犬弓首蛔虫卵黄原蛋白基因的克隆及表达分析

为克隆犬弓首蛔虫(T.canis)的卵黄原蛋白(YP)基因,本研究根据T.canis cDNA文库中的EST数据,采用RT-PCR方法扩增T.canis的YP基因(TcF-YP),并克隆至pGEM-T载体中进行测序。测序结果表明,TcF-YP基因片段大小为492 bp,编码163个氨基酸残基。同源分析显示,TcF-YP基因与猪蛔虫的卵黄原蛋白基因同源性最高,为78%。同时对该基因在T.canis雌虫、雄虫和雌虫各组织的表达谱进行研究,结果显示TcF-YP基因只在T.canis雌虫中高量表达,是雌虫特异的基因。对雌虫各组织的基因表达谱分析显示TcF-YP基因在子宫和肠中高量表达,在卵巢中有极微量的表达。本实验为TcF-YP基因的功能研究奠定了基础。     

家蚕热休克蛋白70家族基因的染色体定位及表达特征

热休克蛋白70家族(Hsp70)是非常保守的蛋白家族,每个物种的Hsp70家族都有多个成员,每个成员都可能具有特殊的功能。为了能够对家蚕Hsp70家族各成员进行科学命名和了解其特有的功能,分析家蚕Hsp70家族成员的编码基因及其在染色体上的定位,并通过实时荧光定量PCR方法检测这些基因在5龄第3天幼虫中肠、脂肪体和丝腺组织中的转录表达情况。家蚕诱导型Hsp70家族成员Bmhsp70A和Bmhsp70B的编码基因集中分布在第27号染色体上,有多个拷贝;组成型Bmhsp70家族成员的编码基因则分布在不同的染色体上,一般仅有1个拷贝。家蚕Hsp70家族基因中有10个能转录并翻译蛋白质产物的成员,还有1个能正常转录但不能正确翻译的假基因。实时荧光定量PCR结果表明:在常温(25℃)条件下,组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-4和Bmhsc70-3的表达水平较高,而其它基因成员的表达水平则相对较低,诱导型Bmhsp70家族基因成员在常温下也有一定程度的基础表达;40℃热激2 h后,Bmhsp70家族所有基因的表达水平都有所升高,其中诱导型Bmhsp70家族基因Bmhsp70B和Bmhsp68的转录表达上升水平远高于组成型Bmhsp70家族基因Bmhsc70-3和Bmhsc70-4。不同表达类型的家蚕Hsp70家族基因成员在5龄幼虫中肠、丝腺和脂肪体中的表达情况不同,热激2 h后的表达变化规律也不完全相同,提示家蚕Hsp70家族成员具有各自特殊的功能。     

粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶基因的克隆、表达及定位分析

虾青素金属蛋白酶是一种广泛存在于多种动物体内的金属蛋白酶，研究表明该蛋白酶在寄生线虫的入侵和生长发育过程中发挥重要作用。但目前对粪类圆线虫虾青素金属蛋白酶(Ss-AST-1)还所知甚少，研究旨在对该酶编码基因(Ss-ast-1)进行鉴定和表达分析，为进一步研究其功能奠定基础。利用生物信息学方法对Ss-ast-1基因进行序列分析，通过转录组数据分析Ss-ast-1在各个发育阶段的转录水平，转基因技术进行虫体内表达定位分析。通过体外原核表达重组蛋白，Western blot分析其抗原性。采用免疫荧光组织化学方法对Ss-AST-1在粪类圆线虫幼虫体内的定位进行研究。结果显示：Ss-ast-1基因全长1 905 bp,编码634个氨基酸；转录组分析该基因在iL3期的表达水平最高。定位分析表明该蛋白在虫卵细胞的细胞核和细胞质均有表达；体外表达重组蛋白的大小约67.5 kDa, Western blot分析表明多克隆抗体可以较好的识别全虫蛋白中的Ss-AST-1。免疫荧光结果显示Ss-AST-1在幼虫体内表达并分布幼虫的头部和体壁。Ss-ast-1属于虾青素金属蛋白酶家族，其可能在寄生虫入侵过程中...     

象草全基因组bHLH转录因子家族鉴定及表达分析北大核心CSCD

bHLH转录因子家族不仅参与了植物的生长发育,而且在植物响应逆境胁迫和次生代谢方面发挥着关键作用。在全基因组水平对重要饲草及能源植物象草的bHLH转录因子家族进行了鉴定及分析,并利用转录组数据及定量RT-PCR分析了象草bHLH转录因子对赤霉素(GA_(3))和多效唑(PAC)的响应。结果显示:在象草中共鉴定出229个具有完整保守结构域的bHLH基因家族成员(CpbHLH001~CpbHLH229),不均匀地分布于14条染色体上;系统进化分析结果表明,229个CpbHLHs可被分为18个亚类,其中C亚类的成员数量最多,为41个;此外,相同亚家族中的大多数基因具有相似的基因结构和保守基序;基于转录组数据的表达谱分析结果发现,多数bHLH基因在象草茎尖组织中均对GA_(3)和PAC有响应。随机挑选9个表达量较高的基因进一步通过qPCR进行验证。结果显示,经外源GA_(3)和PAC处理之后,这9个基因因不同处理而差异表达,表明这9个基因可能与GA_(3)和PAC介导的信号通路有关。综上所述,本研究为象草bHLH转录因子家族的生物学功能奠定了基础。     

青海草原毛虫化学感受蛋白基因的鉴定与组织表达分析

青海草原毛虫(Gynaephora qinghaiensis)是青藏高原上严重危害高寒草甸的重大害虫。本研究基于青海草原毛虫转录组测序数据，利用生物信息学方法及qRT-PCR技术，对GqinCSPs基因进行鉴定及表达谱分析，共鉴定出11个GqinCSPs基因，均具有完整的编码区序列。其中，GqinCSP5和GqinCSP8两个基因没有信号肽，GqinCSP4与GqinCSP9相似性最高，二三级结构主要由α螺旋和无规则卷曲组成，系统进化表明青海草原毛虫CSPs与棉铃虫和柑橘凤蝶的亲缘关系较近。基因表达谱分析显示，11个青海草原毛虫CSP基因在雌雄成虫头部、雄虫触角以及2龄至7龄阶段中均有表达，且体现不同的表达水平。GqinCSP1,GqinCSP3,GqinCSP5,GqinCSP8,GqinCSP9在2龄阶段的相对表达量显著高于其他阶段(P<0.05)。本研究为深入了解青海草原毛虫化学感受机制奠定基础，同时也为寻找青海草原毛虫绿色防治的分子靶标提供理论依据。     

结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其ArsR家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用.为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建pET22b-rv0324重组表达载体,转化至E.coli...     

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef-11基因在病毒感染宿主细胞中的表达特征

杆状病毒晚期表达因子(late expression factor,LEF)是参与病毒基因组DNA复制和病毒基因转录调控的一个重要家族,该家族成员LEF-11为13 k D的小分子蛋白质。通过比对目前已经测序的63种杆状病毒基因组序列,发现LEF-11的编码基因lef-11在除宿主为双翅目昆虫的Cuni NPV外的所有杆状病毒基因组中都存在,暗示lef-11基因可能在包括家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)在内的杆状病毒复制过程中行使重要功能。通过RT-PCR检测和Western blotting分析lef-11基因及其编码蛋白质在Bm NPV侵染的家蚕卵巢培养细胞Bm N中的转录与表达时相,其转录本从侵染后6h开始持续表达,蛋白质从侵染后12 h开始持续表达。当利用DNA聚合酶特异抑制剂阿非迪霉素(aphidicolin)阻断Bm NPV病毒基因组DNA复制之后检测LEF-11的表达受到抑制,暗示LEF-11的表达起始于病毒DNA复制之后。以上结果表明:BmNPV lef-11基因在杆状病毒中非常保守,是一个晚期表达基因,可能不直接参与病毒的起始复制,而是参与病毒的大规模复制过程。     

犬弓首蛔虫C型凝集素4的原核表达及组织定位

旨在探讨犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)C型凝集素4(C-type lectin 4,C-TL-4)的基因特征，并对其组织分布进行研究。根据Tc-ctl-4的基因组数据(GenBank:AF126830.1),以T.canis为模板对Tc-ctl-4全长基因进行扩增，并进行序列分析和多重序列比对；构建Tc-ctl-4/pCold TF原核表达载体，对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体；同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光组化检测Tc-ctl-4基因的转录水平和Tc-CTL-4的组织分布。结果显示，Tc-ctl-4基因的全长序列为842 bp,共编码280个氨基酸，多重序列比对显示，犬弓首蛔虫和猫弓首蛔虫的C型凝集素均含有高度保守的CTLD结构域；SDS-PAGE检测发现重组蛋白Tc-CTL-4的大小约为86 ku,以可溶性形式表达；利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白，以500 mmol·L^-1咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白；将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制...     

谷子AGO基因家族全基因组鉴定及特征分析

阿尔戈蛋白（Argonaute proteins,AGO proteins）作为一种高度保守的RNA诱导沉默复合物,与基因转录和转录后沉默有关。目前,植物AGO基因功能的研究主要集中在拟南芥和水稻,对谷子AGO基因功能尚无文献报道。本研究利用生物信息学方法在谷子全基因组中鉴定出15个具有保守结构域和位置顺序的家族成员,分布在7条染色体上,其编码的蛋白质长度在862～1148 aa之间。系统进化分析显示,谷子AGOs蛋白分布在3个进化分支,与拟南芥相比,家族成员数量有所扩展;组织表达特异性分析表明,谷子AGOs大部分基因在穗部表达强烈,推测其参与生殖发育基因调控;蛋白互作结果预测显示,所有谷子AGOs蛋白都与三种蛋白质相互作用,其中DNA介导的RNA聚合酶v亚单位1已被证明与转录水平基因沉默有关。表明AGO基因在谷子进化过程中结构和功能保守,可为谷子AGO基因家族成员的功能研究提供理论基础。     

新城疫病毒classⅠ和classⅡ微型基因组的构建及其复制效率差异性的比较

为研究新城疫病毒(NDV)微型基因组的复制效率,本实验分别以NDV 9a5b(ClassⅠ)病毒株和La Sota(ClassⅡ)病毒株基因组骨架为平台,插入绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因替代病毒的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控区域Leader和Trailer,构建获得的微型基因组DNA片段反向插入反向遗传载体TVT(0.0)中,从而构建了两株病毒的微型基因组质粒。同时,将相应病毒株的NP、P和L 3个基因分别克隆至pCI-neo载体中,构建3个辅助质粒的真核表达系统。通过将微型基因组和辅助质粒共转染BSR T7/5T7-5细胞,表明在相同转染条件下,无论使用哪一种辅助质粒,ClassⅡ型微型基因组的报告基因的表达效率均高于ClassⅠ型微型基因组。实验结果显示ClassⅠNDV转录复制系统的运行效率明显低于ClassⅡNDV。     

肉仔鸡休蛋白、胴体蛋白、羽毛蛋白潜在沉积速率模型的建立

本文通过饲养屠宰试验研究了肉仔鸡体组成、体组分的生长发育规律,并建立了肉仔鸡体蛋白、胴体蛋白、羽毛蛋白潜在沉积速率模型,旨在为建立精确的肉仔鸡生长预测模型奠定基础.试验选取180只体重相近的1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡按性别随机分为两个处理,每个处理5个重复,每个重复18只鸡,肉仔鸡饲喂NRC(1994)营养标准水平日粮.于0、7、14、21、28、35、42日龄08:00空腹称重后,每个重复选取接近平均体重的两只鸡进行屠宰试验.采用Gompertz生长模型拟合肉仔鸡体组成及体组分随时间变化的关系,采用曲线回归拟合肉仔鸡体蛋白、胴体蛋白、羽毛蛋白重与体重、胴体重及羽毛重间的异速生长关系,同时结合以上拟合方程推导肉仔鸡体蛋白、胴体蛋白、羽毛蛋白潜在沉积速率模型.结果显示,Gompeertz生长模型能够较好的拟合肉仔鸡体组成及体组分随时间变化的函数关系,拟合回归方程的相关指数(R2)均达到0.969以上,F检验达到显著水平(P＜0.01);曲线回归拟合试验数据得到体组成及体组分间幂函数形式的异速生长方程,其相关指数(R2)均达到0.998以上,F检验达到显著水平(P＜0.01);同时根据以上拟合回归方程建立了肉仔鸡体蛋白、胴体蛋白、羽毛蛋白与肉仔鸡体重、胴体重及羽毛重间的函数关系.以上结果表明,可以通过内仔鸡体重、胴体重及羽毛重对内仔鸡每日体蛋白、胴体蛋白及羽毛蛋白最大沉积量进行预测.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种折叠的正义RNA病毒,属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),尼多病毒目(Nidovirales)。除了动脉炎病毒科,尼多病毒目还包括冠状病毒科(Coronaviruses)。15.1~15.2 kb长的PRRSV基因组通过互相重叠的开放性阅读框编码蛋白质。ORF1a翻译过程中产生pp1a多聚蛋白。ORF1b表达产生了 pp1ab多聚蛋白。pp1a和pp1ab经病毒蛋白酶处理后又生成了14个非结构蛋白。一些非结构蛋白为蛋白酶(NSP1、NSP1β、NSP2和NSP4)、RNA-依赖性RNA聚合酶(NSP9)、解旋酶(NSP10)和核酸内切酶(NSP11)。ORFs2-5编码GP2-GP5,ORF6编码M,ORF7编码N蛋白。ORF2b完全包括在ORF2内,表达小的非糖基化E或2b蛋白。相当一部分的囊膜蛋白是nidoviruses所特有的,所有的结构蛋白都是感染所必需的。     

副黏病毒糖蛋白的结构与功能研究进展

副黏病毒是一类包含多种能引起人和动物严重疾病的负链RNA病毒。其病毒颗粒囊膜上排列有两种糖蛋白，分别是识别并结合宿主受体的附着蛋白(hemagglutinin neuraminidase/hemagglutinin/glycoprotein, HN/H/G)和介导病毒颗粒囊膜与宿主细胞膜融合的融合蛋白(fusion protein, F)。这两种糖蛋白通过与病毒受体及细胞膜的互相作用介导了病毒与宿主细胞的特异性识别、结合及融合过程，最终使病毒基因组进入宿主细胞质开启复制过程。由于糖蛋白是主要的病毒抗原及中和抗体靶点，因此近年来对副黏病毒糖蛋白的研究在不断的深入探索。就副黏病毒糖蛋白在其结构、功能及其相互作用方面的研究进展进行了综述，以期为治疗性抗体和疫苗的合理开发提供理论基础。     

微孢子虫(microsporidia)功能蛋白的研究进展

微孢子虫作为一类专性细胞内寄生的真核生物,由于具有许多原核细胞的特征而被广泛研究,且作为人类新发的病原也越来越受到重视。在综述了近10年来国内外学者对微孢子虫蛋白质研究进展的基础上,评述了对微孢子虫蛋白质研究在分类和防治上的意义。     

寄生原虫端粒蛋白研究进展

端粒蛋白是指那些直接或间接与端粒结合的蛋白组分。近年来寄生虫端粒蛋白研究引起了人们广泛的关注,为寄生虫病的研究提供了新的思路。端粒蛋白具有维持染色体稳定和细胞周期调控等多种功能,共同参与寄生虫生命周期的调节,同时也为寄生虫病的预防和治疗开辟了新的途径。论文主要综述了包括TRFs、Rap1、TERT、RPA、Sir2和Orc1、Gbp、Ku、Rbp38以及LaTBP1等原虫端粒蛋白及其功能,以期为寻找新的防治寄生虫病的靶点提供借鉴。     

不同沉淀方法对四倍体刺槐叶蛋白营养成分的影响

对不同加热条件和pH条件下叶蛋白的营养成分进行测定分析,结果表明:不同温度下所提取的叶蛋白中粗蛋白质含量随温度升高呈现上升趋势,65℃时粗蛋白质和磷含量达到最大,随提取温度升高粗纤维和粗脂肪含量逐渐降低;pH为2时,叶蛋白中粗蛋白质、粗脂肪分别为38.49%和8.55%,粗纤维最低仅为1.26%,而氢氧化钠处理下粗灰分、钙和磷的含量略高于盐酸处理。     

Bcl-xL及PTD-FNK蛋白的细胞保护作用研究进展

作者首先简述了Bcl-2蛋白家族成员Bcl-xL蛋白的结构与功能,Bcl-xL蛋白是体内重要的抗凋亡蛋白,其头部折叠结构完全符合Bcl-2家族蛋白结构模型,对多种细胞具有保护作用;其次介绍了Bcl-xL蛋白的功能增强型突变体PTD-FNK蛋白的生物学特性、功能、作用机制及临床应用情况,其对体内外细胞的穿透能力很强,可能通过抑制细胞线粒体途径的凋亡对不同类型细胞受到的多种损伤刺激产生良好的防御作用,这种组织细胞保护作用目前已经在临床治疗上被广泛应用。目前两种蛋白批量生产及实践应用的难点是其原核表达形式为包涵体,需要经过复杂的复性过程才能获取可溶性蛋白,且蛋白在复性过程中损耗极大。通过探索诱导两种蛋白表达的最优条件,大量诱导蛋白的可溶性表达并且进行纯化是今后研究工作的重点和方向,可为更好地推进其在组织细胞常温、低温、冷冻保存及医学临床中的应用奠定基础。     

应用反转录聚合酶链反应检测鸡传染性支气管炎病毒核酸的研究

根据国外报道的鸡传染性支气管炎病（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的１对引物，跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，反转录后ＰＣＲ，经琼脂糖凝胶电泳结果表明，３株毒株均获得了与预期一致的ＰＣＲ产物；此外，ＩＢＶＰＣＲ灵敏度的测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板，ＰＣＲ酶切结果为，ＨａｅⅢ、ＴａｇⅠ酶对３株ＰＣＲ产物均有１个酶切位点，而ＭｓＰⅠ酶无酶切位点     

Research Progress on Cytoprotection of Bcl-xL and PTD-FNK Protein

In this article,firstly,the structure and functions of Bcl-xL protein is briefly introduced. It is believed that Bcl-xL protein as a member of the Bcl-2 family,has the same head folding structures as Bcl-2 family,which plays an important role in suppressing apoptosis of cell and protecting various cells from injury. Then the author introduces the biological properties,functions, mechanisms and clinical application of PTD-FNK protein (a gain-of-function mutant of Bcl-xL). It is thought that PTD-FNK protein is able to rapidly penetrate into cell in vitro and in vivo, and can protect various types of cells from many damage through the inhibition of apoptosis in the path of mitochondrion,so being a potent protein with various therapeutic applications. Finally,the author points out that the difficulty of mass production and practical application of two proteins is that prokaryotic expression of the proteins is inclusion body,which need the complex refolding process in order to obtain soluble proteins,and proteins' loss in the refolding process is great. The priorities and direction of future research are to realize the soluble expression and purify the two proteins in large quantities by optimizing expression conditions of induction,laying the foundation of their application to clinical medicine and cell preservation under room temperature, low temperature and frozen condition.     

蚕丝纤维组成的研究

综述了近年来蚕丝纤维组成研究的进展。从蚕丝分子生物化学学的角度，阐述了蚕丝纤维的化学组成。丝胶蛋白的分子生物学结构，蚕丝主成份丝素的H链、L链和P25糖蛋白的基因和蛋白质的结构特性及其组成的基本单位。