壳聚糖固定化木聚糖酶的工艺研究

先对影响固定化木聚糖酶效果的几个单因素如壳聚糖质量浓度、戊二醛体积分数、给酶量等指标进行测定,然后采用L9(43)正交试验设计法对壳聚糖作为载体固定化木聚糖酶的工艺进行优化.单因素试验结果表明,当壳聚糖质量浓度为50和60 g/L时,其固定化酶活力较高;而交联剂戊二醛为60 mL/L时,所形成的载体与酶结含量达最大;将...     

球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及特性研究

研究了球形交联壳聚糖固定化果胶酶的制备及其特性。结果表明:壳聚糖溶液浓度为2.0%,凝结液组成为15%NaOH∶75%乙醇=4∶1(体积比),以5.0%戊二醛交联6 h,可制得交联壳聚糖球载体;1 g载体固定10 mg的果胶酶,载体先与酶液缓慢振荡混合40 min后,在固定化体系(pH 3.4,4℃)中固定反应12 h,该条件下制得的固定化酶强度大,酶活力回收率高达91.45%;固定化果胶酶的最适温度45℃,最适pH 3.4,Kmapp值9.97 mg/mL;固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高,连续使用7次后固定化酶活力还剩余53.74%。     

壳聚糖凝胶固定化绿豆乳糖酶的研究

以壳聚糖凝胶颗粒为载体,采用共价键偶联法固定绿豆乳糖酶.研究结果表明,以体积分数为 0.6%的戊二醛在常温下处理壳聚糖凝胶颗粒40 min后固定绿豆乳糖酶,固定化的最佳条件为:给酶量1.025 mg/g(蛋白质质量浓度为2.0 mg/mL)、pH7.0、温度4 ℃下固定 8 h,固定化酶活力为105.33 U/g、活力回收30.1 %.     

海藻酸钠交联包埋法固定化纤维素酶研究

以海藻酸钠为载体,采用交联包埋法固定化纤维素酶.考察各因素对固定化酶相对酶活力的影响,并通过正交试验确定纤维素酶最佳固定化条件为:以1％戊二醛为交联剂,给酶量为64.52 μg/mL,纤维素酶与海藻酸钠溶液在65℃条件下固定化2h,滴入2％ CaCl2溶液中制备固定化纤维素酶.固定化酶酶活力较游离酶高约80％,其最适pH值向碱性方向偏移,最适反应温度不变,且固定化酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶.     

离子交换树脂固定化果胶酶条件的优化研究

 以离子交换树脂为载体、戊二醛为交联剂,对果胶酶进行固定化。研究了温度、pH值、时间、加酶量、戊二醛浓度、交联温度、交联时间对果胶酶固定化效果的影响。研究表明,最佳固定化条件为：温度40℃,pH 5.5,固定化6 h,加酶量0.75 mL,戊二醛交联浓度0.1%,交联温度4℃,交联时间4 h。在此条件下固定化果胶酶的酶活回收率达到80%以上。     

以离子交换树脂为载体的果胶酶固定化研究

通过对广泛应用于工业上的10种吸附树脂和离子交换树脂进行果胶酶固定化载体的筛选,确定D311大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂为固定化果胶酶的最佳载体,并对果胶酶进行固定化研究.在固定化温度为36℃、加酶量为0.8 mL/g树脂、固定化时间为5h、固定化pH值为5、戊二醛交联浓度为0.10％、戊二醛交联温度为8℃、戊二醛交联时间为6h的试验条件下,固定化酶活回收率达到了91.2％.     

阴离子交换树脂固定化果胶酶及其酶学性质的研究

以阴离子交换树脂为载体，戊二醛为交联剂，对果胶酶进行先吸附后交联的固定化，研究吸附温度、吸附pH值、吸附时间、加酶量、戊二醛浓度、交联温度、交联时间对果胶酶固定化效果的影响，同时对固定化果胶酶的特性进行了研究。研究表明，最佳固定化条件为：温度40℃，pH5．5，固定化6h，加酶量0．75mL／g树脂（浓度为1％酶液），戊二醛交联浓度0．1％，交联温度4℃，交联时间4h。酶学特性研究表明，固定化果胶酶在最适温度60℃，最适pH4．0下具有较好的操作稳定性。     

固定化木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽工艺的研究

以戊二醛为交联剂,制备壳聚糖微球固定木瓜蛋白酶,研究固定化木瓜蛋白酶水解制备乳酪蛋白肽的工艺。结果表明,壳聚糖固定化酶的制备条件,给酶量为0．4％,壳聚糖浓度为4％,加入的戊二醛（终浓度达到1．0％）交联,制备微球交联时问为3h,制备得到的固定化酶活力最大,达167．1U／rag。水解试验结果表明,pH6．0,底物浓度4．0mg／ml,流速0．6ml／min,温度为55％的工艺条件下,固定化木瓜蛋白酶水解乳酪蛋白的水解度达43．65％。     

大孔树脂吸附-交联法固定脂肪酶

【目的】为基于大孔树脂吸附结合环氧交联剂交联法固定脂肪酶等工业用酶奠定基础。【方法】使用大孔树脂吸附,而后环氧交联剂交联的方法进行脂肪酶的固定化,研究各因素对吸附–交联固定化的影响,并采用响应面法对固定化条件进行优化,制备固定化酶并考察其稳定性。【结果】筛选出大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂。最佳固定化条件为:吸附温度45℃,给酶量60 mg·g–1,交联温度30℃,交联时间12.5 h,pH6.36,交联剂体积分数为0.7%。由上述条件制备所得的固定化酶活力为565.31 U·g–1,酶活力回收率为32.16%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性和酸碱稳定性均有明显提升;连续操作10次,固定化酶活力仍保留34.86%,操作稳定性较好;4℃条件下储存30 d,固定化酶活力仍保留64.81%。【结论】大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂制备的固定化脂肪酶热稳定性、酸碱稳定性均得到显著提升,且具有良好的操作及储存稳定性。     

壳聚糖微球的制备及其固定化木瓜蛋白酶的研究

用来源丰富且廉价,并具有许多优良生物特性的壳聚糖为原料,以简单易行的服交联法制备壳聚糖微球,并对其性状进行和分析。结果表明：它复合了壳聚糖与高分子微球的功能,然后,以壳聚糖微球为载体,用吸附－交联的联合固定化方法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果显示：木瓜蛋白酶的最佳固定化条件是给酶量为１．９２ｍｇ／ｇ、４～８℃吸附１２ｈ,再用体积分数为０．５％的戊二醛溶于４～８℃交联     

饲料中添加植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响

用添加不同水平植酸酶（0、500、1 000、1 500 U/kg）的饲料喂养初始体重为23 g左右的大口黑鲈Micropterus salmoides56 d,研究植酸酶对大口黑鲈生长和消化酶活性的影响。结果显示：饲料中添加1 000U/kg植酸酶能显著促进大口黑鲈的生长,降低饲料系数（P〈0.05）。1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈胃蛋白酶活性较对照组分别提高了28.14%和20.09%,差异显著（P〈0.05）;各处理组鱼幽门盲囊中蛋白酶活力与对照组相比差异显著（P〈0.05）,而肠道中蛋白酶活性差异不显著（P〉0.05）。与对照组相比,各处理组鱼肝胰脏和肠淀粉酶活性有所提高,但差异不显著（P〉0.05）;1 000、1 500 U/kg组大口黑鲈的胃淀粉酶活性有所降低,但差异不显著（P〉0.05）。     

全植物蛋白饲料中添加植酸酶对草鱼生长、非特异性免疫及消化酶活力的影响

选用初始体重为（39.68±3.05）g的草鱼作为试验对象,在全植物蛋白基础饲料中,设5个不同的植酸酶添加水平（500、750、1 000、1 250、2 500 U/kg）,另设2个对照组,对照组1（D1）：全植物蛋白基础饲料添加无机磷（Ca（H2PO4）2）,对照组2（D2）：全植物蛋白基础饲料不添加植酸酶和无机磷,开展了为期8周的饲养试验。研究了植酸酶对草鱼生长、非特异免疫及消化酶活力的影响。结果表明：对照组1鱼体的特定生长率最大,FCR显著低于其它各组（P〈0.05）;与对照组2相比,当植酸酶添加水平大于1 000 U/kg时,草鱼的饲料系数显著降低、蛋白质效率、特定生长率得到显著提高（P〈0.05）。当植酸酶添加水平大于1 000 U/kg时,血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著大于对照组2（P〈0.05）,对照组1的血清SOD活性显著高于其它各组（P〈0.05）;血清及肝胰脏中各组碱性磷酸酶（AKP）活性无显著性差异（P〉0.05）;添加植酸酶后肝胰脏中SOD活性增强,且当植酸酶含量为1 250 U/kg时,肝胰脏SOD活性显著高于对照组1和对照组2（P〈0.05）。当植酸酶添加水平大于1 000 U/kg时,草鱼肝胰脏和肠道中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性都明显增强。结果得出,当植酸酶添加水平为1 000~1 250U/kg时,全植物蛋白饲料中添加植酸酶有助于草鱼的生长、非特异性免疫机能的提高,并能有效增强草鱼肝胰脏和肠道中的消化酶活性。     

外源植酸酶对土壤磷酸酶、微生物及平邑甜茶幼苗生长的影响

以盆栽平邑甜茶幼苗为试验材料,通过向盆土浇灌液体植酸酶,探讨了外源植酸酶对根区土壤植酸酶活性、磷酸酶活性、速效磷含量、土壤微生物种类和数量及平邑甜茶幼苗生长特性的影响。结果显示,施入外源植酸酶制剂后,根区土壤植酸酶活性、磷酸酶活性、速效磷含量均显著提高,且提高幅度随着外源植酸酶用量的增加而增大;随着处理时间的延长,土壤植酸酶活性迅速下降后趋于平稳,磷酸酶活性总体呈逐渐上升趋势,速效磷含量快速上升后缓慢下降。外源植酸酶也显著提高了土壤微生物的数量,在植酸酶浓度为40000U／kg时,土壤细菌、放线菌、真菌分别比对照增加30．98％-69．00％、35．78％-249．18％和11．14％-271．28％。施人外源植酸酶第50天,平邑甜茶幼苗根系活力、株高、茎粗、叶面积、光合速率及叶绿素含量均显著提高。     

Cloning of a novel phytase from an anaerobic rumen bacterium,Mitsuokella jalaludinii,and its expression in Escherichia coli

The full length phytase gene of Mitsuokella jalaludinii was successfully cloned and was found to be 1 047 bp in length, with 348 amino acids, and was designated as PHY7 phytase gene. A comparison of the sequence of PHY7 phytase gene of M. jalaludinii with various microbial phytase gene sequences showed that it was not similar to those from other bacteria except Selenomonas ruminatium, thus suggesting that they may both express a new class of phytase. The PHY7 phytase gene was subsequently subcloned into bacterial expression vector, p ET32 a, for expression in Escherichia coli strain Rosetta-gami. Expression of the recombinant phytase gene was optimised and characterised. The recombinant phytase was estimated to be approximately 55 k Da by SDS-PAGE analysis. The recombinant phytase exhibited optimum activity at 55°C, p H 4.5 and showed good p H stability from p H 3.5 to 5.5(78% relative activity). Metal ions such as Ca2+, Mg2+, and K+ were found to exert significant stimulatory effect on the recombinant phytase activity while Cu2+, Fe3+, and Zn2+ greatly inhibited the enzyme activity. The recombinant phytase showed moderate resistance to trypsin proteolysis, but susceptible to pepsin proteolysis. The results of the study showed that several characteristics of recombinant phytase were slightly different from the native enzyme. Unfavourable characteristics such as reduced p H stability and metal ion effects should be taken into consideration during feed enzyme formulation.     

虾类加工副产物酶解工艺初探

为了提高虾类资源利用率以及加工副产物的风味,采用酶法水解技术对影响虾类加工副产物酶解程度的各个因素进行了研究,包括酶制剂及其用量、固液比、酶解时间、酶解温度和pH。通过一系列单因素实验和对酶用量、酶解时间、酶解温度的正交试验确定了最佳酶解条件。结果表明：最适酶制剂为由中性蛋白酶与风味蛋白酶复合而成的复合酶;酶用量分别为中性蛋白酶1 000 U/g,风味蛋白酶1 000 U/g;固液比为1：5,其中固体为20 g;最适合的酶解温度：第一段酶解为55℃,第二段酶解为50℃;酶解时间：第一段酶解为1 h,第二段酶解为3 h;最适pH为7.0。     

烟曲霉WY-1植酸酶基因的克隆及其在烟草中的表达

以自行筛选的烟曲霉WY-1为出发菌株,通过PCR方法克隆其植酸酶基因,并构建了含有植物信号肽序列的植酸酶基因植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法对烟草叶片进行了遗传转化.结果表明,PCR鉴定和Southern杂交分析说明植酸酶基因已整合到烟草的基因组中;RT-PCR检测结果证实了植酸酶基因已得到转录表达;酶活性分析表明功能性的植酸酶已成功表达在烟草中,这是烟曲霉植酸酶基因在烟草中的首次表达.     

松仁蛋白多肽的制备及组分分析

利用松仁蛋白为原料,以水解度为指标,对Alcalase蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶进行筛选,采用正交试验设计优化酶解条件,制备松仁蛋白多肽,并对多肽进行了组分分析。试验结果表明:Alcalase碱性蛋白酶作为松仁蛋白的水解酶,具有较高的水解度,最佳酶解条件为:温度50℃、pH值8.0、时间180min、酶用量5000U、底物质量分数6%、松仁蛋白酶解的水解度为30.06%。松仁多肽经SephadexG-25凝胶过滤层析分离,得到3个主要组分:PNP1～2的分子质量23105u、PNP3的分子质量为3776u左右、PNP4～7的分子质量249u;氨基酸组成分析表明,松仁多肽谷氨酸、精氨酸质量分数较高。     

植酸酶液体发酵条件研究(英文)

对绿色木霉LH374液体发酵生产植酸酶的条件作了研究,确立了所试因素的最佳组合:碳源为5%葡萄糖,氮源为3%胰蛋白胨和0.3%硝酸铵,金属离子为0.003%Fe2++0.003%Mn2+.每500 mL三角瓶装50 mL培养基,初始pH为6.5,接种量为5%.在最适条件下发酵72 h生成植酸酶的最高产量为2510 U.mL-1,平均产量为2490 U.mL-1.     

转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索

为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。     

植酸酶和木聚糖酶对仔猪钙、磷代谢及骨骼发育的影响

试验采用完全随机设计,将90头35日龄断奶仔猪分为5组,每组设3个重复,每个重复6头,研究在饲粮中添加植酸酶和木聚糖酶对断奶仔猪钙、磷代谢及骨骼发育的影响。5组分别饲喂：①玉米-豆粕基础饲粮（正对照组,PC）;②基础饲粮降低75％磷酸氢钙（负对照组,NC）;③负对照组饲粮＋植酸酶（植酸酶组,phy）;④负对照组饲粮＋木聚糖酶（木聚糖酶组,xy）;⑤负对照组饲粮＋植酸酶＋木聚糖酶（植酸酶-木聚糖酶组,pay—xy）,植酸酶的添加量为750U·kg^-1,木聚糖酶的添加量为4000U·kg^-1。结果表明：单独添加植酸酶和木聚糖酶或两者同时添加均使磷消化率极显著提高（P〈0.01）、排出量显著降低（P〈0．05）,血液磷浓度达到正常磷水平;添加酶的各组钙的消化率显著高于负对照组（植酸酶组、植酸酶一木聚糖酶组P〈0．01;木聚糖酶组P〈0．05）;添加酶的各组猪掌骨灰分均显著高于负对照组（P〈0．05）,但与正对照组无显著差异;添加植酸酶或木聚糖酶仔猪的酿骨强度均显著高于负对照组（P〈0．05）,但木聚糖酶组猪的跟骨强度仍显著低于采食正常磷饲粮的正对照组（P〈0．05）。因此,在断奶仔猪低磷饲粮中添加植酸酶或木聚糖酶都不同程度地促进了钙、磷的消化利用和骨骼生长,但两种酶同时添加没有显著的协同效应。