鸡源性多重耐药沙门氏菌 类整合子与耐药基因研究

本试验旨在了解鸡源性沙门氏菌分离株多重耐药与Ⅰ类整合子及耐药基因的携带关系。采用K-B纸片法对29株鸡源性沙门氏菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感试验;应用PCR技术对分离菌株进行Ⅰ类整合子及耐药基因检测。29株分离株中有13株对2种以上抗菌药物耐药,属于多重耐药株,氨苄西林-四环素-头孢唑啉-复合磺胺是主要多重耐药谱;13株多重耐药菌中有8株携带Ⅰ类整合子,blatem-1、tetA和tetB基因检出最高。结果表明沙门氏菌多重耐药性与整合子的携带之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果基本一致。     

肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌耐药基因检测及耐药相关性分析

[目的 ]了解肉鸡屠宰生产链中的沙门氏茵耐药性与耐药基因的相关性。[方法 ]采用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC),对从肉鸡屠宰生产链中分离鉴定的233株沙门氏菌进行13种抗生素药敏实验;采用PCR方法检测15种耐药基因。[结果 ]233株肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌对庆大霉素的耐药率最高(100%);对多西环素、氨苄西林、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺甲恶唑耐药率分别为84.94%、75.73%、67.78%、56%、52%、50%。233株沙门氏菌中,有231株至少含有1种耐药基因,其中blatem、bla CMY-1、tet B、tet G、tet X、aad A1和cat1基因检出率分别为80.26%、57.94%、54.94%、65.67%、58.37%、63.52%和72.53%。72%的菌株表现为多重耐药,共计57种耐药谱型。[结论 ]肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌对常见抗生素具有不同程度的耐药性,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中;药敏实验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性。     

四环素耐药基因在鸡源沙门氏菌中的分布和传播

试验分析了84株鸡源沙门氏菌分离株的四环素耐药性,用PCR方法检测四环素耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,四环素耐药率为49%(41/84),鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌仅携带tet(A)基因(23/23),肠炎沙门氏菌和德尔卑沙门氏菌携带tet(A)(8/18)、tet(B)(17/18)或tet(G)(10/18)三种基因,tetC基因在这些沙门氏菌中都没有检测到。该类基因多数位于结合性质粒上,但是不在整合子范围内。     

新疆猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因检测

为了解新疆某规模化养殖场猪源沙门氏菌对临床上常用抗菌药物的耐药情况,以及β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和质粒介导的喹诺酮耐药（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）基因的流行情况,本试验通过琼脂稀释法对分离的菌株进行最小抑菌浓度测定,PCR方法进行β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CMY-2、bla_CTX-M、bla_LAP-1、bla_KPC、bla_OXA和bla_SHV基因,16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB及PMQR类基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac（6'）-Ib-cr的检测,确定阳性菌株,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。分离的猪源沙门氏菌对环丙沙星和安普霉素耐药率最高,均为77.9%（102/131）,耐药菌主要以8耐为主（29.0%,38/131）。从被检基因中检测出11种耐药基因,不同基因共存有24种类型,主要以bla_TEM+bla_OXA+qnrS+aac（6'）-Ib-cr+oqxA+oqxB（27.6%,32/116）;bla_TEM+bla_OXA+qnrS+oqxA+oqxB（24.1%,28/116）;bla_TEM+qnrS（18.0%,21/116）形式共存。该养殖场分离的沙门氏菌耐药现象严重,分离耐药菌株存在β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类基因共存现象,提示应加强对β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类因子的监控。     

规模化猪场猪源沙门氏菌的耐药性及相关耐药基因检测

为了解贵州省某规模化猪场猪源沙门氏菌分离株的药物敏感性和耐药基因的存在情况,也为进一步研究细菌耐药的分子机制和临床用药提供资料,利用K-B法检测了6株猪源沙门氏菌对15种药物的敏感性,采用PCR方法检测了9种常见耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,所有菌株对青霉素、氨苄西林和吡哌酸的耐药率最高均为100%,对头孢克洛、链霉素和庆大霉素的耐药率最低。从9种常见耐药基因中扩增到3种β-内酰胺类耐药、3种氨基糖苷类、2种氟喹诺酮耐药基因。研究表明,沙门氏菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。     

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法，选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物，对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果有28株菌（93．3％）至少对一种药物有耐药性；对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉索和氯霉素有耐药性的菌株较普遍，在所有菌株中占比例分别为83．3％、80％、80％、76．7％、60％、56．7％和56．7％。设计了25对引物，对耐药基因进行了扩增及序列测定，结果扩增到13种耐药基因，与GenBank中的相应基因有很高的同源性（≥98．1％）。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株（93．3％），sul1、aph（3′）-Ⅱa、tetC、Catl、tetA和aadAl耐药基因较为普遍，检出率分别为76．7％、60％、60％、43．3％、40％和36．7％。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性（≥88％）。     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药基因定位的研究

从北京郊区鸡场分离到１０株耐 药性金黄色葡萄球菌,对这些菌株进行质粒消除,根据质粒消除前后的耐药性检测,发现耐各种药物的抗性基因大多数位于质粒上,少部分抗性基因位于染色体上,由质粒介导的耐药基因占７２．５％,由染色体编码的抗性基因占２７．５％,说明质粒在决定对抗生素的抵抗性中起主要作用。     

禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析

为了解江苏苏中地区禽源沙门氏菌耐药现象及耐药基因的存在情况,采用K-B法对22株沙门氏菌分离株进行12种抗菌药物敏感性试验,并通过PCR方法检测了12种耐药基因的存在情况。结果显示,所有菌株对甲氧胺嘧啶、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酮酸、诺氟沙星的耐药率均在72.73%～100%之间;存在着5种耐药表型,每个耐药表型均在4重或4重以上,耐药最多菌株可耐受10种药物;扩增出9种耐药基因,与GenBank中的参考序列同源性均在98%以上;耐药表型与耐药基因的存在基本一致,但无绝对相关性。本研究结果表明苏中地区沙门氏菌耐药现象非常严重,且耐药基因广泛存在。     

京津冀地区猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因分析

研究旨在为防控沙门氏菌引起的猪疾病以及指导猪场用药提供一定参考。试验对京津冀地区猪饲料厂、猪养殖场、猪屠宰场、超市、农贸市场等采集的饲料、猪肛拭子、水、猪肉等样品中沙门氏菌进行分离鉴定,对50株7类以上药物耐药的菌株进行全基因组测序,分析其耐药基因分布情况。对分离筛选得到沙门氏菌菌株通过抗菌药物浓度梯度法测定其对22种抗菌药物的敏感性,结合全基因组测序结果,分析不同来源沙门氏菌耐药基因。结果显示：5 024份样品中共检出沙门氏菌484株,平均检出率为9.63%;484株沙门氏菌对22种抗菌药物的耐药性检测,耐药率是86.16%。耐药率大于30%的抗菌药物有庆大霉素（30.8%）、阿莫西林（31.6%）、四环素（36.8%）、多西环素（33.5%）、萘啶酸（31.8%）。对耐受7种以上抗菌药物的50株沙门氏菌进行全基因组测序,并对耐药基因进行分析,共检出43种耐药基因,其中aac6’-Iaa、aadA1、aph(3’)-Ia、aph(3’’)-Ib、aph3’-Iia、aac3-Iid、mcr-1、tet(B)、sul1、sul2、gyrA、floR、dfrA12、aac(6’)-Ib-...     

泰州地区鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因的检测

为探究泰州地区某规模化孵化场鸡胚源沙门氏菌的生物学特征,试验对临床疑似沙门氏菌感染的死亡鸡胚中的沙门氏菌进行选择性增菌和分离,并对分离菌进行革兰氏染色鉴定、特异性基因扩增、毒力基因检测、药物敏感试验和耐药基因检测。结果表明：共分离到6株细菌,在沙门氏菌显色培养基上均呈现紫色小菌落,均为革兰氏阴性菌,特异性基因扩增鉴定为鸡伤寒沙门氏菌;从6株菌中共检测出15种毒力基因,除均不携带sopE基因外,sipA、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA基因携带率为100%(6/6),sipC、sseL基因携带率为83.3%(5/6),ssaR、spvB基因携带率为66.7%(4/6);6株菌对大部分抗生素敏感,仅对多西环素(66.7%,4/6)、林可霉素(100%,6/6)、阿奇霉素(83.3%,5/6)和多黏菌素B(83.3%,5/6)的耐药率高于50.00%,3重耐药率为83.3%(5/6),4重耐药率为66.7%(4/6),5重耐药率为16.7%(1/6),6重耐药率为0(0/6);从6株菌中共检测出5种耐药基因,其中tet(A)、tet(B)...     

河南鸡源沙门菌的分离鉴定及其耐药性分析

对来自河南郑州、许昌、周口等20个地市101个鸡场的161份疑似沙门菌感染的病料进行病原菌分离鉴定和耐药性试验。通过细菌分离培养、形态染色、生化试验、血清学试验、致病性试验,结果分离鉴定出33株沙门菌,且均具有明显的致病性。药敏试验发现,33株分离株除对头孢曲松较为敏感(51.5%)外,对其他13种药物均呈不同程度耐药性,对复方新诺明的耐药率最高,为81.8%(27/33),其次为喹诺酮类药物,且表现为交叉耐药现象。对环丙沙星产生耐药性的菌株占分离株总数的75.7%(25/33),对诺氟沙星耐药的菌株占69.7%(23/33),对氧氟沙星耐药的菌株占63.6%(21/33)。结果表明:不同地区的分离菌株对各种药物的耐药性不同,同一地区的分离菌株对各种药物的耐药性也存在显著差异。     

247株猪源沙门菌对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测分析

为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A~δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。     

广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析

本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示,245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%（152/245）,共鉴定出19种血清型,其中主要血清型有阿贡纳（Salmonella Agona,29/152,19.08%）、科瓦利斯（S.Corvallis,25/152,16.45%）以及肯塔基（S.Kentucky,20/152,13.16%）。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑（100%）、萘啶酸（90%）、四环素（75%）、氨苄西林（65%）、头孢他啶（55%）、环丙沙星（55%）的耐药率较高,有85%（17/20）的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示,95%（19/20）的菌株具有gyrA突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly）,其中有57.89%（11/19）的菌株发生gyrA双突变（Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly）,5.26%（1/19）发生gyrA三突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly）;100%（20/20）的菌株具有parC突变（Tyr62Ser、Ser85Ile）。45%（9/20）分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性（PMQR）基因（aac（6'）-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB）,最常见的是aac（6'）-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因bla_TEM-1、bla_OXA-1和bla_CTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示,肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性,部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重,对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重,具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能,为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。     

四川部分区域鸽源沙门菌耐药表型及耐药基因检测

为了解四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌的耐药表型及耐药基因携带情况,通过常规细菌分离鉴定并结合PCR方法,获得42株鸽源沙门菌,采用K-B纸片法,选取20种抗生素,对42株鸽源沙门菌进行药敏试验,并结合PCR方法对其耐药基因携带情况进行检测。结果显示:受检菌对链霉素、四环素、多西环素耐药率为88. 1%;对阿莫西林耐药率为83. 3%;对头孢拉定、氨苄西林、萘啶酸的耐药率为81. 0%。42株沙门菌皆有不同程度的多重耐药性,其中33株同时耐4种以上抗生素,占检测菌株的78. 6%(33/42),主要的耐药谱为CTX-CRO-FLO-CPIOFL-AKN。42株沙门菌喹诺酮类耐药基因aac (6')-Ib-cr检出率最高,为88. 09%(37/32);氨基糖苷类耐药基因aadA1、aph (3)Ⅱ、aac(3)Ⅱ检出率分别为80. 95%(34/42)、76. 19%(32/42)、16. 67%(7/42);β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1、bla CMY-2检出率分别为42. 86%(18/42)、19. 04%(8/42);四环素类耐药基因tet M、tet A、tet B检出率分别为40. 4%(17/42)、38. 09%(16/42)、9. 52%(4/42);磺胺类耐药基因sul2检出率为80. 95%(34/42);喹诺酮类耐药基因qnrA检出率为38. 09%(16/42)。结果表明:四川省成都市及周边区域鸽源沙门菌存在普遍耐药,且多重耐药较为严重,耐药基因携带率高。     

鸭源沙门菌江苏分离株的生物学特性研究

为了解鸭源沙门菌江苏分离株的主要生物学特性,本研究对2012年至2013年从发病或死亡鸭中分离的33株沙门菌分离株进行鉴定,即采用玻片凝集法对分离的沙门菌进行血清学分型,多重PCR方法检测17种毒力基因的分布,按照美国临床和实验室标准化研究所制定的方法进行药物敏感性检测,通过结晶紫半定量法检测分离菌株的生物被膜形成能力.33株鸭源沙门菌的血清学分型结果显示,查理沙门菌占48.5％,为优势血清型.毒力基因检测结果显示,pagC、msgA、sipB、prgH、spaN、tolC、iroN、sopB及pefA为保守基因.药物敏感性检测显示,42.4％的菌株耐受8种以上药物.生物被膜检测显示,有14株细菌生物被膜形成能力为中等以上,其中57.1％的菌株耐8种以上的药物.     

驴源马流产沙门菌的耐药表型及毒力基因检测

为了解驴源马流产沙门菌临床分离株的耐药表型及毒力基因的携带情况,本试验通过K-B药敏纸片扩散法对9株马流产沙门菌进行11种临床常用抗菌药物的敏感性测试,采用PCR方法检测与沙门菌致病性相关的10种毒力基因。结果显示:9株驴源马流产沙门菌存在2种耐药表型,对链霉素耐药率达100%,对阿莫西林耐药率为33%;10种毒力基因中仅traT未被检出,invA、avrA、ssaQ、mgtC、sopB、spvC、spvR、pefA和misL的检出率均为100%。结果表明,驴源马流产沙门菌耐药谱较为单一,但携带的毒力基因为多样性组合。     

鸡源印第安纳沙门菌多重耐药性分析

采集山东不同地区鸡源沙门菌,根据Kauffmann-White方法测定分离株血清型,采用肉汤微量稀释法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测10种耐药基因,分析耐药表型和耐药基因之间的关系。结果显示：共鉴定出沙门菌80株,其中印第安纳沙门菌60株。药敏试验证实：60株印第安纳沙门菌对阿莫西林-克拉维酸、头孢唑啉、多黏菌素、氨苄西林、多西环素和甲氧苄啶等16种抗菌药物普遍耐药。88.33%菌株多重耐药分布在12~15耐,未发现3耐以下的菌株。PCR扩增出int1,blaTEM,aac（6’）-Ib-cr,floR,catA1,tetA,strA,cmlA 8种耐药基因。超过90%的菌株携带int1,blaTEM,floR和aac（6’）-Ib-cr耐药基因。上述结果表明,耐药表型及耐药基因的符合呈现相关性。     

Analysis of Salmonella enterica serotype Enteritidis isolated from human and chickens by repetitive sequence-PCR fingerprinting, antibiotic resistance and plasmid profiles

A total of 22 Salmonella enterica serotype Enteritidis (S. Enteritidis) strains isolated from human and chicken were subjected to DNA fingerprinting by repetitive sequence PCR using ERIC and BOX primers, antibiotic resistance and plasmid patterns. Both ERIC and BOX PCR amplification data revealed a highly genetic homogeneity between isolates from human and chicken except one isolate, which originated from chicken and showed a different DNA band pattern from others. Eleven of 22 S. Enteritidis isolates (50%) were resistant to more than one antibiotics and characterized by 5 resistance patterns. The most common pattern was penicillin resistant (63.6%). Only one isolate from chicken showed a multiple drug resistance patterns to 4 antibiotics. All 22 S. Enteritidis isolates harbored more than two plasmids with eight different plasmid profiles including two to six plasmids with approximate molecular size ranging from 1.9 to 21 kb. A band of 15 kb size was detected in all isolates tested, however, the band sizes smaller than 15 kb were found only in isolates from chicken.     

鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

通过对临床病死雏鸡的肝和心血处进行采样、分离、鉴定,获得13株致病性沙门氏菌。采用Kirby-Bauer法检测13株分离菌对10种抗菌药物的敏感性,结果表明,细菌对10种临床常用抗菌药物均表现出较高的耐药性,且均为两重或两重以上耐药,有的甚至达到对其中8种药物产生耐药性。13株分离菌对四环素的耐药率已高达100%,对复合磺胺、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、头孢唑啉和氯霉素的耐药率分别为92.3%、84.6%、84.6%、84.6%、69.2%、23.1%和7.7%;对庆大霉素和卡那霉素敏感。结果表明,沙门氏菌的耐药现象已十分严重。