某奶牛场牛病毒性腹泻的血清学调查

为了解某奶牛场牛群牛病毒性腹泻感染情况,随机对440份牛血清进行牛病毒性腹泻抗体和抗原检测。结果显示,抗体和抗原的阳性率分别为7.73%和0.68%,牛病毒性腹泻抗体/抗原阳性样品转换值的平均值分别为0.900和3.303,高于判定阳性的临界值,证实该奶牛场牛群确实存在牛病毒性腹泻感染。     

新疆部分规模化奶牛场牛病毒性腹泻调查

为了了解新疆部分规模化奶牛场BVDV的感染情况,对采集的奶牛血清、流产死胎和鼻拭子等组织病料应用Ruminant BVD/BD p80-Serum阻断ELISA实验及牛病毒性腹泻(BVD)实时荧光RTPCR的方法进行检测,BVDV血清学检测阳性率为63.8%,组织病料样品中阳性率为13.46%,结果表明BVDV在新疆规模化奶牛场中已存在感染,因此应该对发病动物进行隔离或者淘汰,避免相互感染传播,降低感染率。     

牛病毒性腹泻-黏膜病的血清学调查

采用竞争ELISA法,对188头牛血清进行了病毒性腹泻-黏膜病抗体检测.结果显示,170头牛抗体呈阳性,阳性率为90.4％,牛病毒性腹泻-黏膜病在调查该县不仅存在且感染率较高,对该病应引起高度重视并应积极采取预防控制措施.     

青海省玉树地区牛病毒性腹泻-黏膜病血清学调查

在玉树州所属六县采集牦牛血清571份,经牛病毒性腹泻-黏膜病ELISA抗体检测,检出阳性43份,平均阳性率为7.5%,各县都有不同程度的感染,其中治多、称多、杂多三县的阳性率较高,超过10%,初步证明该病在我省玉树地区存在。     

北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查

对北京郊区6个未进行牛病毒性腹泻病（BVD）免疫牛场的546份奶牛血清样品,使用牛病毒性腹泻抗体ELISA试剂盒进行检测,并对其中3个牛群进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）血清抗原筛查。共检出阳性血清514份,总阳性率94.1%,其中5个牛场的场内血清抗体阳性率在95%以上。牛病毒性腹泻持续性感染牛（PI牛）筛查的3个牛群均有阳性牛检出。结果表明,北京地区规模化奶牛场存在牛病毒性腹泻感染和接触史,应采取净化措施进行控制。     

辽宁地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻-黏膜病血清学调查

牛病毒性腹泻-黏膜病(Bovine Viral Diarrhea,BVD)是由牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(Bovine Viral Di-arrhea Virus,BVDV)引起的接触性传染病,对奶牛业造成巨大的经济损失.为了摸清辽宁地区BVDV感染情况,本研究首次对辽宁省14个市27家规模化奶牛场共793份样品进行了BVD血清学检测,结果显示BVD平均阳性率为74.0％.进一步分析结果显示,BVD抗体阳性率存在养殖场规模和地区差异,该研究结果将为辽宁地区BVD的防控和净化提供基础.     

上海地区奶牛场牛病毒性腹泻-黏膜病的血清学调查

牛病毒性腹泻一黏膜病是牛最重要的传染病之一,给全球的奶牛业造成了严重的经济损失.为了调查上海地区奶牛场该病的流行情况,通过对2009年1月～4月份采集的上海10个区(县)18个规模化奶牛场成年乳牛和育成牛共180份血清以及奉贤区25份犊牛血清进行了病原和抗体的酶联免疫吸附试验检测.结果表明,上海地区奶牛场205份血清中...     

青海牦牛牛病毒性腹泻病毒的血清学调查

为掌握青海牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染情况,采用ELISA试剂盒对采集于青海省6个规模牦牛饲养场和11户散养户的559份血清样品进行了BVDV抗体检测。检测结果显示,559份血清样品平均阳性率为36.14%,规模牦牛场平均阳性率为34.19%,散养户平均阳性率为39.42%。表明青海牦牛群中普遍存在BVDV感染,应该引起重视。     

宁夏部分地区牛病毒性腹泻的血清学检测

[目的]掌握宁夏地区部分牛场犊牛病毒性腹泻病毒感染情况,为犊牛病毒性腹泻的净化和综合防治提供依据。[方法]从宁夏4个市9个县(区)的25个发病牛场(户)采集血清样品191份,采用ELISA方法,进行血清学调查。[结果]宁夏4个地级市犊牛病毒性腹泻的抗体阳性率高达64.92%,并有一定程度的抗原阳性,且主要发生在1月龄以内的犊牛。[结论]牛病毒性腹泻是具有重大经济意义的疾病,是今后宁夏养牛业应重点防范的疾病之一。     

新疆北疆地区牛、羊病毒性腹泻—黏膜病的血清学调查

为了了解新疆北疆部分地区的牛、羊病毒性腹泻一黏膜病的感染情况,采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）对随机采自新疆伊犁、塔城等地区的105份牛血清样品和49份羊血清样品进行BVDV抗体检测。结果显示,牛血清样品中有19份阳性,阳性率为18．1％;而羊血清样品中有45份阳性,阳性率为91．8％。结果显示,BVD在该地区较为流行,尤其是羊的感染率比较高。     

青海省牛传染性鼻气管炎及病毒性腹泻黏膜病血清学调查

从青海省互助、玛多、海晏、玉树、贵德、德令哈、共和等14个地区采集牛血清样品420份,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）调查了青海省牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻黏膜病的感染情况。结果在被检牛血清420份样品中,共检出阳性血清样品228份,平均阳性率为50.67%（228/420）;在被检牦牛血清180份样品中,共检出阳性血清样品1份,平均阳性率0.56%（1/180）。     

牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因在卡介苗中的表达

在成功克隆牛病毒性腹泻一黏膜病痛毒Changchun184株E2基因的基础上,将E2基因与表达载体pMV261连接,构建了重组穿梭质粒pMV261-E2,后电转化到卡介苗中,获得了具有卡那霉素抗性的重组卡介苗,并对重组卡介苗进行菌落PCR鏊定.在45℃下热诱导E2基因在重组卡介苗中的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Wesern blotting 分析.结果证明,牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因在卡介苗中成功的表达.     

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒核酸疫苗的构建及其免疫效果研究

为提高牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)核酸疫苗的免疫效力,本实验应用PCR方法扩增BVD病毒(BVDV) E0基因,构建真核表达质粒pVAX1-E0,转染293T细胞,经RT-PCR和western blot分析显示,转染细胞能够瞬时表达E0蛋白.并分别将pVAX1、pVAX1-E0或将pVAX1-E0分别与一种表达细胞因子基因的重组质粒作为佐剂(pVAX1-IL-2、pVAX1-IL-4及pVAX1-IFN-γ)免疫小鼠,采用间接ELISA法检测免疫小鼠BVDV抗体效价,以MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖活性.实验结果表明,与pVAX1-E0相比,接种pVAX1-E0/pVAX1-IL-2小鼠血清E0抗体水平及淋巴细胞增殖水平显著提高(p＜0.01),表明细胞因子基因佐剂IL-2能够有效提高BVDV E0核酸疫苗免疫效果,可以刺激小鼠产生良好的免疫应答.     

牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA检测方法的标准化研究

用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工作浓度为1:800。通过引入牛病毒性腹泻病毒质控血清进行质控检验,该方法所得检测结果均在质量控制范围内,达到预定标准化要求。标准化的抗原捕获ELISA方法具有特异、灵敏、可靠、方便、快捷等特点,可广泛应用推广,为我国牛病毒性腹泻病毒监测提供了行之有效的技术手段。     

牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)全基因组序列,选择保守性比较高的5'非编码区,利用Oli-go6.0软件设计了2对特异性引物,建立了检测BVDV的套式RT-PCR方法。结果表明,该方法重复性好、特异性强、敏感性高,可以准确快速检测出极低含量的BVDV,极大地提高了常规RT-PCR检测方法的特异性和敏感性。临床初步应用表明,该方法可用于动物与疫苗生物制品原辅料BVDV的快速低含量检测。     

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原捕获ELISA检测方法的建立

用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立BVDV抗原捕获ELISA(AC-ELISA)检测方法,优化反应条件并对该方法的稳定性等指标进行了测试和评价。结果表明,单抗最佳包被质量浓度为5μg/mL,兔多抗血清最佳质量浓度为10μg/mL;单抗在4℃包被12~24 h,多抗在37℃作用1 h为双抗体的最佳反应条件;酶标抗体最适稀释度1∶10000,最适作用时间为1 h;采用1%BSA和1%明胶分别在抗体包被后和加入待检抗原反应后进行两次封闭效果好。用AC-ELISA方法检测临床采集的11份牛腹泻病料和12份健康牛组织样品,同时以病毒分离和RT-PCR检测方法做对比,3种方法符合率很高。研究表明AC-ELISA方法稳定性好,可用于BVDV的临床快速检测。     

Serological status of cattle to bovine viral diarrhoea virus and bovine herpesvirus 1 at entry to and exit from Australian feedlot backgrounding facilities

A total of 6195 cattle were enrolled in this observational study. Serum antibody concentrations to bovine herpesvirus 1 (BHV1) and bovine viral diarrhoea virus (BVDV) were measured at entry to and exit from backgrounding facilities to assess their statuses on arrival and the extent of seroconversion to these viruses during backgrounding. The backgrounding facilities were contiguous with five feedlots in: Queensland (two sites), New South Wales, South Australia and Western Australia. Cattle were held in the backgrounding facilities for a minimum of 29 days and a median of 34 days. On backgrounding facility entry, 32.7% of the study population was seronegative to BVDV, but 85.7% was seronegative to BHV1. After commingling in the backgrounding facilities, of the cattle that were seronegative on backgrounding facility entry, 33.9% and 30.3% showed a serological increase to BVDV and BHV1, respectively. At backgrounding facility exit, when cattle were placed in their feedlots, 19.6% and 59.1% were seronegative to BVDV and BHV1, respectively, and 0.26% were persistently infected with BVDV. There was a strong association between seroincrease to BVDV and seroincrease to BHV1 (P = 0.005) at animal level in cohorts known to contain an animal persistently infected with BVDV.     

应用套式RT—PCR检测猪瘟制品中牛病毒性腹泻病毒污染的研究

为建立猪瘟制品中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）污染的诊断方法,本研究根据GenBank公布的BVDV全基因组序列,选择BVDV保守性比较高的5′非编码区,利用Olig06．0软件设计了2对特异性引物,建立了检测BVDV的套式RT-PCR方法。该方法极大提高了常规RT-PCR检测方法的特异性和敏感性,重复性好、特异性强、敏感性高,可以准确快速检测出极低含量的BVDV,为动物与疫苗生物制品原辅料中BVDV的快速低含量检测提供了一种简单、特异、敏感、快速的检测方法。     

牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG，采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶（HRP），建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果，抗体的最佳包被量为150μg／mL，酶标抗体最适工作浓度为1：200；封闭液为50mL／L的兔血清；待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃ 120min；底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测，结果，阳性检出率为42．6％。