抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究

应用杂交瘤技术获得了１３ 株抗传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 的单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） ,经过检测其中有９ 株ＭｃＡｂｓ 为ＩｇＧ 类, ４ 株为Ｉｇ Ｍ , 这些ＭｃＡｂｓ 与新城疫病毒（ＮＤＶ） 、传染性支气管炎病毒 （ＩＢＶ） 和马立克氏病病毒（ ＭＤＶ） 均无交叉反应, 病毒中和试验表明, 有５株ＭｃＡｂｓ 具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔｔｉｎｇ 试验表明, 这５ 株有中和活性的ＭｃＡｂｓ 识别的抗原位点在ＶＰ２ 。传染性法氏囊病最早于１９５７ 年发现于美国东部特拉华州的甘博罗（Ｇｕ ｍ ｂｏｒｏ） 地区,１９６２ 年由Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 首次报道, 此后该病相继在全世界许多国家和地区广泛流行。本试验对通过淋巴细胞杂交瘤获得的１３ 株单克隆抗体进行了生物学特性鉴定, 以期应用于对ＩＢＤ 的研究, 现将试验情况报告如下。     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白研究进展

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起禽类的传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD),主要侵害免疫器官,直接引起感染鸡的发病或死亡,更重要的是能引起鸡的免疫抑制,导致对其他病原因子的易感性增强及对疫苗的免疫应答能力下降。近年来随着反向遗传等新技术的应用,对该病毒的基因组及编码蛋白研究有了长足的进步,本文对该病毒主要结构蛋白方面的研究进展进行了综述。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究Ⅰ．抗传染性法氏囊病病毒（CJ801株）单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术获得了３株抗传染性法氏囊病病毒（ＣＪ８０１株）的单克隆抗体。３株单抗与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡马立克氏病病毒均无交叉反应。ＣｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅＥＬＩＳＡ表明、３株单抗所对应的抗原位点互不重叠。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明、３株单抗所对应的抗原位点都位于ＶＰ２ｂ上。     

蛋鸡传染性法氏囊病病毒分离与鉴定

从１２０日龄疑似法氏囊病鸡群采取法氏囊，用鸡胚－细胞交替法成功地分离到一株病毒。经电镜观察、琼脂扩散、细胞中和、免疫保护等试验均表明该分离物和标准ＩＢＤＶ具有共同抗原性，证明该分离物为ＩＢＤＶ。     

四株鸡传染性法氏囊病病毒毒力的研究

对从黑龙江省分离的４株鸡传染性法氏囊病病毒通过易感鸡接种,用病理学技术进行了致病力的研究。结果表明,各毒株毒力有一定差异,基保Ｈ３,Ｈ４株毒力高于Ｈ１,Ｈ２株,且有迅速致法氏囊萎缩的特性;Ｈ３,Ｈ４株引起试验鸡法氏囊指数显著下降（Ｐ〈０．０５）,脾脏指数明显增加（Ｐ〈０．０５）,Ｈ３,Ｈ４株接种５０日龄Ｄ７８疫苗免疫病,免疫保护指数分别为５０％,６０％,传统疫苗不能提供以分保护。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

应用杂交瘤技术获得了１３株抗传染性法氏囊病病毒的单克隆抗体,其中有９株ＭｃＡｂｓ为ＩｇＧ类,４株为ＩｇＭ类,这些ＭｃＡｂｓ与新城疫病毒,传染性支气管炎病毒和马立克氏病病均无交驻反应病毒中和试验表明,有５株ＭｃＡｂｓ具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｉｏｔｔｉｎｇ试验表明,这５株有中和性的ＭｃＡｂｓ识别的抗原位在ＶＰ２上。     

传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展

传染性法氏囊病病毒(IBDV)是危害养鸡业的重要病毒性传染病病原之一,文章主要从IBDV的基因组结构、病毒蛋白及其作用、抗原变异、毒力变化、新型疫苗的研制等方面的研究进展进行了综述。     

传染性法氏囊病病毒对法氏囊生长发育的影响

本试验运用传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株,通过泄殖腔和鼻腔接种 １,８,１５,３０ 日龄雏鸡,通过尿囊腔接种８, １３,１８ 日龄鸡胚,全面而系统地观察了接毒后不同时间法氏囊的组织形态学变化,探讨了传染性法氏囊病病毒对胚胎发育时期和雏鸡发育时期法氏囊生长发育的影响。结果表明, Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 感染后１２～４８ ｈ,雏鸡法氏囊粘膜上皮细胞肿胀,坏死脱落,淋巴滤泡髓质部及皮质部淋巴细胞不同程度变性、坏死、排空,形成腺管样结构或囊状空泡： 接毒后７２～１４４ ｈ,法氏囊淋巴滤泡淋巴细胞坏死排空,淋巴滤泡萎缩,网状结缔组织大量增生,而胚胎发育时期,法氏囊粘膜上皮肿胀变性,法氏囊淋巴滤泡形成延迟或不完整,淋巴滤泡内淋巴细胞缺乏或空虚,说明传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株对法氏囊造成严重的组织学危害,从而导致法氏囊生长发育阻滞,组织学形态和结构严重受损。     

由法氏囊病毒引起鸡的免疫抑制

1法氏囊 禽类法氏囊是雏鸡免疫系统的中枢免疫器官.它是鸟类特有的免疫器官,所以值得特别关注.许多研究已搞清了其生理学作用.雏鸡前3周是法氏囊快速发展时期,在这个时期法氏囊迅速增殖,3周龄后法氏囊就逐渐退化,研究表明,大约在12周龄,法氏囊就完全退化.     

In vitro infection of fractionated chicken lymphocytes by infectious bursal disease virus

Lymphocytes from bursa of Fabricius and thymus of chickens were purified and separated into the three cell subsets--T, B, and null cells--by the techniques of nylon fiber columns and cytotoxicity tests. The in vitro susceptibility of the fractionated lymphocytes to a virulent strain of infectious bursal disease virus (IBDV) was studied by using immunofluorescence as the infection criterion. B cells were highly susceptible. By contrast, T cells and null cells were insusceptible to infection by IBDV. The relationship between the target cells for virus infection and those B cells that possessed surface immunoglobulin (SIg) was tested. B cells were further divided into SIg(M)- and SIg(G)-bearing cells by immunoadsorbent columns employing anti-immunoglobulin M(IgM) (mu-specific) or anti-IgG (gamma-specific) sera coated with Sephadex. The SIg(M)-bearing cells were highly susceptible. These results suggest strongly that SIg(M)-bearing B cells were the target cells for infection by IBDV.     

Immunosuppression induced by infectious bursal disease virus.

Immunosuppression caused by infectious bursal disease virus (IBDV) is of major interest because of the widespread occurrence of the infection in commercial chickens. Infection with IBDV at an early age significantly compromises the humoral and local immune responses of chickens. The cellular immune response is also compromised by apparently to a lesser extent and for a short period. The immunosuppression seems to be a result of direct effect (lysis) of B cells or their precursors. Other mechanisms of immunosuppression have been suggested, notably the development of suppressor cells.     

Random cDNA probes to infectious bursal disease virus

Viruses from three commercially available modified-live infectious bursal disease virus vaccines were propagated in tissue culture. Following this, a series of 32P-labeled probes was generated using the entire RNA genome as template for formation of randomly primed cDNAs. These probes were tested against dot blots of the three vaccine strains, as well as the USDA standard challenge strain and one field-origin strain. Dot blots were made of both crude tissue extract and LiCl-precipitated RNA genome. All three probes detected the standard challenge and field strains. Although differences in probe binding could be quantified among the strains, cross-hybridization indicated considerable homology within genomic regions preferentially transcribed under the experimental conditions.     

传染性囊病病毒诱导细胞凋亡的初步观察

用１株ＩＢＤＶ强毒株感染易感小鸡，对病鸡法氏囊进行电镜观察及ＤＮＡ电泳分析，直接观察到病鸡法氏囊中Ｂ淋巴细胞凋亡的典型形态学特征和生化变化：染色质凝聚成团，集于核膜旁，胞膜与核膜出现凹陷，细胞拉长变形，最后细胞裂解成由膜包围着的小团，被网状细胞和巨噬细胞吞噬；感染ＩＢＤＶ２４～４８ｈ的法氏囊细胞总ＤＮＡ在电泳谱上呈梯状条带，而从正常的法氏囊提取的总ＤＮＡ在电泳谱上只有１条带。结果表明，ＩＢＤＶ感染小鸡之后，导致了法氏囊中Ｂ淋巴细胞的凋亡。作者据此推断，细胞凋亡是造成Ｂ淋巴细胞数量减少，从而导致小鸡免疫抑制的原因     

鸡传染性法氏囊病病毒的快速检测

随着 IBDV变异株的出现 ,发病鸡常不产生法氏囊的肉眼病变 ,由于传染性和非传染性因素亦可引起淋巴细胞减少和法氏囊坏死 ,所以 ,采取组织病理学方法诊断 IBDV感染并不完全可靠。由于主动性抗体应答需要一定的时间及大多数雏鸡都带有母源抗体 ,因此血清学早期诊断也不完全可靠。该试验采用本所研究的 IBD快速试纸与经典的琼扩试验 ,在对 IBDV的检测效果上进行了详细的比较 ,介绍如下。1　材料与方法1 .1　 IBD快速检测试纸　由河南省农业科学院生物技术研究所制备提供。1 .2　试验鸡　 1日龄试验鸡 30 0只由河南农业大学试验鸡场提…     

Age resistance in chickens against infectious bursal disease

The day old broiler chickens possessing IBD precipitating maternal antibody when exposed either to IBD contaminated environment or challenged intrabursally with virulent virus at weekly intervals indicated 100% susceptibility around 4–5 weeks of age. However, chickens lacking maternal antibody upon intrabursal challenge were found susceptible by 2 weeks of age.     

传染性法氏囊病病毒抗原表位分析--单克隆抗体的制备与鉴定

将传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株ZB和TA3的细胞培养物采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法浓缩纯化病毒,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了6株分泌抗IBDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系1C1、1E6、2B2、2G8、3A2、3E2。间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养上清液的抗体效价为102,诱生腹水的抗体效价为106～107。相加ELISA分析,这6株单克隆抗体对应不同的病毒抗原表位。中和试验结果表明,2G8对病毒有较强的中和能力,腹水的中和效价为105。用2B1和3E2配对建立的夹心ELISA可特异地检测IB DV。