兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２～３代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代,传代后染色体数目不变。     

寿光黑鸡成纤维细胞的体外培养与冷冻保存

[目的]建立鸡成纤维细胞的体外培养体系。[方法]用组织块法和消化法分别分离培养鸡皮肤成纤维细胞;比较细胞生长速率及冻存复苏率。[结果]酶消化培养的成纤维细胞原代生长较快,约5 d便可形成单层;2种方法传代细胞的生长速度相似,仅需2~3 d就可形成单层;使用酶消化法和反复贴壁法,经3~4代后,可获得纯化的成纤维细胞;成纤维细胞经冷冻复苏后有75%~80%存活;分离纯化的胚胎和皮肤成纤维细胞的生长曲线均正常,可传至12代,传代后染色体数目不变。[结论]采用组织块法及酶消化法培养鸡成纤维细胞均可获得ES细胞建系所需的饲养层细胞。该研究为ES细胞系的成功建立奠定了基础。     

赤狐耳成纤维细胞的体外培养及核型分析

建立赤狐的耳成纤维细胞的分离和培养体系,为狐的核移植,转基因狐的研究奠定基础。采用组织块培养法分离狐耳成纤维细胞的原代细胞,再利用胰酶短暂消化法进行纯化传代培养,观察成纤维细胞的形态,并进行染色体分析。结果表明,组织块培养法可获得成纤维细胞,经过纯化培养,可获得均一、稳定的狐耳成纤维细胞。可以作为核移植的供体细胞,推动特种动物的转基因研究。     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型,Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞,２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代增减２的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２－３代后,可获得纯化的成纤维细胞。     

麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养与核型分析

为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3～4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麇鹿染色体数目为2n=68,核型式为2（M）＋64（A）,XY（A,M）;含10％NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87．78％的贴壁率。     

牛

印23 .12加3X阳2牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存/任芳丽(西北农林科技大学畜牧兽医学院7 12100),李煌,张涌//黄牛杂志一2(X)2,28(1)一8一10 利用牛皮肤组织块直接培养法,得到牛皮肤细胞的原代培养物,再用酶消化法和反复贴壁法处理,能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通     

欧拉羊胎儿皮肤细胞的培养、保存与鉴定

用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞，通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞，扩大培养至第3代时用液氮保存，复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示，欧拉羊胎儿皮肤细胞呈成纤维型，复苏活力93.5%以上，生长良好，细胞生长曲线呈“S”型，最大增殖量为3.31×10⁵ mL^-1，倍增时间为26.2 h；细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性，连续传代培养在10代内生长正常。表明欧拉羊胎儿皮肤细胞分离培养成功，使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。     

小鼠皮肤成纤维细胞与早期胚胎共生体系的构建

【目的】构建小鼠早期胚胎与皮肤成纤维细胞共生的微环境体系。【方法】分离培养EGFP纯合阳性成年ICR小鼠皮肤成纤维细胞。取激素超排合笼后2.5 d小鼠8-细胞胚胎,通过显微操作系统将4~6个EGFP阳性小鼠皮肤成纤维细胞注射到小鼠早期8-细胞胚胎中,转移发育到囊胚阶段的共生胚胎至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,在小鼠胚胎干细胞分离培养条件下进行培养。【结果】EGFP阳性小鼠成纤维细胞注射到小鼠胚胎后,荧光显微镜下显示,EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚组成细胞中,参与小鼠囊胚组成。在发育到囊胚的共生胚胎中,EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚细胞中的比例为93.73%(269/287)。在小鼠胚胎干细胞的分离培养条件下,2.60%(7/269)共生胚胎中EGFP阳性小鼠成纤维细胞参与小鼠胚胎内细胞团的组成。【结论】小鼠皮肤成纤维细胞与小鼠早期胚胎能够形成共生的微环境体系。     

大鼠皮肤成纤维细胞分离培养方法的研究

目的:对大鼠皮肤成纤维细胞进行分离培养并观察形态。方法:组织块培养法分离大鼠成纤维细胞并进行传代培养并通过细胞形态学观察和HE染色对其细胞进行鉴定。结果体外培养的成纤维细胞呈梭形或多角形,24小时贴壁,通过HE染色,细胞核被染成蓝紫色,胞浆被染成粉红色。结论:该方法成功培养了大鼠背部皮肤的成纤维细胞,所获得的大鼠背部皮肤成纤维细胞可在体外稳定培养,为一些组织来源较少的成纤维细胞培养提供一种有效且可行的实验方法。     

广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离与培养

试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究.利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3 mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅有利于去表皮操作,减少取材处理时间,而且操作时间自由度大.在酶消化法中采用胰蛋白酶消化30 min,胶原酶继续消化30～40 min,能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞.广西巴马香猪皮肤成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2 d、2～8 d、8～12 d.     

不同因素对五指山猪近交系表皮干细胞分离培养的影响

为了解不同因素对表皮干细胞(ESCs)分离培养的影响,以五指山猪近交系的耳组织为材料,分别从不同日龄猪、不同胶原、条件培养液和表皮生长因子等方面对ESCs分离培养的影响进行了研究。结果表明,根据ESCs所占表皮细胞约10%的比例,4日龄组和1月龄组适宜作为分离纯化表皮干细胞的材料;Ⅰ型胶原不适宜作为筛选表皮干细胞的基质;在没有饲养层的条件下,表皮干细胞的培养必须添加条件培养基;添加EGF对ESCs的生长有显著促进作用,而EGF各浓度之间影响差异不明显。     

复合微生物净水剂对观赏鱼水族箱养殖水质的影响试验

以淡水观赏鱼红帽子头为对象,研究复合微生物净水剂对观赏鱼水族箱养殖水质的影响。结果表明,复合微生物净水剂能稳定养殖水体的pH值,提高溶氧量,降解氨氮、亚硝酸盐等有害物质,减少养殖过程中化学需氧量的产生,促进水体氮循环,改善养殖水体水质;复合微生物菌剂还能增强观赏鱼的吸收功能和防病抗逆能力,对鱼体生长有明显的促进作用。     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

松茸菌丝体分离培养研究初报

本研究用松茸子实体菌褶、菌肉和菌柄基部组织作分离材料。结果表明,菌褶易分化出菌丝,但菌丝生长速度缓慢;菌肉组织未分化出菌丝,因此菌肉不能作为分离菌丝的材料;从菌柄基部组织分化出的菌丝生长发育快,可以作为分离松茸菌丝体材料,是3种分离材料中最适宜的。8种不同培养基中,以改良浜田氏培养基、赤松根——酵母浸膏等4种培养基中松茸菌丝生长发育良好。酵母浸膏是松茸菌丝生长发育重要营养源。     

青年学生不良思想形成的原因和教育原则

目前,青年学生不良思想状况表现严重。为此,政府必须大力改善我们的社会环境,特别是努力反腐倡廉和纯洁文化娱乐市场,老师和家长必须努力把握青年人生理、心理特点和社会发展方向,在此基础上学生思想教育应遵循六个原则。     

葡萄原生质体培养中若干因素的研究

试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。     

Deep-sea bacteria: isolation in the absence of decompression

Sampling and pure culture isolation of deep-sea bacteria without loss of in situ pressure is required in order to determine the viability of decompressionsensitive strains. This was achieved by using a pressure-retaining sterilizable seawater sampling system in connection with a prepressurized hyperbaric isolation chamber. Rates of growth and substrate uptake of the majority of isolates showed highly barotolerant characteristics, while the remainder (4 out of 15) exhibited barophilic characteristics.     

棉花原生质体培养研究进展（综述）

本文在介绍棉花原生质体培养研究历史的基础上，综述了棉花原生质体分离、培养及植株再生中的一系列问题，并介绍了棉花原生质体培养在遗传改良中的应用。     

小鼠胚胎成纤维细胞分离培养研究

为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学特性.结果表明,在实验室条件下,12.5～14.5 d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;最佳培养基为DMEM添加15;小牛血清;第3代细胞增殖最旺盛;室温条件下,0.125;胰蛋白酶消化MEF时间以8～10 min为宜.在培养ES细胞时,应选择第3～5代的MEF作为饲养层细胞.研究获得了可在实验室分离制备MEF的方法,为实验室进一步分离培养ES细胞奠定基础.     

碳酸氢铵对白茅和藨草吸收重金属的影响

[目的]为人工修复重金属污染土壤探索新方法。[方法]以分析纯碳酸氢铵为调控剂,以白茅和藨草为试材进行盆栽调控试验并在3个月后测定其重金属含量。[结果]3~5 g/L碳酸氢铵显著增加了白茅对Zn的积累（5 809.11 mg/kg）。3 g/L碳酸氢铵显著增加了白茅对Pb的积累（约38.11 mg/kg）。0.5 g/L碳酸氢铵调控下,藨草对土壤中Pb污染的净化率最大（0.01%）。5 g/L碳酸氢铵调控下,白茅对土壤中Cd污染的净化率最大（0.17%）,藨草对土壤中Zn污染的净化率最大（0.4%）,白茅对土壤中Pb污染的净化率最大（0.01%）。3 g/L碳酸氢铵调控下,藨草对土壤中Cd污染的净化率最大（0.1%）,白茅对土壤中Zn污染的净化率最大（0.31%）。[结论]碳酸氢铵能提高植物对污染土壤的净化率。