鸡新城疫病毒HB92株生物学特性研究（Ⅲ）

用ＮＤＶＨＢ９２株疫苗免疫不同品种鸡，测定其最小免疫剂量和免疫持续期，结果表明，该毒株的最上免疫剂量为１０＾５ＥＩＤ５０，一次滴鼻，饮水的免疫期至少为６个月，湖北省推广应用近１８００万羽份，安全有效，未发生城疫疫情。     

鸡新城疫病毒HB92株生物学特性研究(Ⅱ)——对热的稳定性及在鸡群中的自然传播性试验

将 NDVHB92株分别置4℃、20℃、37℃条件下保存,每隔一周测定血凝价(HA)和对鸡胚的感染力(EID_(50)),结果为毒株在37℃保存7d,在20℃至少保存30d。其HA价和EID_(50)保持不变,4℃保存60d效价不变。同时说明了HB92疫苗株血凝特性和感染力存在不一致性。该每株经56℃水浴处理6h,血凝性和对鸡胚的感染力不变。用HB92株对17日龄雏鸡进行滴鼻、拌料及同居感染免疫,3周后NDHI抗体效价达4.5Log2,免疫和同居鸡对强毒攻击能获得良好的保护,说明HB92株在鸡群中的自然传播性较好。     

鸡新城疫病毒HB_(92)株生物学特性研究(Ⅰ)——对鸽、鹌鹑的免疫试验

用新城疫病毒无毒耐热株HB_(92)分别免疫3月龄鸽和30日龄鹌鹑,于2周后开始每周采血测其血清NDHI抗体,并于最后检测抗体后进行攻毒试验。结果,该毒株对鸽、鹌鹑无任何不良反应。鸽以0.5×10~8EID_(50)剂量经滴鼻和肌注两途径免疫,用NO标准强毒攻击,免疫鸽全部获得保护;鹌鹑以0.5×10~8EID_(50)剂量免疫,滴鼻和饮水组可抵抗强毒攻击,而拌料组难以产生理想的免疫效果。     

鸡新城疫病毒HB92株生物学特性研究（II）：对热的稳定性及在鸡群中的…

将ＮＤＶＨＢ９２株分别置４℃，２０℃，３７℃条件下保存，每隔一周测定血凝价（ＨＡ）和对鸡胚的感染力（ＥＩＤ５０）结果为毒株为３７℃保存７ｄ，在２０℃至少保存３ｄ，其ＨＡ价和ＥＩＤ５０保持不变，４℃保存６０ｄ效价不变，同时说明了ＨＢ９２疫苗株血凝特性和感染力存在不一致性，该毒株经５６℃水浴处理６ｈ，血凝性和对鸡胚的感染力不变，用ＨＢ９２株对１７日龄雏鸡进行滴鼻，拌料及同居感染免疫，３周后ＮＤＨＩ抗体     

鸡新城疫病毒B_(95)株免疫研究

本试验采用鸡胚增殖培养鸡新城疫B95 株病毒。经对培养的尿囊液病毒价达EID50 107.75。无菌性检验和安全性检验均符合疫苗要求 ,将其选作试验用疫苗进行了试验。结果表明 ,该苗滴鼻点眼免疫的最小剂量为105.75,拌料免疫最小剂量为106.75。以B95 株疫苗滴鼻点眼免疫的鸡 ,在免疫后5天时就可产生坚强的免疫力 ,免疫期可达4个月。同居接触免疫鸡能获得了良好的免疫效果 ,攻毒总保护率与滴鼻点眼免疫差异不显著。拌料免疫效果良好 ,与NDV滴鼻点眼免疫差异不显著。B95 株苗在0～4℃条件下保存4个月 ,免疫攻毒保护率达80% ;在室温下保存2个月 ,免疫攻毒保护率达100%。     

鸡新城疫病毒B95株免疫研究

本试验采用鸡胚增殖培养鸡新城疫B95株病毒，经对培养的尿囊液病毒价达EID5010^7.75。无菌性检验和安全性检验均符合疫苗要求，将其选作试验用疫苗进行了试验，结果表明，该苗滴鼻点眼免疫的最小剂量为10^5.75，拌料免疫最小剂量为10^6.75，以B95株疫苗滴鼻点眼免疫的鸡，在免疫后5天时就可产生坚强的免疫力，免疫期可达4个月，同居接触免疫鸡能获得了良好的免疫效果，攻毒总保护率与滴鼻点眼免疫差异不显著，拌料免疫效果良好，与NDV滴鼻点眼免疫差异不显著，B95株苗在0－4℃条件下保存4个月，免疫攻毒保护率达80％，在室温下保存2个月，免疫攻毒保护率达100％。     

猪细小病毒BQ株灭活疫苗免疫剂量及免疫持续期的初步研究

为确定猪细小病毒(PPV)BQ株灭活疫苗(PPV-BQ)的免疫剂量及免疫持续期,本研究与市场上销售的2种PPV灭活疫苗A和B进行了比较。试验分6组,每组免疫3头PPV抗体阴性猪,1组～3组分别免疫BQ株灭活疫苗1mL、2mL、4mL,4组～5组按照说明书免疫A、B两种PPV灭活疫苗,6组为阴性对照组(免疫油佐剂)。两周后进行二免,定期检测血清抗体水平。结果表明,注射疫苗组均产生了PPV抗体,都能持续到免疫后24周。免疫不同剂量PPV-BQ各组间抗体水平差异不显著(p0.05),PPV-BQ与PPV-A抗体水平差异不显著(p0.05),与PPV-B抗体水平差异极显著(p0.01),显著优于PPV-B。PPV-BQ1mL免疫剂量即可达到或超过同类产品的免疫效果,是较为理想的PPV灭活疫苗。     

鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗免疫剂量研究

为了确定鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus-Ⅰ,PPMV-Ⅰ)(S-1株)灭活疫苗的免疫剂量。本试验采用3批PPMV-Ⅰ(S-1株)灭活疫苗实验室制品以不同剂量肌肉注射免疫30日龄低抗体幼龄鸽(HI抗体≤2)和120日龄低抗体青年鸽(HI抗体≤2),分别在免疫后第14,28天对试验鸽进行攻毒,对试验鸽进行临床症状、抗体检测和攻毒保护测定。结果显示,该疫苗对低抗体鸽有保护作用,对30日龄幼龄鸽和120日龄青年鸽的最小免疫剂量分别为0.05,0.2mL/只。因此,为了确保疫苗的免疫效果,在PPMV-Ⅰ(S-1株)灭活疫苗制造及检验规程中疫苗用法用量规定:幼龄鸽肌肉注射,0.2mL/只;青年鸽和种鸽肌肉注射,0.5mL/只。     

鸡新城疫La Sota株、传染性支气管炎W_(93)株二联活疫苗研究 Ⅲ.疫苗免疫期试验

分别用3批鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗(LaSota+W93),NDLaSota单苗和IBW93单苗免疫SPF鸡,并于免疫后第3、7、14、30、90、150天分别用NDV和NIBV强毒攻击。结果表明,二联活疫苗(LaSota+W93)于免疫后7～150d可获得与相应单苗同样的保护力。     

口服鸡新城疫V4株病毒免疫效果研究

经嗉囊接种１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，后第４￣８天，能从粪便中分离出病毒。５周龄鸡拌料一次口服１０＾８．５ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｖ４株病毒，半年内ＨＩ抗体平均效价为２＾５左右，用１００ＥＩＤ５０鸡新城疫Ｆ系标准强毒攻击，保护率１００％，健康鸡与免疫鸡混养，１４天后可获得免疫鸡同样高的抗体反应。     

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫产生期和持续期的试验

评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫16日龄北京鸭的效力、免疫产生期和持续期。利用实验室制备的3批鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(201401、201402和201403批),以0.5 mL/只的剂量分别经肌肉或皮下注射途径免疫16日龄DTMUV抗体阴性北京鸭,首次免疫后14 d按照同样的剂量和途径进行二次免疫。分别于首免后14 d,二次免疫后7、14、42、60d和100 d采血分离血清,用ELISA方法检测抗体。采血后以0.5 mL/只含500 DID50的剂量经胸部肌肉注射鸭坦布苏病毒进行攻毒,攻毒后2 d采血,分离血清进行病毒分离。3个批次疫苗免疫16日龄北京鸭,二次免疫后7 d均可检测到血清抗体,至60 d检测时抗体阳性率在80%以上。三批疫苗二次免疫后7 d即对试验鸭产生保护,保护率可达到60%以上,其中皮下注射途径的免疫持续期为60 d,肌肉注射途径的免疫持续期为100 d。鸭坦布苏病毒病灭活疫苗对16日龄北京鸭采用二次免疫的程序可获得良好的保护效果,胸部肌肉注射途径优于皮下注射途径。     

鸡堆型艾美耳球虫早熟株的最小免疫剂量研究

为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株的最小免疫剂量,设立了6个早熟株1次免疫组、6个早熟株2次免疫组、2个空白对照组、2个攻毒组。SPF鸡4日龄时以200、300、400、500、600、1 000个/羽的剂量接种早熟株卵囊进行第1次免疫,于14日龄使用1次免疫2倍的剂量进行第2次免疫。一次/二次免疫组及各不免疫攻虫组分别于18或28日龄以2×105个/羽的同源强毒株进行攻毒,以相对增重率、病变记分、病变记分减少率、卵囊抑制率和抗球虫指数(ACI)等指标评价免疫效果,确定最小免疫剂量。结果显示,本次试验使用的早熟株具有良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发雏鸡产生保护力,且随着免疫剂量的增加保护力逐渐提高。一次免疫剂量为1 000个/羽和二次免疫的首次免疫剂量大于等于400个/羽、第二次免疫800个/羽,可达到良好免疫效果,可分别定为E.acervulina早熟株一次免疫和二次免疫的最小免疫剂量。     

鸡新城疫病毒V4株的生物学特性研究

鸡新城疫病毒Ｖ４株对１日龄雏鸡安全；对１０日龄雏鸡一次饮水或滴鼻免疫，半年内，ＨＩ抗体平均效价为２＾５左右；以１００ＥＩＤ５０Ｆ系标准强毒（毒力为１０＾８．５ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ）攻击，保护率１００％。并成功地培育了能在５６℃水浴中处理５小时而血凝效价稳定的耐高温毒株Ｖ４－９２，该毒株在２５℃至少保存５周，血凝效价不降。     

鸡新城疫La Sota株、传染性支气管炎W93株二联活疫苗研究 Ⅲ．疫苗免疫期试验

分别用3批鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗(La Sota W93)，ND La Sota单苗和IB W93单苗免疫SPF鸡，并于免疫后第3、7、14、30、90、150天分别用NDV和NIBV强毒攻击。结果表明，二联活疫苗(La Sota W93)于免疫后7-150d可获得与相应单苗同样的保护力。     

猪流行性腹泻病毒变异株疫苗免疫剂量和血清中和效价研究

为了研究猪流行性腹泻病毒变异毒株灭活疫苗的免疫剂量及免疫后抗体的中和效价,选择初产母猪于产前42 d首次免疫,后海穴注射,间隔21日以相同剂量和方法加强免疫,免疫剂量分别为0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和4.0 mL,采集母猪血清和仔猪血清,采用变异强毒株、经典毒株CV777进行血清中和试验分析免疫抗体效价,ELISA抗体检测试剂盒检测血清IgG抗体效价。结果表明,2 mL、4.0 mL免疫剂量组血清抗体与变异毒株中和效价均≥1∶128,与CV777中和效价≤1∶64,二免后母猪血清IgG抗体S/P值均2.0,仔猪断奶时母猪血清抗体S/P≥1.4,0.5 mL、1.0 mL免疫组抗体中和效价、S/P值均较低。确定2 mL为最佳免疫剂量,加强免疫后血清抗体中和效价≥1∶128,对母猪损伤小,经济效益高。     

猪种布氏杆菌WboA基因缺失株对绵羊的免疫剂量及免疫程序研究

为优化猪种布氏杆菌WboA基因缺失株(B.suisΔWboA)对绵羊的免疫条件,本研究采用1岁左右的成年雌性绵羊对B.suisΔWboA的免疫剂量及免程序进行了比较研究。实验分5个组进行,其中A、B、C 3个试验组分别以2倍剂量重复接种、4倍剂量重复接种和单剂量1次接种B.suisΔWboA,D组单剂量1次接种猪种布氏杆菌S2疫苗株(B.suis S2),E组为空白对照组。各组羊首免后7 d、21 d和35 d分别采血,测定血清抗体水平;在首免后35 d,分别采用布氏杆菌强毒菌M28株(B.melitensis M28),经腹股沟皮下注射攻毒。攻毒后28 d,分别取试验羊的脾脏分离攻毒菌株。所有试验羊,在实施攻毒前,其精神、食欲均正常。血清抗体测定结果表明,在二免7 d、21 d后,A组和B组试验羊的抗体水平明显高于C组,而且均超过D组试验羊的抗体水平。攻毒后的细菌分离结果表明,攻毒后28 d,A组和B组试验羊的脾脏细菌分离数量明显低于C组试验羊,并且均低于D组试验羊的细菌分离水平。实验结果表明,B.suisΔWboA的免疫剂量由单倍改为2倍或4倍,免疫程序由单剂量1次改为2倍或4倍剂量2次,可以明显提高免疫效果,并达到与亲本疫苗菌株B.suis S2的免疫水平。     

鸡新城疫病毒F基因疫苗接种剂量的研究

本研究以新城疫病毒 Ｆ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 重组,构建了新城疫病毒 Ｆ基因疫苗。采用不同剂量接种 Ｓ Ｐ Ｆ鸡后,通过抗体监测和强毒攻击试验,分析了其诱导的体液免疫应答及免疫保护作用。结果表明,接种剂量为１００μｇ、２００ μｇ 时,试验鸡在免疫后第 ２ 周出现较明显的抗体反应,接种剂量为 １０ μｇ 时抗体变化不明显。以标准强毒 Ｆ４８ Ｅ９ 攻击后,空白对照组及接种剂量为１０ μｇ 和１００ μｇ 组的鸡只全部发病死亡,未获得免疫保护;而２００ μｇ 组鸡只全部存活,获得完全免疫保护。表明基因免疫效果与接种的剂量有密切的关系。     

鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）最小有效免疫剂量的研究

为科学指导鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）的临床免疫剂量,通过测定免疫鸡HI抗体滴度和攻毒保护试验,进行了10日龄和30日龄SPF鸡最小有效免疫剂量的研究。动物实验使用10 μL、20 μL和40 μL三种不同免疫剂量,免疫疫苗后21 d检测HI抗体效价,10日龄SPF鸡001批次疫苗HI抗体平均效价依次为：4.8、6.2和6.5,攻毒保护率依次为80%、100%和100%,30日龄SPF鸡HI抗体平均效价依次为：5.0、6.3和6.5,攻毒保护率依次为70%、100%和100%,结果表明,新城疫灭活标记疫苗（MG7株）HI 抗体效价和保护效力呈正相关, 免疫剂量与HI 抗体效价和保护效力也呈正相关。用NDV基因Ⅶ型强毒G7株进行攻毒保护试验,两种日龄鸡在20 μL的免疫剂量下,疫苗仍能达到良好的免疫保护效果。     

鸡新城疫弱毒H88克隆株与LaSota株免疫生物学特性比较试验

本试验比较了鸡新城疫弱毒Ｈ８８克隆株与ＬａＳｏｔａ株免疫生物学特性，分别测定二者的最小致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）为１０８和１０２小时，１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）为０．３４和０．３９，鸡胚半数感染量（ＥＩＤ_５０）为９．２５和８．７５。