裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞诱导2n♀配子体

以实验室内保存培养的裙带菜(Undaria pinnatifida)2n♀配子体为实验材料,经切碎培养,促进2n♀配子体成熟,排出卵进行孤雌生殖,形成幼抱子体.将0.5～1.0 cm的孤雌生殖幼孢子体的假根切除,从其体细胞中诱导出2n♀配子体.实验结果表明,在10～20℃范围内,培养20 d后,在15℃和20℃下的2n♀配子体排出的卵的孤雌生殖率分别为8.4%和7.4%,明显高于10℃下的1%0 20℃下诱导培养15d后就出现了2n♀配子体,培养60 d后,2n♀配子体的诱导率达到100%;15℃下培养30 d后才出现2n♀配子体,60 d后的诱导率为38%;而10℃下诱导培养45d后才开始出现2n♀配子体,60 d后的诱导率仅为12%.将诱导产生的2n♀配子体切碎,在20℃下培养10d后的成熟率为34%,60 d的成熟率达到100%.通过孤雌生殖幼孢子体诱导产生的2n♀配子体与正常♂配子体杂交形成了3n裙带菜幼孢子体.本研究发现了获得大量2n♀配子体的新方法,旨在为裙带菜三倍体幼苗规模化培育奠定基础.     

裙带菜幼孢子体营养细胞多倍体育种

本文报道了裙带菜幼孢子体的营养细胞2n配子体的产生过程及其发育特点、性分化、发育成熟时间,进行了2n配子体间及与正常配子体的杂交,培育出3n、4n幼孢子体。测定了不同倍性幼孢子体的生长。观察到3n幼孢子体的染色体数为90。     

Cu2+对鼠尾藻幼孢子体生长的影响

以鼠尾藻Sargassumthunbergii幼孢子体为材料,研究了Cu2+对不同生长时期的鼠尾藻幼孢子体生长的影响。不同生长时期的鼠尾藻幼孢子体对微量Cu2+都是敏感的。对于早期的鼠尾藻幼孢子体,5μg/L以上浓度的Cu2+对其正常生长不利;当Cu2+浓度达到或超过250μg/L时,该时期幼孢子体基本停止生长。对于后期的鼠尾藻幼孢子体,10μg/L以上浓度的Cu2+对其正常生长不利;1μg/L浓度的Cu2+对其生长有促进作用;当Cu2+浓度达到或超过50μg/L时,该时期幼孢子体增长缓慢或基本停止生长。鼠尾藻幼孢子体的假根由于结构和功能特性,对Cu2+的敏感程度不大,Cu2+处理初期依然表现出快速增长。     

巨藻(Macrocystis pyrifera)引进与人工育苗

1978年8月28日,从墨西哥下加利福尼亚州圣托马斯(Santo Tomas)藻场,采到成熟的巨藻孢子叶数十片,另有幼藻48棵。将孢子叶和幼藻运到恩塞纳达(Ensenada),并在当天晚上采孢子,获得一批胚孢子和配子体。将其中30棵幼藻和配子体,分两批用低温水运的方法,从恩塞纳达启运,分别经9天与8天运到青岛,幼藻和配子体全部成活。运抵青岛后,将幼藻移植在浮筏上和海底浮绳上培养至1979年的7月,体长达11米以上。配子体置于室内培养,培养液用消毒、过滤后的海水,并添加营养盐:N 4 ppm,P 0.4 ppm,Fe 0.04 ppm以及一些海泥浸出液。培养水温为7—13℃。培养用海水每隔3天更换一次。光照强度为500—2000米烛,以8L/16D 为一光照周期。配子体于室内培养13天,配子体性细胞成熟,71天后,幼孢子体个体长度一般为0.1—0.5厘米,大者1.0厘米。将这些幼孢子体移到海上用浮筏培育。在浮筏上培育60天后,藻体长度已达10厘米左右。在直径0.5厘米、长度12米的红棕绳上,共培育出巨藻幼苗10万余棵。     

农区不同品种肉羊杂交组合模式效益分析

选择波尔山羊、南江黄羊、本地羊进行杂交组合,分析不同组合模式的产羔数、初生重、双月龄断奶重、六月龄出栏重等生产指标,筛选农区适度规模舍饲肉羊的最优杂交组合。结果表明:不同品种肉羊杂交生产性能明显提高;不同杂交组合模式效益依次为本♀×波♂×波♂>本♀×南♂×波♂>本♀×波♂。     

鼠尾藻有性繁殖和幼孢子体发育的形态学观察

野外跟踪观测烟台芦洋湾地区鼠尾藻的成熟繁殖状况,采集临近成熟的鼠尾藻至实验室培养,跟踪观测其卵子的排放、卵子和受精卵的发育、假根的生长以及幼孢子体的前期发育。试验结果表明,本地区鼠尾藻繁殖期集中在6—8月,鼠尾藻的卵子发育属8核1卵型,卵子受精后约20 h开始脱离生殖托,受精卵先连续进行2次的横分裂,而后再由一端的1个细胞发育成假根,另外2个发育成体细胞。幼孢子体在约2 mm时开始形成分枝突起。     

裙带菜克隆配子体生产性育苗技术研究

报道了雌、雄裙带菜克隆配子体切割扩大培养的藻丝适宜长度平均分别为172μm和104μm；分离的雌、雄配子体在设定的10、15、20、25℃的培养条件下，最适宜的生长温度分别为25℃和20℃；作为经济浓度0.5×10-6的GeO2不仅可以杀除杂藻（硅藻），同时能有效抑制配子体的性发育；用克隆配子体经组织捣碎机捣碎后进行采苗育苗，1996～1999年培育出的裙带菜苗平均长度分别为 4、5、2～3和 2～3 mm，平均密度分别为58株/cm、170株/cm、152株/cm和 136株/cm，裙带菜苗绳总长分别为17×62.5 m、679×62.5m、1200×62.5m和 2745×62.5m。     

海带染色体的DAPI染色及核型初步分析

鉴于海带染色体比较小且数目存在分歧等原因,利用0.2%秋水仙素对海带配子体及孢子体处理10 h左右,经过卡诺试剂固定、多种酶组合处理及30 cm的高位滴片,可以获得质量比较高的海带染色体;使用灵敏度高、特异性强的DNA荧光染料DAPI进行染色,结果显示,海带雌、雄配子体的染色体各为31条,孢子体染色体为62条,大多为短杆状或者点状;雌配子体染色体的大小为0.78～2.61μm,稍大于雄配子体(大小为0.57～2.17μm)。根据染色体的大小,对海带配子体的染色体核型进行了初步分析。这些结果为分子标记的染色体定位等细胞学研究奠定了技术基础。     

辽东半岛裙带菜室内常温全人工育苗：双高光控制、温度变化和配子体发育

2010年,作者在辽东半岛成功进行了裙带菜室内常温全人工育苗大规模生产试验,并全程进行了光照强度、温度和配子体发育相关性的研究。研究表明,采用双高光期(≥50μmolphotons/m2·s)调控配子体的生长和发育可达到理想效果。从采苗至度夏前,采用高光照使配子体充分完成营养生长;从度夏结束至幼苗出库前,同样采用高光照,使配子体快速发育形成孢子体并迅速生长。现场观察表明,只要光照强度逾越了诱导发育的阈值,裙带菜配子体在24℃仍然能够正常发育并形成孢子体;幼孢子体能够耐受24～26℃的高温,但是最适生长温度为20～22℃;孢子体越小,耐受高温能力越强。在24～26℃的高温条件下,幼孢子体生长缓慢,较大个体会出现尖端溃烂缺失的现象。在整个育苗过程中,根据温度变化和配子体的显微观察结果因地制宜地对光线进行实时调整。出库前培育的苗帘在幼苗密度、大小和健康方面均达到商业化栽培的要求。     

铜藻的受精卵发生与幼孢子体发育

通过室内培养, 观察了铜藻受精卵的发生与幼孢子体发育, 研究了幼孢子体的适宜培养条件, 为全人工育苗奠定理论基础。结果表明, 铜藻雌性生殖托的基部和中部首先集中排卵, 卵子粘附于生殖托表面完成受精和早期发生。刚释放的卵子具有8个核, 受精后, 8个核迅速融合成1个大核, 开始细胞分裂。前二次的细胞分裂均为横裂, 在萌发体的一端产生一个很小的“假根原细胞”, 后者最终发育成假根, 萌发体的其它细胞发育成苗体。受精后约48 h, 受精卵发育成具有假根芽的幼孢子体, 开始脱落附着; 培养15 d, 发育成具有2个叶片、体长超过3 mm的幼孢子体。在幼苗的早期培育阶段, 较高的温度和长光照时有利于幼苗的生长和叶片增加, 适宜培养条件为温度21~24 ℃, 光密度40 μmol photons/(m2?s), 光周期14 L∶10 D。     

浒苔染色体制备及核型初步分析

由于浒苔染色体制备难度较大,至今还没有准确染色体数目及核型分析报道。以引发我国黄海绿潮优势种浒苔(Ulva prolifera)为研究对象,采用酶解-荧光法制备浒苔染色体,并比较分析染色体制备过程中秋水仙素预处理时间、酶解时间和滴片高度等3个关键因素对染色体制片效果的影响,以建立浒苔染色体制备方法。结果表明:用质量浓度为0.2%的秋水仙素处理12 h,染色体浓缩程度适宜,分散均匀,形态清晰;用质量浓度为2%的纤维素酶、果胶酶、离析酶,混合酶解20 h效果最好,能去除细胞壁、细胞膜和多糖物质;30 cm高度下滴片,能使细胞分散均匀,可以获得质量较高的浒苔染色体。核型分析显示,浒苔雌、雄配子体染色体数目为9条,孢子体染色体数目为18条。研究结果可为未来浒苔遗传特征分析以及浒苔功能基因定位研究奠定基础。     

团头鲂同源四倍体、倍间三倍体与二倍体红细胞的形态特征比较

通过比较同源四倍体、倍间三倍体与二倍体团头鲂（Megalobrama amblycephala）的红细胞、红细胞核的形态大小差异,探讨不同倍性团头鲂的红细胞形态遗传特征。结果表明：（1）团头鲂多倍体（同源4n和倍间3n）的红细胞数量显著低于二倍体（2n）团头鲂（P〈0．05）。其中,倍间三倍体团头鲂每毫升血液的红细胞数为二倍体的78．95％,而同源四倍体的红细胞数量下降幅度较大,仅为2n团头鲂的56．87％。（2）团头鲂同源四倍体、倍间三倍体的红细胞短径和长径、核短径和长径、红细胞表面积、红细胞体积和核体积均依倍性增加而显著增大（P〈0．05）;其中,又以核体积增大最为显著,同源四倍体、倍间三倍体的核体积分别为2n团头鲂的1．97倍和1．39倍。（3）团头鲂同源四倍体每毫升血液红细胞的总体积和总表面积,均明显低于二倍体和倍间三倍体团头鲂（P〈0．05）;倍间三倍体每毫升血液红细胞的总体积要多于二倍体团头鲂（P〈0．05）,但红细胞的总表面积在倍间三倍体与二倍体团头鲂间不存在显著差异（P〉0．05）。（4）在团头鲂同源四倍体中还观察到一定比例的异常红细胞现象。     

GeO2对海带幼孢子体培育过程中硅藻污染的抑制效应

采用叶绿素荧光技术,以光系统Ⅱ最大荧光产量(Fv/Fm)为指标,结合形态显微观察,研究了GeO2在海带幼孢子体培育过程中菱形藻污染的抑制效应。结果表明,1)对于菱形藻,当GeO2浓度在5mg/L以上时,对其Fv/Fm值有显著影响,达到或超过15mg/L时菱形藻趋于死亡。2)对于海带幼孢子体,GeO2浓度在20mg/L以上时,对其Fv/Fm值有显著影响,达到或超过30mg/L时其趋于死亡。3)对于受到菱形藻污染的海带幼孢子体,GeO2浓度在15mg/L以上时对其Fv/Fm值有显著影响,达到或超过20mg/L时其趋于死亡。综合来看,当GeO2浓度为5～15mg/L时,菱形藻光合作用受到较强的抑制,而对海带幼孢子体影响不大。     

Nematopsis marinus n. sp., a new septate gregarine from cultured penaeoid shrimp Litopenaeus vannamei (Boone), in Ecuador

The septate gregarine Nematopsis marinus n. sp. (Apicomplexa: Cephaline) heavily infected the midgut of cultured Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei (Boone) in Ecuador. It is morphologically similar to other species of the genera Nematopsis, but it can be distinguished from them, by having gamonts with a prominent hemispherical protomerite that contained numerous refractile granules and unusual strong gliding movement. There is evidence that shrimp acquired the infection in the ponds, as larval or postlarval stages do not showed infection. Juveniles and adult shrimp had a prevalence and intensity of infection ranging from 50% to 80% and 10 to > 5000 parasites respectively. When voided from the gut, the gregarine keep alive in seawater. This gregarine have been associated with the marine environment and there are no records of this species in low salinity waters or freshwater. Results suggest that N. marinus could have most of the life cycle of the species within the host L. vannamei.     

Neoparamoeba branchiphila n. sp., and related species of the genus Neoparamoeba Page, 1987: morphological and molecular characterization of selected strains

A total of 18 Neoparamoeba strains were characterized both morphologically and using the SSU rRNA gene sequences as molecular markers. Nine were isolated from gills of farmed Atlantic salmon, Salmo salar L., six from sediments sampled in areas of sea-cage farms and three from net material of sea-cages. The newly obtained sequences extended substantially the dataset of Neoparamoeba strains available for phylogenetic analyses, which were used to infer taxonomic relatedness among 32 strains morphologically assigned to this genus. In addition to the N. pemaquidensis and N. aestuarina clades, phylogenetic analyses clearly distinguished a third clade with sequences from six strains. Members of this clade are characterized as representatives of a new species, N. branchiphila n. sp. The diagnostic primers for the identification of this species are introduced.     

Thelohanellus testudineus n. sp. (Myxosporea: Bivalvulida) infecting the skin of allogynogenetic gibel carp Carassius auratus gibelio (Bloch) in China

A Thelohanellus species was encountered during a survey on Thelohanellus diversity of Carassius auratus gibelio (Bloch) in China. The infection is characterized by the presence of large cysts of 1.4–3.2 cm in diameter in the skin of host. Mature spores were ampullaceous in frontal view and testudinate in lateral view, measuring 19.7 ± 0.7 (18.6–20.8) μm long, 7.6 ± 0.4 (6.6–8.4) μm wide and 7.3 ± 0.5 (6.6–8.8) μm thick. The single polar capsule was elongated pyriform, with 11.1 ± 0.5 (10.0–11.9) μm long and 5.3 ± 0.3 (4.3–5.8) μm wide. Polar filaments coiled with 7–8 turns. Scanning electron microscopy revealed a smooth spore surface with flat side and convex side. The sutural line was straight or ‘S’ like, running near the middle of the valves. Histologically, the large cysts consisting of numerous small plasmodia developed in the dermis of the skin. The BLAST search indicated that the newly obtained ssrRNA gene sequences did not match any available sequences in GenBank and phylogenetic analysis placed it in the Thelohanellus clade. Based on morphology and molecular differences with reported Thelohanellus spp., this parasite was described as a new species of genus Thelohanellus.     

Morphology,seasonality and phylogeny of Zschokkella soleae sp. n. (Myxozoa,Myxosporea) parasite of Solea solea (L.) (Pleuronectiformes,Soleidae) from Ghar El Melh Lagoon,Tunisia

A new Myxosporea, Zschokkella soleae sp. n., was found in the gall bladder and the bile of common sole, Solea solea (L.), from Ghar El Melh Lagoon in north‐east Tunisia. This is the first record for the presence of Zschokkella species in Tunisian waters. The parasite's plasmodia are polysporic with variable size and shape. Some plasmodia appeared attached to the gall bladder epithelium while others were found free in bile. Mature spores are ellipsoidal in frontal view 13.8 ± 0.38 μm long and 10.86 ± 0.40 μm wide with two equal size spherical polar capsules 3.6 ± 0.43 μm in size. The prevalence of infection seems to correlate with host size and changes over the year with maximum percentage in summer. Based on the 18S rDNA sequence data, Z. soleae sp. n. is readily distinguishable from other myxozoan DNA sequences in GenBank. Phylogenetically, the new species is placed in the freshwater Myxidium clade including several Zschokkella spp. infecting the gall bladder. Morphology, histology as well as DNA sequence analysis indicate that the examined species differs from all previously described Zschokkella species.     

兰州鲇（CAG）n、（GATA）n微卫星文库构建与鉴定

应用磁珠富集法构建兰州鲇（ Silurus lanzhouensis） CAG重复和GATA重复的微卫星文库,并分析其序列特征。兰州鲇基因组DNA经MseI酶切,选取200～800 bp的片段与生物素标记的探针（CAG）8和（GATA）6杂交,捕获到含有微卫星序列的目的DNA片段连接到pMD19-T载体,转化到大肠杆菌DH5α菌株中构建微卫星富集文库,经PCR检测筛选出阳性克隆进行测序。从126个阳性克隆中随机选取96个进行测序,获得59个微卫星序列（ GenBank登录号： KJ545973～KJ545998, KJ598088～KJ598120）。其中完美型31个（52.54％）、非完美型20个（33.9％）、混合型为8个（13.56％）。根据侧翼序列,成功设计48对引物,选取25对微卫星引物在10个个体进行扩增与多态性筛选,共获得10对多态性引物。结果表明,经优化的磁珠富集法能够高效地获得兰州鲇微卫星标记,这些标记将为兰州鲇种质资源保护、微卫星连锁图谱构建、经济性状的QTL定位及分子标记辅助选育奠定基础。     

海水养殖水体中的危害性纤虫2新种——小冠须虫和拟迈氏冠须虫↑（*）

报道了采自青岛海区贝类育苗和养成池中的２ 种原纤类纤毛虫———小冠须虫Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｏｇｏｎ ｍｉｎｕｔａ ｎ ．ｓｐ ．和拟迈氏冠须虫Ｓ．ｐａａｒａｍｅｓｎｉｌｉ ｎ ．ｓｐ．。依据蛋白银染色并结合活体观察,对其形态学做了综合描述,并就其主要鉴定特征与相近种进行了比较。