鱼类线粒体DNA的研究及其应用

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基于DNA条形码技术的永暑礁泻湖鱼卵鉴定研究

为了解南海珊瑚礁鱼类的产卵时间、产卵地点和种类分布,本研究以南海永暑礁泻湖鱼卵为研究对象,根据形态学特征和DNA条形码序列信息对其进行种属鉴定分析。71个鱼卵样品根据形态学特征分为圆形和椭圆形2种类型,圆形鱼卵44个,椭圆形鱼卵27个。利用DNA条形码技术扩增测序获得了30个鱼卵样品的线粒体COI条形码序列,经BOLD数据库比对分析显示30个鱼卵样品均可鉴定到种,分属于1个目,7个科,13个种。双斑栉齿刺尾鱼有10个鱼卵,白尾栉齿刺尾鱼有4个鱼卵,为该海域的优势种类,其余各种类均为1~2个鱼卵。根据线粒体COI序列计算种内的K2P(Kimura-2-parameter)遗传距离为0.002,同一个属种间的遗传距离为0.004~0.132,而同一个科不同属间的遗传距离为0.117~0.185。该研究结果表明DNA条形码技术可以作为鉴定南沙群岛珊瑚礁海域鱼卵的有效方法,能被广泛应用于南沙群岛珊瑚海区域鱼卵和仔稚鱼的鉴定工作。     

暗纹东方鲀mtDNA的分离纯化及其细胞素b基因的分子克隆

利用改进的差速离心法和碱裂解法制备并分离纯化了暗纹东方纯mtDNA,测得分子大小为19．4Kb。用线粒体特异染色法跟踪和监测线粒体提取,结果表明,25000-35000g能获得90％以上的高得率。利用制备纯化的mtDNA,已首次克隆了暗纹东方纯细胞色素b基因(cytb)。     

海参多糖的分离纯化方法及其主要生物活性

海参(Sea cucumbers)是民间珍贵的药膳食品,海参体壁中含有的多糖成分具有抗肿瘤、抗血凝、抗衰老、抗放射、增强免疫力等多种生理功能.本文介绍了海参多糖的分离、提取、纯化及纯度鉴定方面的相关技术,阐述了海参多糖主要生物活性及开发途径,并提出其研发方向.     

鱼类线粒体DNA控制区的分子结构及应用进展

对鱼类线粒体DNA控制区新的研究进展进行阐述.介绍了鱼类线粒体DNA控制区的分子结构、结构的分区情况和各区域的结构特点以及鱼类线粒体DNA控制区多态性及其主要检测方法;综述了最近有关鱼类线粒体DNA控制区在鱼类系统学、地理种群识别、类群的起源、地理分化和扩散等研究中的应用情况.     

一种快速分离λ噬菌体DNA的方法

大肠杆菌噬菌体λ(Lambda phage)是一种具有基因组约为50kb双链DNA的噬菌体。自1974年Murray，Thoma使用λDNA作为一种克隆载体以来，λDNA的制备方法有过不少报道。最近Silhavy等介绍了一种较好的方法，我们加以改进，先用差速沉降离心法浓缩噬菌体，然后用氯化铯(CsCl)不连续梯度沉降(Rate-Zonal Sedimentation)和氯化铯不连续梯度漂浮(Rate-Zona1 Floatation)两步离心法纯化噬菌体。     

接种DNA能增强鱼的抗病力

挪威科学家最近从哺乳动物身上成功地获得遗传物质(DNA)。并把它用于鱼类养殖，以增强鱼的抗病能力。用鲑鱼卵和鳟鱼作受体，注射这一新的遗传物质(DNA)，在最初几天存活率达100％。这种遗传接种方法为增加养殖和驯养生物的抗病能力开辟了新的前景。     

从草鱼肝细胞中分离大分子量的DNA的简便方法

DNA的分离是从事分子生物学、分子遗传学和基因工程研究所必须掌握的基本技术之一。在鱼基因库的构建中,首先就需要分离到大分子量(100 Kb以上)的鱼DNA作为克隆的材料。许多研究表明,真核生物的每个染色单体仅含有一条双螺旋DNA,其分子量平     

水蛭素的分离纯化与检测方法研究进展

天然水蛭素是从水蛭的唾液腺中分离出来的一种多肽,分子量7000道尔顿,由64-66个氨基酸组成[1]。水蛭素N端由二硫键形成的紧密结构能与凝血酶活性位点结合,其C端富含酸性氨基酸残基,则与凝血酶的纤维蛋白原结合位点结合,从而对凝血酶有高度特异的抑制作用,起到抑制凝血酶的抗凝血作用。在临床上多用于治疗不稳定性心绞痛(USA),急性心肌梗死(AM),血管成形术,术后血栓形成,血液透析,体外循环,肾移植(CRRT),弥散性血管内凝血(DIC)等病症[2,3]。由于天然水蛭素产量有限,不能满足临床应用的需求,因此1986年开始对重组水蛭素进行了大量的…     

基因组微卫星DNA位点的分离方法及其在水产动物中的应用

微卫星 DNA 是分布于基因组的1～6个碱基组成的串联重复序列,或简单序列重复。微卫星 DNA 具有多态性高、数量丰富、共显性遗传和分析简单等特点,应用越来越广泛,已成为最受青睐的分子标记之一。微卫星分子标记的获得首次必须从实验生物中分离。分离微卫星 DNA 位点的方法有多种。文章对几种微卫星 DNA 位点分离技术进行介绍和分析比较,为选择合适的分离方法提供参考。     

一种鱼类DNA的简便提取方法

比较了鱼类ＤＮＡ提取的２种方法。ＤＮｅａｓｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ抽提法所用材料少、ＤＮＡ得率高、简便,尤其适用于小型鱼类,抽提一般鱼类的组织用量只须２５ｍｇ。     

半滑舌鳎线粒体 DNA 含量测定方法的建立与优化

本研究旨在应用实时荧光定量PCR技术,建立半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体DNA(mtDNA)含量测定方法并进行优化.通过质粒标准品的线性化处理、模板DNA的酶切和超声处理、mtDNA和核DNA(nDNA)基因引物的筛选实验,建立半滑舌鳎mtDNA含量测定方法.结果表明,质粒标准品的构象对荧光定量PCR标准曲线影响较大,线性化的质粒更适合用作标准品;酚-氯仿方法提取的模板DNA适用于mtDNA含量测定,无需进行预处理;用D-loop和ND1这2对引物所得的拷贝数较小且结果一致,适用于mtDNA拷贝数的测定;以不同核基因为参照所得的mtDNA含量可能存在差异,当以单拷贝核基因ENC1和MYH6为参照时,可以计算出单个细胞中mtDNA含量,若以多拷贝基因GAPDH为参照,mtDNA含量测定值则较小.采用本方法分别对半滑舌鳎肝、肾、脾和肌肉组织的mtDNA含量进行重复性检测实验,结果表明,相同组织的mtDNA含量显示出良好的重复性(P＞0.05),而不同组织中mtDNA含量具有差异性,可见该方法稳定可靠,能为海洋鱼类mtDNA含量检测提供借鉴.     

鱼类不同保存方法的DNA提取及RAPD分析

为了探索一种既能使野外采集的鱼类组织标本DNA保存完好。又方便带回实验室用于RAPD分析的方法，本研究以4种不同鱼的尾鳍为材料。分别采取-20℃低温冷藏和100％乙醇固定的方法．对其进行DNA提取，并将提取的DNA作为模板。进行RAPD的比较分析，结果表明。采用100％乙醇固定保存的样品与-20℃低温冷藏的样品一样，二者均可得到高质量的DNA，DNA大小在21Kb左右。电泳带型整齐．无降解，RAPD的扩增结果也完全一致。说明用100％乙醇固定保存鱼类组织标本的方法方便有效。     

黄河鲶基因组DNA提取与纯化方法的研究

从鲶肌肉、肝、肾、血中提取基因组DNA。经过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,DNA带型整齐。紫外分光光度仪测定基因组DNA的D260 nm/D280 nm达1.77~1.82,证明所提取基因组DNA质量较好,可用作聚合酶链式反应(PCR)的模板所需。     

一种确定鱼类多倍体的简易方法

<正> 有些鱼类如银鲫,花鳅等在自然界存在有三倍体、四倍体种群。人工方法也能诱导产生一些鱼类的三倍体、四倍体。这些多倍体通常和二倍体个体在表型形态上没有显著差异,往往需要通过染色体检查或DNA含量测定、同功酶分析等复杂方法加以鉴定。鱼类多倍体的红血球的细胞及细胞核一般大于同种二倍体个体。Swarup等人(1959)以红血球大小作为标志鉴定刺鱼的三倍体,表