大肠杆菌肠毒素ST1—LTB融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１ＬＴＢ融合蛋白的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原,免疫小鼠,结果免疫小鼠至少能抵抗１５ＭＬＤ的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ,ＳＴ＋,ＬＴ＋）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后,采集的血清能够中和天然ＳＴ１的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。     

Pathogenic,Enterotoxin-Producing Staphylococci in Mink Feed and Mink Feed Raw Materials

Samples of 51 mink feeds and 101 raw material batches were analysed for pathogenic staphylococci. Of the feed samples 37 % were contaminated with pathogenic staphylococci, the mean count being 3.02 log CFU (colony forming units)/g and the highest count being 4.48 log CFU/g of feed. Of the raw materials investigated, slaughter-house offals were most frequently contaminated and contained highest counts of S. aureus, 60 % of the samples being positive with a mean log count of 3.86/g and a maximum of 5.70/g. Forty-eight staphylococcal isolates were tested for eniterotoxin production. Toxin A, B or G were produced by eight isolates, A being the most common. None of the isolates produced B or E toxins.     

沙门菌肠毒素基因克隆及序列分析

研究常见的不同血清型沙门菌肠毒素(stn)基因核苷酸序列之间的差异及其分布情况。根据沙门菌的stn核苷酸序列设计一对引物,应用PCR技术,分别对肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌进行PCR扩增,对扩增产物进行克隆及序列分析,并用所设计的引物检测7种血清型沙门菌(42株)。结果显示,3种沙门菌经PCR均扩增出749 bp的特异条带,DNA序列分析证实,沙门菌的stn核苷酸序列比较保守,42株沙门菌stn的检出率为100%。本试验成功克隆出沙门菌的stn,调查其在不同血清型沙门菌中的分布及序列分析,为进一步研究stn致病机理及研制减毒沙门菌活菌疫苗奠定了基础。     

抗A型产气荚膜梭菌单克隆抗体的研制和鉴定

本试验用NSo细胞和产气荚膜梭菌肠毒素免疫的BALB／C小鼠脾细胞融合，获得了2株能分泌抗A型产气荚膜梭菌肠毒索单克隆抗体的杂交瘤细胞。经鉴定．这2株杂交瘤细胞的平均染色体数目为96．8条，单抗亚类为IgG1，杂交瘤细胞培养上清及腹水单克隆抗体的效价均较高，而且与其他几种常见的毒素SE、LT、S—LT、产气荚膜梭菌α毒素等不存在交叉反应。1D5能完全中和NCTC8239、S020718所产生的CPE的生物学活性，而284的中和活性则较差。     

表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合蛋白的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗2MLD的大肠杆菌强毒株C83902（K88ac,ST^ ,L^ )的攻击，用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ST1的毒性，这表明构建的工程菌株BL21（DE3）（pXKST3LT5)可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。     

产气荚膜梭菌肠毒素的致病机理研究进展

产气荚膜梭菌是一种重要的人兽共患病的病原体，可引起人的食物中毒和抗生素相关腹泻，产气荚膜梭菌肠毒素是该菌的一个非常重要的致病毒素，在引起人的胃肠疾病方面起着关键性的作用，本文对产气荚膜梭菌肠毒素产生、细胞毒性和组织学作用以及在胃肠粘膜上造成损伤的致病分子机理等方面的研究内容进行论述。     

产气荚膜梭茵肠毒素的分子生物学研究进展

产气荚膜梭茵（Clostridium perfringens）是一种重要的人兽共患病的病原体，它是一类革兰氏阳性产芽孢的厌氧梭茵，可引起人的食物中毒和肠毒素相关腹泻。近年来，研究人员发现由产气荚膜梭茵导致腹泻的主要原因与该茵在芽孢形成过程中产生的一种肠毒素有关。文章重点针对产气荚膜梭茵肠毒素的生物学特性和致病机制等方面的研究做一综述。     

鸡致病性大肠杆菌肠毒素(LT)的鉴定及其基因的克隆

鸡致病性大肠杆菌分离株O78经家兔肠袢结扎试验(RILT)证实,该菌株产生热敏性肠毒素(LT)。用PCR技术从该菌株中扩增出1.2kb的LT基因,然后将纯化的PCR产物克隆到pGEM-T载体中,转化至受体菌JM109中。用Amp/IPTG/X-gal琼脂平板蓝白菌落筛选得到阳性重组菌株,提取质粒用SphI和SalI双酶切鉴定,结果证实,构建的克隆质粒pXCLT1含有LT基因。     

Prevalence and risk factors for carriage of multi-drug resistant Staphylococci in healthy cats and dogs

We investigated the distribution of commensal staphylococcal species and determined the prevalence of multi-drug resistance in healthy cats and dogs. Risk factors associated with the carriage of multi-drug resistant strains were explored. Isolates from 256 dogs and 277 cats were identified at the species level using matrix-assisted laser desorption ionisation-time of flight mass spectrometry. The diversity of coagulase-negative Staphylococci (CNS) was high, with 22 species in dogs and 24 in cats. Multi-drug resistance was frequent (17%) and not always associated with the presence of the mecA gene. A stay in a veterinary clinic in the last year was associated with an increased risk of colonisation by multi-drug resistant Staphylococci (OR = 2.4, 95% CI: 1.1~5.2, p value LRT = 0.04). When identifying efficient control strategies against antibiotic resistance, the presence of mechanisms other than methicillin resistance and the possible role of CNS in the spread of resistance determinants should be considered.     

大肠埃希菌不耐热肠毒素研究进展

大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)是产毒性大肠埃希菌产生的一种能导致人畜腹泻的毒素,由六聚体蛋白形成AB5型结构.A亚基具有ADP核糖基转移酶活性,而B亚基为五聚体,主要与表达于真核细胞表面的神经节苷脂GM1结合.LT具有很强的免疫原性和黏膜免疫佐剂活性.为了将其毒性与佐剂活性分开,研究者构建了一系列无毒或减毒的突变体.证明突变体具有佐剂活性,并发现没有毒性的AB复合物以及酶活性在佐剂活性中发挥的作用是分开的.野生型LT、LT突变体以及B亚基与外源抗原共同免疫机体后,对机体免疫系统具有调节作用.     

大肠杆力不耐热肠毒素突变体LTR72基因的克隆及序列分析

利用PCR和点突变PCR技术，制备了大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）突变体LTR72和LT的基因片段，经酶切连接后构建了突变体重组质粒pLTR72，经酶切和序列测定证明重组子构建正确，目的突变点第72位的丙氨酸密码子已被突变成为精氨酸密码子。同时，试验构建了可以表达天然LT的表达质粒pLT作对照，二级结构分析表明，LTR72及LT之间没有显著差异。     

产气荚膜梭菌肠毒素的分子生物学研究进展

产气英膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病的病原体,它是一类革兰氏阳性产芽孢的厌氧梭菌,可引起人的食物中毒和肠毒素相关腹泻.近年来,研究人员发现由产气英膜梭菌导致腹泻的主要原因与该菌在芽孢形成过程中产生的一种肠毒素有关.文章重点针对产气英膜梭菌肠毒素的生物学特性和致病机制等方面的研究做一综述.     

空肠弯曲菌肠毒素产生最佳培养条件的研究

通过对C.jejuni产生CE的最佳培养基及多粘菌素B、Fe     

大肠埃希菌不耐热肠毒素作为黏膜免疫佐剂的研究进展

免疫佐剂是一类通过刺激机体免疫系统而非特异性地增强机体对抗原免疫应答的活性物质,也是近年来研究的热点.免疫佐剂种类众多,利用细菌及其代谢产物作为黏膜免疫佐剂具有很好的发展前景,研究较多的是霍乱毒素(CT)和大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT),从研究效果看,LT比CT更为理想.但是LT和CT一样本身具有毒性,这是其作为黏膜佐剂的主要缺点.目前,国内外研究工作者对其突变体做了大量研究,以期找到具有黏膜佐剂活性但低毒或无毒的大肠埃希菌不耐热肠毒素突变体.文章对大肠埃希菌不耐热肠毒素分子及其突变体的研究做一综述.     

仔猪粪样中大肠杆菌肠毒素基因的检测

本实验用针对大肠杆菌肠毒素基因 L T( heat-labile)、STa( heat-stable )、STb( heat-stable )的引物直接对从猪场采集的腹泻仔猪的粪便总 DNA进行扩增。结果表明只有 STb基因被检测到。把检测到的 DNA片段克隆测序 ,得到 1 75bp的片段 ,与 Gen Bank中大肠杆菌热稳定性肠毒素基因 STb 1 0 0 %同源。通过 South-ern blot,STb基因也能够被特异、准确、灵敏地检测出来。本实验直接检测仔猪粪样 DNA中的肠毒素基因的片段 ,为致病性大肠杆菌的检测提供了一种更快捷的方法。     

电针对大肠杆菌热敏肠毒素致肠水、钠分泌的拮抗作用

新生仔猪下痢是严重危害养猪业的常见病、多发病,而肠致病性大肠杆菌产生的肠毒素特别是热敏肠毒素(Heat-Labileenterotoxin,LT)则是导致幼畜腹泻的直接致病因子。在兽医临床上,由于广泛使用抗菌药物治疗仔猪下痢,大肠杆菌对这些药物普遍地产生了耐药性,致使临床疗效越来越差。针灸疗法是我国传统医学的宝贵遗产,已有不少文献报道了针灸对哺乳仔猪下痢良好的防治效果,但有关针灸防治仔猪下痢机理的研究则相对滞后。为此,本试验应用兔回肠结扎实验动物模型观察了电针刺激对大肠杆菌热敏肠毒素致肠水、钠分泌的拮抗作用,以便为针灸防治…     

表达耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响

试验旨在研究表达耐热肠毒素（STa）的重组大肠杆菌对7日龄仔猪肠道形态结构及抗氧化功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分在4个日粮处理组,分别为对照组（人工乳）,STa组（人工乳+2×10⁹ CFU重组菌LMG194-pBAD-STa）,LMG194组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌LMG194）,K88组（人工乳+2×10⁹ CFU大肠杆菌K88）。试验第5天进行攻毒,第7天屠宰取样,测量小肠黏膜的绒毛高度和隐窝深度,检测空肠、回肠、结肠及血清中的过氧化氢酶（CAT）、总一氧化氮合成酶（TNOS）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活力及血清中丙二醛（MDA）与过氧化氢（H₂O₂）的含量。试验结果表明,与对照组相比,STa组仔猪各肠段绒毛高度均显著降低（P<0.05）,十二指肠隐窝深度及绒毛高度与隐窝深度的比值显著降低（P<0.05）,十二指肠、空肠、回肠绒毛表面积显著降低（P<0.05）;同时,STa组回肠、结肠CAT活力显著降低,血清、空肠、回肠和结肠中的TNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组结肠iNOS活力显著降低（P<0.05）,STa组血清中的MDA与H₂O₂含量显著提高（P<0.05）。结果显示,表达STa的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪肠道结构损伤和抗氧化能力下降。     

表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响

试验旨在研究表达Ⅰ型耐热肠毒素(STa)的重组大肠杆菌对7日龄仔猪小肠功能的影响。选取24头7日龄仔猪,随机分为4个处理组,分别为对照组、STa组、LMG194组和K88组。整个试验期间均以人工乳饲喂,预饲期4d,试验第5天进行攻毒,STa组、LMG194组及K88组分别在早晚两次口服灌喂2×109 CFU大肠杆菌LMG194-pBAD-STa、LMG194和K88,对照组灌服等量生理盐水,试验第7天早上各组灌服D-木糖并采血,屠宰并取空肠、回肠组织样品,测量仔猪血常规指标、血浆D-木糖含量及二胺氧化酶(DAO)活力,以及吸收与转运相关基因与蛋白表达量。结果显示,与对照组相比,STa组仔猪血液中中性粒细胞、中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05),LMG194组与K88组仔猪血液中中性粒细胞比率显著降低(P<0.05),淋巴细胞比率显著升高(P<0.05);STa组与K88组仔猪血浆D-木糖含量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组血浆DAO活力显著升高(P<0.05);STa组与LMG194组空肠AQP8、AQP10、KCNJ13和b0,+AT基因表达量均显著降低(P<0.05),K88组空肠AQP8、AQP10基因表达量显著升高(P<0.05);STa组回肠AQP8基因表达量显著降低(P<0.05),AQP10、SGLT-1基因表达量显著升高(P<0.05),LMG194组、K88组AQP8基因表达量显著升高(P<0.05),K88组AQP10、KCNJ13、b0,+AT、SGLT-1基因表达量显著降低(P<0.05);STa组、LMG194组及K88组空肠HSP70蛋白的表达量显著升高(P<0.05)。以上结果表明,表达Ⅰ型耐热肠毒素的重组大肠杆菌可导致7日龄仔猪小肠产生炎症,吸收与转运能力下降。     

Effects of Recombinant E. coli Expressing Heat-stable Enterotoxin on Intestinal Morphology and Antioxidant Capacity in Seven Days old Piglets

This experiment was conducted to investigate the effects of recombinant E.coli expressing heat-stable enterotoxin(STa) on intestinal absorption and barrier function, intestinal morphology and antioxidant capacity of 7 days old piglets. Twenty-four 7 days old piglets were allotted to four treatments:control group (artificial milk), STa group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli LMG194-pBAD-STa), LMG194 group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli LMG194), and K88 group (artificial milk +2×10⁹ CFU E.coli K88).The pigs were treated with E.coli on the 5th day and slaughtered on the 7th day. The results showed that, compared with the control group, villus height in jejunum, ileum and duodenum, crypt depth and villus height/crypt depth in duodenum, and small intestine villi surface area were significantly decreased in STa group (P<0.05). The activities of catalase (CAT) in ileum and colon, total nitric oxide synthase (TNOS) in serum, ileum, jejunum and colon, inducible nitric oxide synthase (iNOS) in colon were significantly decreased in STa group (P<0.05). STa group also had a higher levels of malondialdehyde (MDA) and hydrogen peroxide (H₂O₂) in serum (P<0.05). These results suggested that recombinant E.coli expressing STa could lead to intestinal injury and oxidative stress of 7 days old piglets.     

Expression of Putative Escherichia coli Heat-labile Enterotoxin (LT) Receptors on Intestinal Brush Borders from Pigs of Different Ages

Many strains of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) that cause diarrhoea in young piglets secrete a heat-labile enterotoxin (LTp) that binds to specific glycoconjugates on porcine intestinal epithelial cells. Binding of LTp to an appropriate glycoconjugate facilitates the uptake and trafficking of the toxin into the cell, where it stimulates intracellular changes that promote fluid secretion and diarrhoea. The objective of the current study was to identify the LTp-binding glycoconjugates on porcine intestinal epithelial cells, the natural target cells for LTp. We found that LTp binds, in an age-correlated manner, to an acidic glycosphingolipid (GSL) that co-migrated with GM1 on thin-layer chromatography (TLC), a small acidic GSL that appears to be a sulphatide, a neutral GSL that co-migrated with neolactotetraglycosylceramide (nLc4) on TLC, and two glycoproteins (36 and 205 kDa). Of these potential LTp receptors, the GM1-co-migrating GSL was detected most intensely in young animals, while the other four LTp-binding glycoconjugates were detected most intensely in older pigs (54 weeks). Since ETEC primarily cause disease in young piglets, the GM1-co-migrating GSL is the most likely candidate for a functional LTp receptor.