血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC的影响

本研究利用脂多糖(LPS)诱导建立仔猪免疫损伤模型,研究黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC信号通路变化的影响,并探讨其保护机制。试验选取42头健康仔猪,分为空白对照组(A组)、LPS模型组(B组)、LPS+丙酮酸乙酯处理组(C组)、LPS+氟尼辛葡甲胺处理组(D)和LPS+黄芩苷处理组(剂量分别为25、50和100 mg/kg,E、F、G组)。饲喂7 d后,攻毒前0.5 h进行药物处理,处理组及模型组腹腔注射LPS,空白对照组注射等量生理盐水,LPS诱导6 h后再次给药。试验1 d后,采集主动脉血管样品2份,通过免疫组化及免疫荧光观察血管中紧密连接蛋白(闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、密封蛋白-1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin))的表达变化;Western blotting法测定血管MLCK-MLC信号通路相关蛋白(肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、肌球蛋白轻链2(MLC2)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2))的表达量。结果表明,LPS诱导后,仔猪血管中ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达量均极显著降低(P0.01),黄芩苷处理能明显提高仔猪血管紧密连接蛋白的表达量。LPS模型组MLCK和p-MLC2蛋白表达量均极显著升高(P0.01),黄芩苷能显著下调MLCK和p-MLC2表达量(P0.05),各组间MLC2表达量差异不显著(P0.05)。综上所述,LPS能引起仔猪的血管损伤,激活MLCK-MLC信号通路,影响紧密连接蛋白表达量及功能,黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接损伤具有保护作用。本试验结果为黄芩苷用于治疗猪的炎性血管损伤提供了科学依据。     

芹菜素对小鼠急性肺损伤的保护作用

急性肺损伤是由创伤、感染、休克等诸多非心源性因素导致的一种急性、进行性呼吸障碍。该病的主要特点是出现顽固型低氧血症、促进呼吸频数升高、呼吸加重、呼吸困难、X线分析结果显示肺泡多出现弥漫性浸润等。本实验在构建LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型的基础上,通过观察肺组织病理学变化、肺组织MPO活性变化及炎性细胞数量、促炎性细胞因子及NF-κB和MAPKs信号通路中关键接头蛋白分子磷酸化水平变化,探讨芹菜素对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用。     

黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪生理机能的影响

为了研究黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导后仔猪临床症状及血液学指标的影响,试验选取36头健康仔猪,分为空白对照组、LPS模型组、氟尼辛葡甲胺组、黄芩苷低剂量(25 mg/kg)组、黄芩苷中剂量(50 mg/kg)组和黄芩苷高剂量(100 mg/kg)组。各组猪在注射LPS前0.5 h给药,黄芩苷各剂量组及模型组猪按体重0.1 mg/kg腹腔注射LPS,空白对照组猪注射等量生理盐水,LPS诱导6 h后再给药1次。于注射LPS 3 h后测量各组猪的体温,并统计呕吐、颤抖、嗜睡猪的头数;于注射LPS后第3,24小时对各组猪采血,检测血常规指标和血液生化指标。结果表明:LPS诱导后第3小时,LPS模型组猪出现体温升高、颤抖、呕吐和嗜睡等临床症状,黄芪苷各剂量组猪的体温较LPS模型组均显著降低(P0.05),猪的呕吐和嗜睡症状减轻;LPS诱导后第3小时,与空白对照组比,LPS模型组白细胞数和血小板总数均极显著降低(P0.01);与LPS模型组比,黄芩苷中剂量组白细胞数极显著升高(P0.01)。LPS诱导后第24小时,与空白对照组比,LPS模型组白细胞数极显著升高(P0.01),血小板总数极显著降低(P0.01);与LPS模型组比,黄芩苷中剂量组血小板总数显著升高(P0.05)。LPS诱导后第3小时,与空白对照组比,LPS模型组总胆红素、肌酐、总蛋白、白蛋白和血糖含量出现显著或极显著变化(P0.05或P0.01);与LPS模型组比,黄芩苷中剂量组肌酐含量显著降低(P0.05);LPS诱导后第24小时,与空白对照组比,LPS模型组总胆红素含量、天门冬氨酸氨基转移酶活性、肌酐和血糖含量出现显著或极显著变化(P0.05或P0.01)。与LPS模型组比,黄芩苷低剂量组和中剂量组能极显著(P0.01)和显著(P0.05)降低总胆红素含量。说明50 mg/kg黄芩苷肌肉注射给药可以有效缓解LPS刺激导致的仔猪体温升高、白细胞数异常变化、血小板总数降低及肝脏和肾脏功能的损伤。     

热应激对小鼠睾丸组织细胞的影响研究

选择40只健康雄性昆明小鼠,随机将其分为A、B、C、D四组,A组腹腔注射生理盐水,B组注射物为黄芩苷,C组注射生理盐水加热应激处理,D组注射黄芩苷加热应激处理。观察四组小鼠睾丸相关组织或细胞变化情况,生精细胞凋亡指数(AI),以及Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2/Bax蛋白表达。结果显示,A、B、D三组中精母细胞、精子细胞、精子、睾丸支持细胞和间质细胞形态正常,排列紧密,结构完整;而C组小鼠睾丸PS排列疏松,GC核浓缩,呈月牙状,细胞膜皱缩,睾丸间质中出现空泡化。根据TUNEL检测细胞凋亡结果显示,A、B两组AI对比,P0.05;C、D两组AI明显高于A、B两组,而D组AI少于C组,P0.05。C组Bcl-2和Bcl-2/Bax与A组比较,P0.05;Bax与A组对比,P0.05;B、C两组Bax比较,P0.05;B组Bcl-2和Bcl-2/Bax与C组比较,P0.05;D组与A组对比,P0.05。由此结论,热应激可造成小鼠睾丸组织细胞的凋亡,添加黄芩苷后对于热应激造成的凋亡损伤略有缓解。