从种子愈伤组织培养选育耐盐水稻突变体 1.愈伤组织诱导、植株再生及表观的植株性状变异

采用种子愈伤组织培养研究15个籼稻和硬稻品种的愈伤组织诱导及植株再生。还测定了选择性培养基不同氯化钠浓度对愈伤组织生长及植株再生的影响。不同品种愈伤组织诱导及植株再生的能力差异显著。在不加酵母及酪旦白提取物的培养基中,愈伤组织诱导频率从32％至85％。但当加入上述物质时,使诱导频率提高至将近100％。植株再生频率从IR8、IR26、IR30、IR36以及“Koshihikari”的0％至“台中65”的62％。植株再生频率随着愈伤组织培养时间的延长而下降。不过,“台中65”及“Nona Bokra”培养27周的愈伤组织还保持30％-40％的再生能力。“台中65“的愈伤组织即使生长了47周还能再生成植株。选择性培养基加进氯化钠对愈伤组织生长及随后的植株再生有显著影响。在氯化钠浓度为2％时,只有少数愈伤组织略有生长:氯化钠浓度低于1％时,愈伤组织生长良好。1.5％的氯化钠浓度抑制愈伤组织生长,但在第一筛选阶段仍然保持中等的生长速度。所有供试的品种,用培养11周的愈伤组织在氯化钠浓度较高的情况下植株再生频率仍较高。     

在盐胁迫下获得的大豆愈伤组织及再生植株的生化反应

在含NaCl的选择培养基中获得的大豆小真叶愈伤组织及再生植株的过氧化物酶活性增高,蛋白质含量降低,愈伤组织中的脯氨酸含量随NaCl浓度增高而急剧上升。在盐胁迫下过氧化物酶活性和脯氨酸含量增高,蛋白质含量降低是对盐胁迫的生理适应。     

两个栽培大豆品种的体细胞胚胎发生和植株再生研究

通过优化培养条件,即提高植物生长激素浓度和蔗糖浓度,发展了一种再生频率较高的大豆植株再生的方法。从栽培大豆品种幼胚中诱导形成的体细胞胚性愈伤组织和胚状体可以进一步分化出芽和根,发育成完整植株,中黄４号植株再生频率最高可达３９％,早熟１８号仅得到了胚性愈伤组织。     

琼脂浓度对水稻愈伤组织植株再生率和内源激素含量的影响

 以盐粳2号脱壳种子为外植体研究了培养基不同浓度琼脂对愈伤组织植株再生率的影响及可能的机理。在分别进行脱分化、分化和继代培养基中琼脂浓度试验时，当琼脂从0.5％提高到1.0％ 植株再生率均显著升高。在继代和分化培养基琼脂浓度均为1.0%时植株再生率最高，而脱分化培养基0.5%或1.0%琼脂和分化培养基1.0%琼脂 组合，再生率最高，两者均为1.0% 琼脂反而降低。试验还表明，随着培养基中琼脂浓度提高，愈伤组织含水量显著降低而脯氨酸含量上升。较高浓度（1.0%）琼脂继代培养的愈伤组织内源ABA含量显著高于较低浓度（0.5%）琼脂的，而ZRs含量则显著较低。同样，在分化培养过程中，较高浓度琼脂分化培养的愈伤组织内源ABA含量显著地高于较低琼脂的，而ZRs含量则相反，但差异不显著。 V 关键词：琼脂浓度：精     

野生、栽培大豆愈伤组织耐盐性与植株盐胁迫下丙二醛(MDA)含量的关系

以野生、栽培大豆共14份材料的下胚轴作为外植体诱导愈伤组织，在含不同浓度NaCl的培养基上鉴定愈伤组织的耐盐性，NaCl浓度(w／v)分别为0％(CK)，0．1％，0．2％，0．3％，0．4％，0．5％，0．6％，0．7％，0．8％；14份材料的幼苗在NaCl为0．3％的盐土环境中生长25d后，测其幼苗的丙二醛(MDA)含量。试验结果表明：愈伤组织水平上，栽培大豆品种中黄4、通农5、吉林35耐盐性较强，不同材料之间愈伤组织的耐盐性有明显差异，耐盐性强的可在0．8％NaCl浓度下生长，耐盐性弱的只能忍受0．4％NaCl浓度；本试验确定大豆愈伤组织耐盐性鉴定适宜的浓度为0．6％。在盐胁迫下，植株MDA含量在0．3％NaCl条件下均比在CK土壤中高，但随胁迫时间的延长而呈现不同的变化趋势。综合大豆植株MDA含量的变化和愈伤组织的耐盐性之间，并未发现相关性。     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果，目的是提高愈伤组织的诱导：和植株再生的效率。花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素)。培养基中含有2mg／L2．4-D和1mg／LBAP比相同成分培养基中含有1mg／LNAA和2mg/L6-BA(CK)，愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高。在五个处理的盐酸硫胺素的实验中，改良的MS培养基含有10mg／L盐酸硫胺素比含有2．4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高。在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6％或9％的麦芽糖，总的植株再生频率最高。蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率，总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率。本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中。     

组织与细胞培养在麦类作物抗病育种中的应用

为了尽快获得有价值的抗病材料,近年来日益广泛地采用植物细胞选择的方法.这是一种用细胞和原生质体大量再生植株的最有效的培养技术.其育种的作用原理是通过胚和愈伤组织的培养导致嵌合植株的再生.为缩小愈伤组织用量,有时将其安排在选择性的原生质体培养基上.将原生质体放在含有细菌Pseudomonas syringae和真菌Alternaria alternata滤液的选择性培养基上,终于研制出了烟草品种CaMcyH的愈伤组织.用这种选择到的愈伤组织曾获得了抗某些病原体的嵌合植株,经研究,证实其确系愈伤组织的后代.     

亚麻花药培养高频率的植株再生

本文主要研究亚麻花药培养的诱导培养基组成成份的效果,目的是提高愈伤组织的诱导和植株再生的效率.花药接种于改良的MS培养基上(培养基添加了五种不同配比的植物激素).培养基中含有2mg/L2.4-D和1mg/LBAP比相同成分培养基中含有1mg/LNAA和2mg/L6-BA(CK),愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率有显著提高.在五个处理的盐酸硫胺素的实验中,改良的MS培养基含有10mg/L盐酸硫胺素比含有2.4mg/L盐酸硫胺素愈伤组织再生苗的百分率及总的植株再生频率显著提高.在麦芽糖的五个处理中以培养基中含有6%或9%的麦芽糖,总的植株再生频率最高.蔗糖的浓度主要影响愈伤组织再生苗的百分率,总的植株再生效率、花粉植株的频率以及花粉植株染色体自然加倍的频率.本研究获得的单倍体品系已被应用于育种程序中.     

利用基因枪法将Bt基因导入玉米优良自交系

利用基因枪法将Bt基因导入玉米优良自交系501和C111.轰击后的幼胚转至附加Bialaphos浓度为10 mg/L的选择培养基上进行愈伤组织的诱导,继代筛选3轮,每轮3周.得到的抗性愈伤组织在不含Bialaphos的分化培养基上进行绿苗分化,501获得了20株转化再生植株,C111获得了10株转化再生植株,PCR鉴定结果表明Bt基因已整合到玉米自交系501和C111的基因组中。     

大豆不同外植体植株再生的研究

采用不同大豆品种的下胚轴、上胚轴、小真叶和幼胚作外植体进行植株再生的研究。结果表明汾豆３３号诱导植株再生率最高;诱导频率依次为下胚轴＞上胚轴＞小真叶＞幼胚;下胚轴在Ｂ５＋ＮＡＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ培养基上可诱导出愈伤组织并直接分化成苗,植株再生频率为３４％,最高达５０％。获得大豆高频率再生植株,收到较饱满的种子。     

基因型和2,4 D浓度对小麦不同外植体离体培养特性的影响

为了探讨不同基因型、不同外植体和不同培养条件对小麦愈伤组织诱导、分化及再生的影响,以小偃22、西农1376、西农1012和西农1013为材料,对各小麦品种(系)的幼穗、花药、幼胚和成熟胚组织的培养特性及影响因素进行了研究.结果表明,愈伤组织的诱导和再生与外植体类型、基因型和培养条件密切相关.以幼穗和花药为材料,西农1376平均出愈率均最高,达98.97％和3.85％,成苗率和花培效率均值亦最高,达12.83％和2.39％;以幼胚为材料,西农1376平均出愈率也最高,达99.27％,西农1012平均成苗率最高,达51.03％;以成熟胚为材料,小偃22平均出愈率最高,达93.22％,西农1376平均成苗率达19.78％.离体培养条件下,不同小麦品种(系)的4种外植体愈伤诱导和分化率与2,4-D浓度密切相关,1.0～3.0 mg·L-1 2,4D浓度能较好地诱导4种离体组织愈伤的产生及分化.不同基因型和同一基因型的不同外植体在2,4-D最佳诱导浓度上也有差异.供试小麦4种离体组织培养再生特性比较表明,离体幼胚培养再生效率最高,成熟胚次之,幼穗最差.     

Cu^2＋浓度对啤酒大麦幼胚组织培养与植株再生的影响

为了提高大麦幼胚胚性愈伤组织和植株再生频率,本试验以引进的4个啤酒大麦品种为材料,在诱导、分化与生根培养基上分别进行了不同浓度Cu2+处理.结果表明,MS诱导培养基中增加Cu2+浓度对啤酒大麦愈伤组织的诱导无明显影响,但对胚性愈伤组织的形成有明显的促进作用;在分化与生根培养基中不同浓度Cu2+处理的各品种再生率也存在显著差异,都表现为在5.0～10.0μmol@L-1的浓度下明显提高了出愈率和再生率,而且每个胚性愈伤组织的平均再生率也有显著提高.通过切片技术证明Cu2+浓度主要影响胚性愈伤组织的发生.供试品种在出愈率和再生率上也存在一定的差异,同时Cu2+浓度和基因型之间表现出正互作效应.     

东方百合高效离体再生体系的建立

采用东方百合鳞片叶切块为初始外植体,以从初始外植体上分化的丛生芽切段为次级外植体的两步外植体法,成功建立了东方百合的离体再生体系。研究了不同的2,4-D浓度及次级外植体的不同部位对愈伤组织诱导效果的影响,并确定了G418选择的临界浓度。结果表明:不同部位的次级外植体中,以短缩茎切片出愈率高、出愈快、愈伤组织致密;以MS附加2.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L BA的培养基最适于东方百合愈伤组织的诱导;G418选择的临界浓度为50 mg/L。一个中等大小已脱春化的鳞茎通过愈伤组织再分化植株一代就能扩繁出27 000株左右的新植株,从鳞片叶开始至开花需9个月。     

激动素和萘乙酸不同浓度配比对大豆组织培养器官分化的影响

本文报道激动素(KT)和萘乙酸(NAA)不同浓度配比对大豆上胚轴和小真叶外植体愈伤组织器官分化的影响以及对分化成苗与未分化愈伤组织过氧化物酶活性的分析。 B_5基本培养基附加KT1+NAA 0.2毫克/升(5:1)对大豆上胚轴和小真叶外植体愈伤组织再生植株较适宜,增加NAA的比例抑制芽的分化,增加KT的比例抑制根的分化,都不利于再生植株。 过氧化物酶活性,分化成苗愈伤组织都较未分化愈伤组织的高。     

铜在水稻愈伤组织培养再生植株中的促进作用

 在培养基中添加各常用微量元素的实验结果表明,只有铜元素具有明显的促进水稻愈伤组织植株再生的作用。铜元素不仅能提高再生植株频率和数量,还能提高再生植株的重量,其作用浓度的范围相当宽广。采用添加5 μmol/L铜元素的方法调查另外15个品种的培养效果,发现其中有8个对铜元素的正向反应达到了统计学上的显著水平。据此认为,提高培养基中铜元素浓度是一种增强水稻愈伤组织植株再生的简单和有效的方法。     

对玉米幼胚愈伤组织再生能力的轮回选择

对玉米幼胚愈伤组织再生能力的轮回选择ＣａｒｌｏＲｏｓａｔｉ等谷类作物育种的组织培养技术的效率，往往由于难以建立具有高度植株再生能力的培养方法而受到限制。谷类作物愈伤组织培养的细胞全能性与胚状组织的表现有关。玉米幼胚产生的愈伤组织通常表现为Ⅰ型，白而紧...     

水稻爪籼杂种的花药培养研究

对９个爪×籼Ｆ１杂种进行大规模花药培养，形成愈伤组织的花药的频率平均为１８．７％。小孢子衍生的愈伤组织产生绿苗的平均频率为８．７％。白化株占成苗愈伤组织的６１％。愈伤组织的绿株和白化株再生能力出现于花药培养的第４～８周之间；在第６周以后，白化株与绿株的比率没有增加．转移的愈伤组织成亩能力缓慢下降。自发的双单倍体占４个杂种再生绿苗的４６％。但在一杂种产生的１３２株双单倍体中发现了高频率的部分不育再生植株。     

小麦愈伤组织再生相关基因TaTCP-1A的克隆及功能鉴定

为深入探讨小麦再生分子机制、给建立高效的小麦遗传转化受体系统奠定基础,通过电子拼接、RT-PCR及RACE等方法在小麦品种郑麦7698中分离到一个与小麦愈伤组织再生相关的候选基因TaTCP-1A。序列分析表明,该基因的cDNA序列全长为2 163bp,其中包含了一个1 623bp的开放阅读框,编码540个氨基酸。qRT-PCR结果表明,该基因具有组织表达特异性,在愈伤组织中表达量最高;在愈伤组织形成阶段,随诱导时间的延长,其表达量逐渐上升,当诱导11d时表达量达到峰值,随后呈下降趋势;此外,TaTCP-1A基因在胚性愈伤组织中的表达量高于非胚性愈伤组织。基因沉默结果表明,转TaTCP-1A RNAi小麦植株的再生率比对照降低了85.09%,这一结果初步证明该基因对小麦愈伤组织再生有一定的促进作用。     

一种简便的获得无标记耐盐转基因水稻植株的NaCl有效筛选浓度选择法

 以4个粳稻品种(日本晴、秀水11、武运粳7号、中花11)为材料, 研究发现,在含NaCl的NB培养基上,NaCl对水稻种子发芽的抑制率与对成熟胚愈伤组织生长的抑制率之间呈线性正相关。水稻种子发芽抑制率达50%左右时的NaCl浓度与愈伤组织生长抑制率达80%左右时的NaCl浓度一致,可以作为耐盐基因转化水稻时NaCl有效筛选浓度的重要参考。由此获得日本晴、武运粳7号和中花11 NaCl有效筛选浓度为200 mmol/L,秀水11 NaCl有效筛选浓度为250 mmol/L。采用上述浓度的NaCl对BADH基因转化的日本晴和秀水11愈伤组织进行筛选,成功获得了无标记基因的转基因水稻植株,转化率分别达到38.9%和32.0%。建立的NaCl筛选浓度确定法通过测定NaCl对水稻种子的发芽抑制率来确定水稻耐盐基因转化时合适的NaCl筛选浓度,操作简便,实验周期短,无需其他抗性标记基因。     

剑麻愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以剑麻H.11648为材料,研究外植体类型、激素种类及其浓度对剑麻愈伤组织的诱导和植株再生的影响,并且建立剑麻茎尖愈伤组织诱导及高频再生体系.结果表明:MS基本培养基、6-BA/NAA激素组合有利于淡黄绿色愈伤组织的形成,SH基本培养基、6-BA/IBA/NAA激素组合有利于不定芽的分化;最佳愈伤组织诱导和分化培养基分别为MS+3.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,SH+5.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA.在该培养条件下,H.11648麻茎尖愈伤组织的诱导率为86.67％,分化率为(98.33+1.67)％,分化系数为(13.19±0.58).再生植株在不加激素的MS基本培养基上培养4周后的生根率为100％,平均生根数为(5.39±0.70)条,根长为(8.44±0.25)cm,该研究结果为剑麻转基因的研究和种质创新奠定了基础.