用H-Y抗血清对大鼠胚胎进行性别鉴定的研究

利用高度近交系大鼠的新生仔睾丸作抗原对处女大鼠进行免疫,制得 H-Y 抗血清.将同系大鼠的桑椹胚置于含有抗血清的培养液中体外培养5～6小时.结果表明其中部分胚胎能继续发育至囊胚(46.7%);另一部分胚胎停滞发育(53.3%),但解除抗体后重新恢复发育能力(34%).经胚胎移植后证明,前者约有79%发育为雌鼠,而后者约86%发育为雄鼠.由此可见,H-Y 抗血清对雄性胚胎具有特异性的抑制作用.用同样方法免疫远交系大鼠,所得抗血清不能对雄性胚胎产生抑制作用.     

鸡源Iss抗血清对鸡大肠埃希菌O2、O78、CVCC1551的抑制作用

为探讨Iss抗体对鸡大肠埃希菌(Escherichia coli)血清抗性的抑制作用,将纯化的Iss融合蛋白免疫雏鸡而获得抗血清,并对3株鸡大肠埃希菌株O2、O78、CVCC1551进行血清抗性抑制试验,分析Iss抗血清对鸡大肠埃希菌血清抗性的抑制作用。结果表明,抗血清对O2、O78、CVCC1551等3株致病性-血清抗性,但iss基因氨基酸序列不同的大肠杆菌均产生抑制作用,且抑制作用的程度与抗血清含量有关。     

原核表达牦牛朊蛋白的纯化及其活性测定

以原核表达的GST-BoPrP(23～242)融合蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备抗牦牛朊蛋白的特异性抗血清。经Western blotting和间接ELISA鉴定,该抗血清可与牦牛重组成熟PrP(23～242)和牛脑组织提取物发生反应,蛋白酶K消化各抗原可消除免疫反应,但不与GST蛋白和E.coli BL21(DE3)的菌体蛋白发生反应,表明该抗血清为抗牦牛重组成熟PrP(23～242)的抗血清,其效价高达1∶12800,并能识别黄牛脑组织中的天然朊蛋白。原核表达的GST-BoPrP(23～242)融合蛋白能有效地刺激免疫动物产生PrP特异性抗体,所制备的抗血清可适用于天然朊蛋白的检测。     

抗鹅IgY抗血清制备及在ELISA中的应用

为制备鹅免疫球蛋白特异性抗体,通过主动免疫兔子制备了抗鹅ＩｇＹ抗血清,并在ＥＬＩＳＡ中比较分析了该抗血清的应用效果．结果显示,将制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清作为二抗,当抗原包被浓度（１６μｇ／ｍＬ）和血清（１∶１６００）、抗鹅ＩｇＹ抗血清（１∶５１２００）与酶标抗体（１∶２０００）稀释到合适浓度时,在ＥＬＩＳＡ检测鹅抗体水平中呈现出良好效果,其特异性和灵敏度明显好于以兔抗鸡ＩｇＹ作为替代二抗．结果表明所制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清在鹅相关的酶联免疫研究方法中是合格和有效的．     

大蒜茎尖组培苗的检测

从市售阿城紫皮蒜生长的叶片经ＰＥＣ沉淀差速离心提纯,获得复合病毒制剂,得率为４．９０ｍｍ（１００ｇ）－１叶。电镜观察病毒粒体为长度５５０～８００ｎｍ的线状物,经抗血清测定主要为洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）和大蒜潜隐病毒（ＧＬＶ）。用复合病毒制剂免疫制备的抗血清效价为１０２４～２０４８。ＯＹＤＶ抗血清检测茎尖脱毒组培苗,脱毒率为５０％左右,用ＧＬＶ抗血清检测,脱毒率为９５％～９７％,复合病毒抗血清检测结果与ＯＹＤＶ相同。证明复合病毒抗血清可用于组培苗的检测。组培脱毒大蒜在田间种植１年后发病率为５０％,３年后达８０％。茎尖组培脱毒率不高。需用抗血清逐株检测挑选,淘汰病苗,才能获得健康无毒的大蒜群体。     

Immunochemistry of newly found substituents of polysaccharides of Rhizobium species

Acetyl and pyruvic acid groups were detected and estimated in the extracellular polysaccharides of Rhizobium trifolii and R. meliloti. Pyruvic acid was found also in the specific polysaccharide of pneumococcal type 27, and is believed to explain the cross-reactivity between antiserum to pneumococcal type 27 and these and other pyruvate-containing bacterial polysaccharides. Removal of pyruvate from a Rhizobium polysaccharide rendered it inactive with its homologous antiserum and with antiserum to pneumococcal type 27, but it then reacted with several antiserums to other pneumococcal types with which the intact material was unreactive.     

奶牛乳房炎大肠杆菌分离株主要免疫原性蛋白纯化

应用奶牛乳房炎大肠杆菌分离株灭活菌苗免疫健康家兔,制备兔抗大肠杆菌高免血清。对该大肠杆菌菌体裂解产物进行SDS-PAGE并进行Westernblot分析,结果该菌株与稀释一定倍数的兔高免血清反应,产生3条特异性带,其中约33ku蛋白为主要免疫原性蛋白。对其进行电洗脱纯化,得到单一条带的目的蛋白。     

马铃薯疮痂病菌(Streptomyces scabies)的血清学检测

以马铃薯疮痂病菌RB5(Streptomyces scabies)的菌丝-孢子为抗原免疫家兔,制备了抗血清AsRB5,并采用琼脂双扩散和酶联免疫吸附试验对抗血清进行特异性测定,结果表明,供试的10 株马铃薯疮痂病菌,1 株玫瑰黄链霉菌和1株玫瑰暗黄链霉菌与AsRB5 反应为阳性,其他15 株疮痂链霉菌与AsRB5 反应为阴性,作为对照的棉花黄萎病菌、立枯病菌、炭疽病菌与AsRB5 反应为阴性。以上结果表明,使用抗血清AsRB5 检测马铃薯疮痂病菌,基本上可以将其鉴定到种的水平上。但不能对同种内菌株进一步区分或进行多样性评价,并且这种鉴定与其地理来源及寄主无关。     

鸭肠炎病毒US10基因的原核表达及抗血清的制备

以鸭肠炎病毒 (DEV) C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增获得US10基因。构建了其 原 核表达载体pET-32a-US10,经1.0 mmol／L IPTG诱导,目的蛋白在Rosetta(DE3) pLys宿主菌中获得了表达。SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白以包涵体形式表达,与预期大小相符。利用 亲和层析法纯化目的蛋白,以纯化的蛋白为免疫原制备其抗血清,琼脂扩散法测得抗体效价为 1∶4,间接ELISA法测定抗体效价为1∶102　400。间接免疫荧光试验证实制备的抗血清可特 异性识别鸭肠炎病毒的US10基因编码产物。     

大肠杆菌内毒素多克隆抗体的制备与纯化

为制备大肠杆菌内毒素多克隆抗体,应用大肠杆菌内毒素作为抗原免疫5周龄家兔,辛酸-硫酸铵法和葡聚糖凝胶层析法分离提纯抗血清,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳方法鉴定多抗纯度,紫外分光光度计测定抗体蛋白含量,ELISA法检测抗血清效价与交叉反应;大肠杆菌内毒素抗体含量和效价分别为6.95mg/ml和1:12800;成功制备出抗大肠杆菌内毒素多克隆抗体,为大肠杆菌内毒素病诊断试剂盒的研制奠定基础。     

结合态GA_3的间接酶联免疫吸附测定研究

利用GA3-7免疫家兔得到的抗血清,建立了检测结合态GA3的间接酶联免疫吸附测定方法(ELISA)。免疫抗原与包被抗原用最常见的DCC活化羧基与蛋白质相联。检测极限为12.3 ng/mL,线性范围12.3~1 000 ng/mL。抗血清与GA3的交叉反应率为2.3%,与GA4、IAA、ABA和ZR的交叉反应率均很小。     

Passive immunization against cachectin/tumor necrosis factor protects mice from lethal effect of endotoxin

A highly specific polyclonal rabbit antiserum directed against murine cachectin/tumor necrosis factor (TNF) was prepared. When BALB/c mice were passively immunized with the antiserum or with purified immune globulin, they were protected against the lethal effect of the endotoxin lipopolysaccharide produced by Escherichia coli. The prophylactic effect was dose-dependent and was most effective when the antiserum was administered prior to the injection of the endotoxin. Antiserum to cachectin/TNF did not mitigate the febrile response of endotoxin-treated animals, and very high doses of endotoxin could overcome the protective effect. The median lethal dose of endotoxin in mice pretreated with 50 microliters of the specific antiserum was approximately 2.5 times greater the median lethal dose for controls given nonimmune serum. The data suggest that cachectin/TNF is one of the principal mediators of the lethal effect of endotoxin.     

纳豆激酶分离纯化及其兔抗血清的制备

为分离纯化纳豆激酶,使用纳豆激酶粗制液经硫酸铵分级盐析、Sephodex G100和CM-Sephrose-6B FF层析等步骤纯化,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。以纯化的纳豆激酶作为抗原,结合福氏佐剂,采用多次多点肌肉注射法对兔进行免疫,以琼脂免疫双向扩散法检测效价。试验结果表明,纳豆激酶粗制液经纯化后,得纯酶样品,酶被纯化了28.4倍,比活力为608.6 Uku.mg-1蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为单一蛋白条带,纳豆激酶兔抗血清效价为1∶64。成功制备的兔抗纳豆激酶抗血清,为研究纳豆激酶的功能提供了物质基础。     

拟南芥叶绿体血红素加氧酶AtHO1基因的克隆和多克隆抗血清制备

为研究叶绿体血红素加氧酶HO1的生物学功能和分子作用机制,构建了拟南芥血红素加氧酶基因AtHO1的重组融合蛋白表达载体pET28a-AtHO1,质粒转化到Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,AtHO1的重组融合蛋白获得了高效表达,分子质量为28～36ku,且为可溶蛋白。重组蛋白经Ni-NTA亲和层析法纯化后,得到纯度较高的蛋白。纯化产物免疫新西兰大耳兔获得了专一识别重组蛋白6×His-AtHO1的抗血清,进一步提取拟南芥和水稻叶片总蛋白,蛋白质印迹检测显示,在分子质量28～36ku之间出现特异性条带,证明用重组蛋白6×His-AtHO1制备的多克隆抗血清可以与拟南芥和水稻HO1蛋白特异性结合,说明拟南芥HO1的抗血清能够用于水稻HO1的功能分析和应用研究。     

Inactive alkaline phosphatase in duodenum of nursling mouse: immunological evidence

A preparation of duodenal alkaline phosphatase from 11-day-old mice contains an enzymatically inactive material that cross reacts with antiserum prepared against one isozyme of 20-day alkaline phosphatase. After precipitation of this material from solution, the antiserum cannot precipitate the 20-day enzyme     

大蒜B病毒CP基因的原核表达及抗血清制备

制备抗大蒜B病毒(Garlic virus B,GarV-B)CP血清,为研究侵染大蒜6种葱X病毒属(Allexivirus)病毒之间的血清学关系以及大田检测GarV-B奠定基础。该研究根据GenBank报道的GarV-B序列设计引物,扩增从六安市寿县分离获得的GarV-B外壳蛋白基因(CP)并进行序列比对分析。将GarV-B的CP基因插入表达载体pS-BET,在大肠杆菌BL21(DE3)plys E菌株中诱导表达。表达的CP经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化,免疫小鼠获得抗CP血清。Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然GarV-B病毒结合。结果显示:GarV-B的CP基因与目前已报道的GarV-B不同分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89%～90%,氨基酸序列同源性为92%～93%。表明制备的抗体对GarV-B的CP具有高度特异性,且能够与天然GarV-B病毒粒子结合。因此本研究制备的抗GarV-B的CP血清可以用于该病毒的检测。     

Antiserum to lymphocytes: prolonged survival of canine renal allografts

A horse immunized with dog lynmphocytes produced an antiserum which agglutinated canine lymphocytes in vitro and caused prolonged lymphopenia in dogs in vivo. Renal transplants in dogs treated with this antiserum survived for long periods, two of the grafts surviving beyond 350 days with normal function and histologic appearance.     

鸡新城疫牛源血清的试制及效力试验

利用鸡新城疫弱毒在牛体制成鸡新城疫牛源血清,经鸡体效力试验证明对鸡新城疫的强毒攻击具有保护作用,临床初步试用证明对出现病状的鸡具有治疗作用,对同窝未发病鸡具有预防作用。本血清制法简便,可就地生产。就地使用。     

茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体的制备及检测应用

以纯化的茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus,EcobNPV)作为抗原免疫大耳白兔,获得多克隆抗体,Indirect-ELISA效价为1∶51 200;工作浓度分别为EcobNPV 1∶1 600、兔抗血清1∶3 200。用所制备的多克隆抗体对提纯的多角体进行Western-blot分析表明制得的抗体对茶尺蠖核型多角体病毒有良好的特异性。应用于不同来源茶园昆虫多角体病毒分离株的检测,取得了理想的检测效果。     

甘蔗花叶病毒的提纯及抗血清制备

以ＳｃＭＶ－Ａ为材料,采用ＰＥＧ沉淀结合差速离心技术,经１０－４０％蔗糖密度梯度离心后再经浓缩后即为提纯病毒制剂。该提纯病毒具有典型的核蛋白吸收曲线,最大紫外吸收值在２５７ｎｍ处,最小紫外吸收值为２４０ｎｍ,Ａ２６０／２８０＝１．６８,病毒产量可达１．２５－１．３７ｍｇ／ｋｇ。将提纯病毒免疫家兔制备抗血清,所制备的抗血清经Ａ蛋白酶联免疫吸附法测定,其效价为１／１０２４,且可用于检测甘蔗花叶病毒。