青花菜离体再生体系研究

以"碧冠"、"谊和80"和"幸运"3个青花菜品种带柄子叶与下胚轴为材料,探讨了激素组合、苗龄及AgNO3浓度等因素对外植体不定芽分化再生的影响。结果表明:在MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0/L+AgNO34.0~6.0 mg/L培养基上,"谊禾80"4 d龄无菌苗的下胚轴和6 d龄带柄子叶可以获得较高的分化率(92.5%和85%);3个品种再生芽在MS+IBA 0.2 mg/L生根培养基上生根率达95%以上。     

西瓜子叶离体再生体系的建立

为建立高效西瓜子叶离体再生培养体系,以小果型西瓜品种香秀为试验材料,选取无菌培养4～5 d的子叶为外植体,研究了外源激素6-BA、NAA、IAA和IBA对西瓜子叶离体再生的影响.结果表明,诱导不定芽的最佳培养基配比是MS+2.25 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA,诱导率为90.56％;不定芽伸长的最...     

黄瓜离体子叶再生体系的建立

以3份不同生态型黄瓜品种为试材,研究了外植体类型、激素配比和基因型对黄瓜离体再生能力的影响。结果表明:3种外植体材料形成愈伤组织的难易程度依次为子叶下胚轴根尖。3份不同生态型黄瓜品种均在M10(MS+1.5mg/L 6-BA+2.0mg/L AgNO3)培养基上表现出较高的不定芽再生诱导率,欧洲温室型黄瓜品种"优秀"为最佳基因型,在M10培养基上再生频率为14.71%,平均每外植体再生芽数为2.0,S2(MS+0.1mg/L 6-BA)培养基能明显促进不定芽的伸长,MS培养基添加0.15mg/L IBA可以使再生植株生根。     

南瓜子叶再生体系的建立

以5个南瓜品种为试材,比较了植物生长物质、基因型、子叶切割和接种方式等因素对不定芽分化的影响。结果表明:4~5 d无菌苗的子叶沿中脉纵切,将其中脉斜插入培养基中,分化率最高。易于诱导不定芽的南瓜品种为"绿栗"南瓜和"夷香红栗"南瓜。"夷香红栗"南瓜的不定芽诱导最适培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,不定芽分化率为37.5%,平均芽数2.2个;"绿栗"南瓜最佳培养方式为在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的培养基中培养12 d,再转入MS+6BA 2.0 mg/L+GA30.5 mg/L上继续培养,不定芽分化率达到52%,平均芽数3.7个。     

辣椒离体培养及再生体系的研究

以"韩国甜椒"为试材,研究外植体种类、苗龄、基本培养基种类、激素组合等多种因素对辣椒组织再生的影响。结果表明:带柄子叶再生能力较子叶和下胚轴切段强,14d苗龄幼苗的外植体芽分化率较高,最佳芽分化培养基为MB+4.5mg/L BA+0.5mg/L IAA+4mg/L AgNO3+200mg/L Cef,最佳芽伸长培养基为MS+3mg/L BA+0.3mg/L IAA+2mg/L GA3+4mg/L AgNO3+200mg/L Cef,生根培养基先用1/2MS+0.4mg/L NAA+4mg/L AgNO3,继代用1/2MS+0.4mg/L NAA+0.2%活性炭。     

朝天椒子叶离体培养与植株再生体系的建立

以贵州黎平朝天椒地方种为试材,取其无菌苗子叶作外植体,采用植物固体培养基组织培养法,研究了培养基激素配比、无菌苗生理年龄、子叶部位等对朝天椒子叶的离体接种、诱导愈伤、不定芽分化、芽茎伸长、诱导生根、驯化移栽、成苗等离体培养及植株再生阶段的影响。结果表明:朝天椒子叶适宜芽诱导分化的培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L,芽分化率达100%;适宜芽伸长的培养基为MS+KT 2mg/L,芽伸长率可达50%;适宜生根的培养基为MS无激素培养基,生根率可达44%。单个外植体平均分化含15~18个不定芽的芽丛(14~16个芽茎),出苗6~7株。从子叶外植体接种至再生苗出瓶需50~55d,再生苗移栽成活率达98%。该研究构建了贵州朝天椒的高效离体培养植株再生体系,为朝天椒的组织快繁和遗传转化奠定了重要的基础。     

桑树子叶节高频再生体系的建立

选用无菌培养10d左右的桑树幼苗,切取子叶节外植体。以MS培养基为基本培养基,对6-BA、IBA诱导丛生芽的适宜浓度进行筛选,并对诱导生根激素IBA、NAA的最适宜浓度进行了研究,通过直接的器官再生途径,建立了桑树子叶节高频再生体系。结果表明:诱导丛生芽最佳激素组合为2.0mg/L 6-BA和0.15 mg/L IBA;生根较适宜的激素为2.0mg/L IBA。     

无籽西瓜子叶离体培养及植株再生试验

无籽西瓜比普通二倍体西瓜糖度高、食用方便、耐贮运，倍受人们青睐。但其制种复杂，成本高，所得的三倍体无籽西瓜种子中很多胚芽发育不良，子叶畸形，种皮厚，种子发芽率低，苗期生长缓慢，这些因素制约了无籽西瓜的生产。西瓜组织培养始于20世纪70年代，自1979年获得初步成功以来，国内外相继报道了这方面的研究进展，但利用无籽西瓜子叶作为外植体获得再生植株的报道甚少。为此，我们以无籽西瓜子叶为外植体，研究了通过愈伤组织阶段诱导芽及获得再生植株的培养条件。     

同源四倍体青花菜离体再生及其倍性鉴定

以同源四倍体青花菜带柄子叶为外植体,研究其离体再生体系。结果表明： 10 d苗龄外植体在MS + 0.05 mg·L^-1 NAA + 3.0 mg·L^-1 6-BA+0.8% 琼脂 + 3% 蔗糖培养基上不定芽的再生频率最高为63.3％;继代培养(MS + 0.04 mg·L^-1 NAA + 4.0 mg·L^-1 6-BA + 0.8% 琼脂 + 3% 蔗糖)增殖系数为6,诱导(1/2MS + 0.1 mg·L^-1 NAA + 0.7% 琼脂 + 3% 蔗糖)生根率100％,移栽成活率90％。流式细胞技术分析及染色体计数鉴定结果表明,再生植株的DNA相对含量为二倍体的2 倍,染色体数为2n=4x=36。     

同源四倍体青花菜雄配子体的发育过程

利用“爱氏苏木精染色—冬青油透明”技术, 观察研究了同源四倍体青花菜( 2n = 4x = 36)雄配子体的动态发育过程。结果表明: 同源四倍体青花菜与相应的二倍体在雄配子的整个发育过程上表现相似, 细胞核经一次有丝分裂产生营养核与生殖核, 生殖核再经一次有丝分裂形成两个精核, 最终形成3 - 细胞成熟花粉, 具4个或3个萌发孔; 雄配子体发育过程中异常频率为12114% , 败育主要发生在单核     

秋水仙素离体诱导同源四倍体青花菜

 以青花菜品种‘海兹’高频再生试管苗为外植体, 利用秋水仙素离体诱导四倍体。结果表明: 用含秋水仙素200 mg·L ^{- 1}的MS + 0.1 mg·L ^-1NAA + 6.0 mg·L ^{- 1} 6-BA液体培养基处理2 cm长的再生苗48 h, 每个外植体平均可产芽2.1个, 再生植株变异率为83.33% , 四倍体诱导率达79.17%。与二倍体相比, 四倍体植株叶片、花冠、气孔等均表现巨大性; 流式细胞仪倍性鉴定显示, 对照DNA相对含量为200, 四倍体再生植株为400。四倍体根尖染色体2n = 4x = 36。     

青花菜小孢子胚植株再生及倍性研究

以庆农70和庆农80为试材对青花菜小孢子胚状体植株再生因素进行研究。结果表明:胚龄为30～35d且发育健壮的子叶形胚再生成苗率最高,超过75%,胚龄超过40d再生成苗率显著降低;琼脂浓度为1.2%时,小孢子胚再生成苗率最高,达60%～70%;大多小孢子胚不能直接成苗,二次分化频率较高;植株继代和复壮培养适宜培养基为MS+3%蔗糖+1.0%琼脂;小孢子再生植株一半左右为单倍体,二倍体率为30%～35%,存在少数四倍体和嵌合体。     

羽衣甘蓝游离小孢子培养技术研究及应用

以10个羽衣甘蓝杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究胚状体发生和小孢子胚成苗的影响因素,以及小孢子植株倍性鉴定和单倍体加倍方法。结果表明,盛花期为最佳取样时期;培养基中13%的蔗糖较为适宜;继代培养以MS+6-BA 2 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1为宜,平均增殖系数为5.06;小孢子再生植株成活率74.6%;小孢子植株自然加倍率为23.33%~37.50%;单倍体试管苗的加倍处理以秋水仙素浓度70 mg·L^-1,处理时间9~11d为宜,加倍率达54.55%。     

青花菜快速碱化因子RAL F 的克隆与序列分析

 以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段序列为信息探针, 在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索, 经人工拼接、RT - PCR克隆与序列分析验证, 获得了青花菜快速碱化因子RALF(Rapid Alkalinization Factors) 基因的cDNA全长序列, 命名为BoRALFL1 (GenBank序列登录号DQ059310)。该cDNA全长240 bp, 编码79个氨基酸, 与电子克隆获得的序列完全相同。序列分析表明, 编码蛋白存在前导信号肽与多个磷酸化位点, 与同源基因RALFL8核酸序列在88 bp上有82%的一致性, 推导的氨基酸序列在74个氨基酸上存在56%的一致性, 不同植物间氨基酸序列N - 端差异大, C - 端具有较高的保守性。     

两个花椰菜品种再生体系的研究

以2个花椰菜品种的子叶和上胚轴为外植体,以MS为基本培养基,设置不同激素浓度,建立再生体系。结果表明:子叶作为外植体时不定芽分化率低,子叶大部分发生黄化。上胚轴作为外植体不定芽分化率较高,在适合的培养基上均能达到100%,‘祁连白雪’上胚轴最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L,‘新东海明珠80天’的最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA0.5 mg/L。分化后得到的不定芽在MS+6-BA 0.5 mg/L培养基上伸长后,在MS+IAA 0.5 mg/L的培养基上生根,生根率达100%,移植成活率95%。     

苦瓜离体再生体系建立的研究

以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素组合进行苦瓜离体再生体系的研究。结果表明:种子去壳洗净浸泡5min,用70%酒精浸泡1min,洗净后0.1%HgCl2消毒10min的灭菌效果最好;通过愈伤组织诱导不定芽没有取得成功;利用无菌苗不同部位直接诱导不定芽,子叶节效果最好,最高诱导率达到100%,最适宜诱导培养基是MS+6-BA 2mg/L+IBA 0.02mg/L和MS+6-BA 4mg/L+IBA 0.01mg/L;最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.2mg/L。     

白菜型油菜高效离体再生体系的建立

以白菜型油菜(Brassicarapa)的亚种菜心(Brassica parachinensis)的子叶和下胚轴为外植体,研究不同浓度的NAA和6-BA配比对菜心组织培养的影响。结果表明:菜心子叶和下胚轴组织培养的再生最佳培养基分别是MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.2 mg/L+AgNO35 mg/L和MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+AgNO35 mg/L;不定芽生根最佳培养基是MS+NAA0.2 mg/L。同时还研究了AgNO3浓度对菜心组织培养的影响,在培养基中附加AgNO3能提高菜心芽的诱导频率。     

大白菜AB-81高频再生系统的建立及gus A基因瞬时表达的研究

 以大白菜自交系AB-81 的子叶和真叶切块为外植体, 建立了高频不定芽离体再生系统。在MS 附加TDZ 0. 2 mg/L , NAA 2. 0 mg/L , AgNO₃ 10 mg/L 和ABA 0. 25 mg/L 的再生培养基上, 子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到93. 3%和90. 0%, 每块外植体的不定芽数达3～6 个, 最多达21 个。以EHA105/ pMOG410 为载体转化侵染大白菜AB-81 的子叶, 获得较高gus A 基因瞬时表达频率的条件为: 子叶预培养2～3 d ; 侵染的工程菌液的浓度OD 0. 3～0. 5 ; 侵染时间2～10 min ; 共培养时间2～3 d。