气相色谱法测定萝卜中的MTBGSL

应用气相色谱法测定萝卜中的ＭＴＢＧＳＬ（４甲硫基３丁烯基芥子油葡糖苷）含量。利用萝卜内部的芥子酶，使ＭＴＢＧＳＬ水解脱去葡萄糖，测定水解生成的ＭＴＢＩＴＣ（４甲硫基３丁烯基芥子油），然后通过化学反应式计算得到ＭＴＢＧＳＬ的含量。粉碎的萝卜中添加黑芥子苷，回收率为９２．１％±２．１％（＼％±ＳＤ＼％）。应用该法测定的结果，萝卜皮部ＭＴＢＧＳＬ的含量高于肉质部，肉质部又以尾部含量最高，中部次之，头部最低。     

RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。     

ABT处理棉种最佳剂型剂量试验

用ＡＢＴ４及清水作对照，采用不同浓度浸种的方法，进行了新型ＡＢＴ６，ＡＢＴ７，ＡＢＴ８，ＡＢＴ１０棉花区域化试验，结果表明，ＡＢＴ７，ＡＢＴ８，ＡＢＴ１０，ＡＢＴ４不同浓度均比清水浸种有极显的增产效果，其中以２０，ｇ／ｋｇ ＡＢＴ７浸种处理增幅度最大，平均较清水增产１６．２％，较２０，ｇ／ｋｇＡＢＴ４处理半产７．６％。     

香蕉束顶病毒PCR检测技术研究

建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增技术检测香蕉组织和单头蚜虫内的香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）,并报道了ＢＢＴＶ免疫捕捉ＰＣＲ（ＩＣ－ＰＣＲ）和直接结合ＰＣＲ（ＤＢ－ＰＣＲ）检测方法,ＩＣ－ＰＣＲ和ＤＢ－ＰＣＲ分别能从４μｇ和０．４ｍｇ香蕉叶组织中检测到ＢＢＴＶ。     

蓝舌病病毒进化的基因序列分析初步研究

为确定在我国流行的一株蓝舌病病毒（ＢＴＶ－１０）的基因型和血清型背景，对该毒株及来自美国的５ 株不同血清型（ＢＴＶ－２，ＢＴＶ－１０，ＢＴＶ－１１，ＢＴＶ－１３，ＢＴＶ－１７），来自澳大利亚的ＢＴＶ－１５，来自南非的ＢＴＶ－１ 型毒株进行了核酸同源性比较和系统树分析。结果表明：这８ 株病毒分属于３ 种不同的病毒型，中国分离株与来自美国的ＢＴＶ－１０ 同源性最高，与美国分离株ＢＴＶ－２，ＢＴＶ－１０，ＢＴＶ－１１，ＢＴＶ－１７ 同属于一个型。据分析结果推测中国分离株ＢＴＶ－１０ 很可能是美国ＢＴＶ－１０ 型与ＢＴＶ－１７ 型基因重组的结果     

心血管调节肽在体外循环中的作用

通过观察１５例ＣＰＢ心内直视手术病人不同时期的血浆ＡＶＰ、ＮＴ、ＤｙｎＡ和ＡＴⅡ的变化，认为麻醉及手术的应激反应可促使ＡＶＰ、ＤｙｎＡ和ＡＴⅡ的分泌释放，ＮＴ在ＣＰＢ期间变化不大，与升高的ＡＶＰ抑制其释放有关；并探讨了这四种神经肽与心血管功能的关系，认为麻醉及ＣＰＢ期间神经肽的这种变化对维持循环稳定、保证重要脏器的血液供给等具有重要意义。     

马立克氏病毒光敏生物素核酸探针的刺备及应用

鸡胚成纤维细胞培养ＨＶＴ，蔗糖梯度垫层纯化病毒颗粒，抽提病毒ＤＮＡ，经ＢａｍＨＩ降解，光敏生物标记制备成ＨＶＴＤＡＮ生物素探针，经斑点印迹杂交试验，生物素ＨＶＴＤＮＡ探针具有较高的灵敏性，可检测出３１ｐｇ水平的同源ＤＮＡ序列。     

精密性建筑振动控制设计实用软件VCD

“精密性建筑”内部的精密仪器对防振、防尘、隔声要求较高，在设计中应当重视。精密性建筑振动控制设计实用软件ＶＣＤ以配有ＶＧＡ卡微机图形系统的ＩＢＭＰＣ／ＡＴ系列微机及其兼容机为硬件环境，用ＦＯＲＴＲＡＮ语言编制，并加入ＦＯＲＴＲＡＮ图形库ＤＲＡＦＴ．ＬＩＢ，形成的ＤＷＧ文件能直接进入Ａｕｔｏ ＣＡＤ进行编辑、绘图。ＡｕｔｏＣＡＤ的ＤＷＧ文件也可在ＤＲＡＦＴ．ＬＩＢ设置的当前窗口中显示或作为图块插入。     

马立克氏病病毒gB基因的重组痘苗质粒构建

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ｇＢ基因序列设计ＰＣＲ引物,以ｇＢ质粒为模板,扩增出ＭＤＶｇＢ基因５’端到３’端３８８ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ双酶消化ＰＣＲ产物,将其克隆入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒,构建中间质粒Ⅰ;用ＸｂａⅠ消化ｇＢ质粒,切出ＭＤＶｇＢ基因ＸｂａⅠ片段,并正向克隆入中间质粒Ⅰ的ＸｂａⅠ位点,将ＭＤＶｇＢ基因１３７ｂｐ的ＰＣＲ产物与其ＸｂａⅠ片段正向连接,构建中间质粒Ⅱ用ＥｃｏＲⅠ调出中间质粒Ⅱ中的ＭＤＶｇＢ基因,正向克隆入痘苗病毒表达载体ｐ１６启动子下游,构建ＭＤＶｇＢ基因表达质粒ｐ１６－ＭＤＶｇＢＭＤＶｇＢ基因重组痘苗表达质粒的成功构建,为下一步进行重组病毒的构建及ＣＴＬ应答的深入研究奠定了基础     

新疆肠道传播的非甲非乙型肝炎（戊型）病毒（ET—HEV）核酸特异片段的PCR扩增

本研究建立了自患者粪便中直接进行ＥＴ－ＨＥＶ核酸特异片段扩增的方法．即便经反转录反应后的ＰＣＲ放大法。ＰＣＲ流程为：变性：９４℃９０ｓ，退火：４０℃９０ｓ，延伸；７３℃１２０ｓ，共２５个循环。所用引物为ＥＴ－ＨＥＶ特异．从而决定了ＰＣＲ产物的特异性．该产物已用于制备ＥＴ－ＨＥＶＲＮＡ持异的诊断探针．     

检测疫苗中猪肺炎支原体污染的PCR-斑点杂交法和套式PCR法比较研究

为建立一种敏感、特异的检测疫苗中猪肺炎支原体污染的方法,设计了猪源支原体PCR通用外套引物和猪肺炎支原体种特异性内套引物及地高辛标记寡核苷酸探针,建立了PCR-斑点杂交技术,应用于猪瘟活疫苗中猪肺炎支原体污染的检测,并与套式PCR技术进行比较研究.结果显示,探针最低检出DNA量为23.4 pg,比套式PCR(最低检出量为62.5 pg)敏感性更高,且探针与鸡毒支原体和大肠杆菌DNA无交叉反应.对来自6个生产厂家共90批疫苗的检测结果显示,PCR-斑点杂交法比套式PCR法对疫苗猪肺炎支原体污染的检出率高10%.以上结果表明PCR-斑点杂交法具有更高的敏感性和特异性,在疫苗猪肺炎支原体污染的检测中具有推广应用价值.     

广西家养反刍动物蓝舌病血清学监测分析

[目的]了解广西家养反刍动物蓝舌病毒(BTV)的感染情况,为防控广西蓝舌病(BT)提供参考依据.[方法]采用琼脂免疫扩散试验(ACID)对采自广西境内的2535份山羊血清和496份水牛血清进行BTV抗体检测,并对地理、气候因素与BTV区域分布情况进行分析.[结果]广西山羊和水牛的总BTV抗体阳性率别为36.53%和43.55%,且以南宁市的山羊、水牛BTV抗体阳性率最高,分别为78.13%和85.71%.广西家养反刍动物BTV抗阳性率呈北低南高,高海拔地区BTV抗体阳性率低于低海拔地区,气温较高的南亚热带及北热带的BTV抗体阳性率高于气温较低的中亚热带,降水充沛的东部地区的BTV抗体阳性率高于降水较少的中部和西部地区.[结论]广西家养反刍动物普遍存在BTV感染,且分布受到纬度、海拔、气温与降雨量等地理、气候因素的影响.     

蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究

 为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为40%;对58份已知阳性血清样品同时进行中和实验和C-ELISA检测,检测结果经SPSS软件进行t检测统计分析,Sig.（双侧）=0.651,相关性0.912,相关性显著。对24个BTV血清型阳性血清,2份牛BVD阳性血清,2份羊口蹄疫阳性血清,2份羊痘阳性血清进行检测。结果表明,24个BTV血清型阳性血清为阳性,其他血清全部为阴性。对150份已知阴性血清和55份已知阳性血清用中和试验、美国VMRD 公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明,本检测方法与中和试验检测结果符合率达100%,进口试剂盒符合率为96.7%。     

视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.     

小麦种子萌发期水分胁迫诱导表达差异cDNA的研究

以小麦幼芽为材料,采用mRNA差异显示方法和银染技术,对经过用16%(-0.5 MPa)PEG-6000溶液处理不同时间而诱导表达的小麦基因进行分离,共得到cDNA差异片段16条。其中4条差异条带呈表达减弱,其余差异条带均呈表达增强。测序结果与GenBank数据库比对,2个cDNA片段与已知基因同源,WSI241与编码胚后期丰富蛋白的Em基因同源性达100%,WSI208与ARA-1 mRNA同源性达88%。大部分都是功能未知的EST序列。其中WSI483(454 bp)与小麦干旱胁迫幼苗cDNA同源性达100%;WSI232与小麦干旱胁迫叶cDNA同源性达100%。WSI301与小麦盐胁迫芽鞘cDNA同源性达98%,WSI267与小麦热胁迫旗叶cDNA同源性达93%,WSI289与小麦ABA处理胚cDNA同源性达92%,WSI268与镰刀菌感染的小麦穗同源cDNA同源性达97%。经反向Northern验证,有6个cDNA呈阳性。可用探针或设计引物作进一步研究。     

金荞麦二氢黄酮醇4-还原酶基因（FdDFR1）的克隆及序列分析

 【目的】克隆金荞麦二氢黄酮醇4-还原酶基因（FdDFR1）,分析其序列特征。【方法】利用同源克隆的原理,采用RACE结合cDNA文库筛选的方法,从金荞麦cDNA文库中克隆DFR基因（FdDFR1）;对其序列进行生物信息学分析和Southern杂交检测。【结果】克隆到一个DFR蛋白基因（FdDFR1）,通过Southern杂交分析,推测在金荞麦基因组中DFR基因是1～2个基因的小家族,FdDFR1是单拷贝基因;FdDFR1基因编码一个长341个氨基酸的蛋白质,在N端存在一个NADP结合位点“VTGASGFVGSWLVMRLLEHGY”,还存在一个底物结合特异性决定的氨基酸基序“TVNVEEKQKPVYDETCWSDVDFCRRV”。【结论】首次从金荞麦中克隆到类黄酮代谢的中期关键酶基因（FdDFR1）,它具有DFR同源基因的典型特征。     

应用~(32)P 标记DNA探针检测伪狂犬病病毒的研究

本文报道建立了一种以~(32)P 标记的 PRV 全基因组 DNA 和重组质粒PSAG1-19DNA 作为探针,检测感染培养细胞中 PRV-DNA 的斑点杂交法。两种探针均能检测10Pg 的 PRVNDA,而与正常细胞抽提物无同源关系,具有较高的灵敏度和特异性。应用了一种快速、简便的 PRV DNA 抽提法,简化了样品制备的程序,提高了检测的可靠性。比较研究了杂交法中的一些重要条件,包括探针的选用,样品 DNA 的处埋,滤膜的选用等,为检测 PRV 提供了一种灵敏、可靠的方法。     

猪肺炎支原体斑点杂交检测方法的建立及应用

为建立猪肺炎支原体斑点杂交检测方法,并用于猪肺样品的检测,根据GenBank中登录的猪肺炎支原体(Mhp)P36基因序列,设计并合成一条地高辛标记的DNA寡核苷酸探针。进行Mhp斑点杂交反应,建立最佳反应体系和反应条件,对该方法进行特异性和敏感性试验,并采用最佳反应体系和反应条件在尼龙膜上对猪肺组织样品进行检测。结果表明,该检测方法可有效从可疑病料的猪肺组织中检出Mhp感染,检出率为39.5%。本研究建立的Mhp斑点杂交检测方法快速、敏感、特异,对Mhp的临床检测具有较好的应用价值。     

Isolation of human C-reactive protein complementary DNA and localization of the gene to chromosome 1

With a synthetic oligonucleotide mixture as probe, complementary DNA clones of C-reactive protein were isolated from an adult human liver complementary DNA library. The clones ranged in size from 700 to 1100 base pairs and were identified by partial DNA sequence analysis. One complementary DNA clone was used as a probe for hybridization with human-rodent DNA's isolated from somatic cell hybrids and bound to nitrocellulose filters (Southern blot analysis) to assign the human C-reactive protein gene to chromosome 1.     

Detection of arboviruses in Culicoides(Diptera: Ceratopogonidae) collected from animal farms in the border areas of Yunnan Province,China

Biting midges of the genus Culicoides(order Diptera, family Ceratopogonidae) are potential biological vectors for the transmission of certain arboviruses among humans, livestock, and wild animals. This study collected a total of 405 Culicoides individuals from seven animal farms located in five counties in the border areas of Yunnan Province, China, and examined the Culicoides species composition and the major arboviruses carried by the Culicoides species. The collected Culicoides were classified into seven species with variable abundances: Culicoides arakawae(5.43%, 22/405), Culicoides homotomus(1.23%, 5/405), Culicoides obsoletus(19.75%, 80/405), Culicoides orientalis(17.28%, 70/405), Culicoides oxystoma(29.38%, 119/405), Culicoides peregrinus(5.68%, 23/405), and Culicoides nipponensis(21.23%, 86/405). Among the seven species, C. oxystoma and C. nipponensis were distributed in all the five counties with abundances of 13.33–44.87% and 10.00–46.83%, respectively, suggesting that these were the dominant species of Culicoides widespread on animal farms in the border areas. PCR was used to detect major arboviruses in the collected Culicoides specimens, including bluetongue virus(BTV), Japanese encephalitis virus, Dengue virus, Zika virus, African swine fever virus, and African horse sickness virus. Among the tested viruses, only BTV serotype 1 was tested positive in C. oxystoma specimens collected from a buffalo farm. Culicoides oxystoma was the dominant species on animal farms in the sampled areas, but it has not previously been documented as positive for BTV in China. The current results thus suggest that C. oxystoma could be an important vector for BTV transmission in these border areas, which, however, needs to be confirmed by further comprehensive experiments. Overall, the present study provides the first profile of Culicoides species on animal farms in the China, Vietnam, and Myanmar border areas, establishes the prevalence of arboviruses carried by these Culicoides species, and suggests the vector potential of C. oxystoma species for the transmission of BTV.