‘石硖’龙眼大果型桂花味芽变系的RAPD分析鉴定

 用160个10 bp单个和混和随机引物对‘石硖’龙眼大果型桂花味芽变母树芽变枝及普通枝的基因组DNA进行RAPD扩增分析, 从中筛选出6个单引物( S71、S161、S303、S304、S341、S1212) 和4个双引物( Z7、Z59、Z60、Z70) 能在二者之间扩增出稳定的多态性片段。10个引物共扩增出99条片段, 其中多态性片段有S71-560、S161-813、Z70-800等13条, 占13.1% , 表明芽变枝果实大小及风味的变化与其遗传物质的改变密切相关。用两个特异引物S71、Z70对来源于同一芽变枝不同树龄的芽变嫁接单株及对照进行RAPD扩增, 所得特异片段与引物筛选中完全一致, 进一步表明芽变引起的遗传物质的改变可通过无性繁殖的方式稳定存在, 利用特异引物可对芽变嫁接单株的结果性状做早期预测。     

红阳猕猴桃全红芽变系的RAPD分析

 以10 bp 的随机引物, 通过PCR 技术对猕猴桃全红芽变系86-3 及对照品种红阳的基因组DNA进行扩增, 以探讨芽变系遗传物质的变化。以86-3 母株与红阳为材料对300 条单引物进行了筛选, 得到在两个样品间的扩增有多态性片段10 条引物( S107、S84、S157、S27、S188、AY17、AY5、R11、AV9、AM11) 。10 条引物共扩增出148 个片段, 多态性片段为20 个, 占13.5 %。两样品间相似系数为0.7619 , 遗传距离为0.1429 , 表明86-3 果肉颜色的变化与遗传物质的改变密切相关。用4 种引物S107、S84、S157、AY17 分别对芽变系单株及对照进行RAPD 扩增, 不同树龄、不同砧木的芽变单株与对照间的特异性片段同引物筛选中所得结果一致, 可用所得引物对全红芽变系嫁接株的果肉颜色进行早期预测。     

小菊花色芽变品系的SRAP鉴定

利用SRAP技术进行小菊粉色花芽变与黄色花对照的DNA多态性分析。88对引物共扩增出清晰条带1169条,分子量在147～700bp之间。芽变品种及对照遗传相似系数为0.997,遗传物质多态性为0.68%,表明芽变与对照在遗传背景上高度的一致。筛选出5对引物,获得8条可能与花色芽变基因有关的特异条带,粉色花特有条带为190、550bp(Me4-Em10)、560bp(Me5-Em1)、410bp(Me6-Em7),对照特有条带为570、557bp(Me4-Em11)及220、350bp(Me6-Em5)。这些特异条带能够在植物生长早期鉴别芽变品种与对照。推测造成小菊粉色花芽变的原因很可能是染色体结构的变异。     

SSR标记技术在甜瓜杂交种纯度检验中的应用

 以两个甜瓜杂交品种(系) ‘东方蜜1号’和‘01231’及其亲本为材料, 用SSR分子标记技术研究杂种与其双亲之间扩增谱带的多态性, 以甄别真假杂种。所试验的23对SSR引物中有8对引物分别在两个甜瓜杂交种和其双亲之间存在扩增多态性, 表现为: 多数SSR引物对自交系的扩增只出现1条带,但部分引物在某些自交系中扩增出2条带, 杂交种条带均为父母本的互补型, 很适合做杂交种纯度鉴定。用引物M6 对‘东方蜜1号’和引物M17对‘01231’各100粒单种子进行SSR鉴定, 所测纯度分别为100%和96% , 与田间纯度99.6%和96.2%非常接近, 显示出SSR标记技术在甜瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。     

沙田柚芽变品种“真龙柚”的分子标记鉴定

真龙柚是从沙田柚芽变中选育出的新品种。为了进一步确定芽变系性状的可遗传性,对沙田柚和真龙柚及其无性系子代6个样品进行了RAPD和SSR分析。结果表明,8个RAPD引物共扩增出43条稳定清晰的条带,其中5条具有多态性,多态性比率为11.6%;26对SSR引物共扩增出34条带,只有5条带具有多态性,多态性比率为14.7%;真龙柚样品与沙田柚样品的遗传距离为0.063,它们之间在DNA水平上存在遗传差异。     

红富士苹果芽变系DNA甲基化研究

以35份富士苹果(Malus×domestica Borkh.‘Fuji’)芽变材料为试材,利用甲基化敏感扩增多态性(Methylation Sensitive Amplified Polymorphism,MSAP)分析和UPGMA聚类方法,对其基因组甲基化修饰水平、变异模式以及表观遗传变异关系进行研究。结果表明:(1)不同富士系得到不同的MSAP扩增,总DNA甲基化水平27.90%～36.16%,平均32.87%,双链全甲基化为主要甲基化方式;(2)富士芽变材料绝大多数位点保持了原有甲基化模式;(3)绝大多数芽变(68.57%)检测到全部的甲基化变异模式(12种),去甲基化频率极显著高于甲基化频率(P <0.01),且CG去甲基化极显著高于CHG;(4)36份种质遗传相似系数平均值0.89(0.79～0.92),在聚类图上,富士原种分布在芽变系集中区外,新近发生的芽变系更倾向于聚在一起,着色系片红型和条红型芽变呈分散排布状态。总的来看,富士芽变的甲基化变异模式丰富,超甲基化和去甲基化相伴发生,但以去甲基化为主;‘富士’着色芽变与其最原始品种富士,以及芽变之间发生了较大表观遗传变异;片红和条红型芽变聚类未表现明显偏好性。本研究将为进一步开展富士着色系芽变机理研究提供指导,可以CG去甲基化为切入点展开深入研究。     

富士苹果AFLP体系的优化及其在鉴定早熟芽变中的应用

 以‘长富2号’苹果为材料,采用优化的AFLP技术对其早熟芽变与母株进行初步研究,筛选了64对引物,其中43对引物扩增结果理想,共产生了2,700条带。有4对引物在芽变与母株之间产生了7条差异片段,主要集中在350~800 bp之间。研究表明早熟芽变是由于遗传物质改变造成的,同时也说明利用该体系对苹果芽变进行分析和鉴定获得成功。     

川中岛桃芽变系的SRAP分析

为从分子水平上区分"川中岛"桃Prunus persica‘Kawanakajima’及其芽变,以川中岛桃及其芽变为材料,在分析其表型特征和观察物候期的基础上,采用SRAP分子标记技术,对其遗传稳定性进行了研究。结果表明,川中岛及其芽变的主要表型差异表现在成熟期提前等方面;选择25对引物进行PCR扩增,仅在2对引物中检测到3条多态性片段,说明川中岛及其芽变遗传物质没有发生较大变异,本研究中所得到的多态性片段可能与物候期的结构基因有关,或者与这些基因的表达调控有关。     

桃早熟芽变品种‘大观一号’的RAPD分析及其特异片段的克隆

利用４０个单个和混合随机引物对桃布目 早生及其早熟芽变品种‘大观一号’基因组ＤＮＡ的多态性进行ＲＡＰＤ分析,其中有一个引物能检测出两者之间ＤＮＡ的多态性,在１．１ｋｂ处‘大观一号’多了一条特异性条带,将该片段克隆到ｐＵＣ１９载体,并作了酶谱分析。     

山葡萄种质资源SSR遗传多样性分析

对360份山葡萄种质资源进行了遗传多样性分析研究。从245对引物中筛选出18对用于供试材料的SSR扩增;单条引物扩增条带为4~13条,平均9.44条;扩增产物长度介于150~1 000 bp,以200~750 bp的扩增片段居多;18对引物共扩增出170条带,其中多态性条带167条,多态性百分率为98.2%;Shannon’s多样性指数(I)为1.778051。某些品种(系)产生了特有SSR标记带,共5条,占2.95%。     

白菜抗霜霉病基因的RAPD标记

研究了与抗霜霉病基因紧密连锁的RAPD分子标记, 利用白菜抗病品种014和感病品种010杂交的F₂群体144个单株为材料, 通过人工接种鉴定, 采用高抗单株和高感单株分别构建抗、感病池, 利用BSA法筛选了560条RAPD引物, 其中引物AY12在抗感病池中扩增出多态性片段AY12₁₂₃₈ , 通过F₂单株验证后证明AY12₁₂₃₈与抗霜霉病基因紧密连锁, 其遗传距离为6.7 cM。     

大白菜和紫菜薹自交系染色体组DNA的RAPD分析

用８个随机引物（１０ｂｐ）对２个紫菜薹自交系的３个单株和４个大白菜自交系的４个单株的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，共有４０条带分离清晰、明亮，其中引条带在７个单株中表现出差异，可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标记）。４个大白菜自交系之间的平均差异条带数为１２．３，２个紫菜薹自交系之间为９．５，大白菜与紫菜薹之间平均有１５．５条带的差异。用７个引物在９３Ｗ０５－７（紫菜薹）和９３Ｗ５８－５（大白菜）之间检测出对个ＲＡＰＤ标记。从同一自交系的不同单株抽提的染色体组ＤＮＡ扩增出较一致的ＤＮＡ谱带，而不同自交系间扩增出的ＤＮＡ谱带差异很大，这表明此方法也可以象ＲＦＬＰ一样，用于大白菜和紫菜薹的分子标记。     

西瓜品种和育种材料的DNA指纹分析

利用RAPD技术对国内外26份西瓜材料进行遗传亲缘关系研究、构建每份材料的特异指纹。在720个RAPD随机引物中筛选出15个引物用于聚类分析,将供试26份材料分为6个类群1个美国生态型类群、2个中间生态型类群、1个东亚生态型类群、2个野生类群。将京欣一号杂种纯度鉴定的RAPD特异标记K14-1500和N04-600成功转化为SCAR标记,并应用于京欣一号纯度鉴定实践。     

香石竹品种的RAPD 标记

 用随机扩增多态DNA (RAPD) 技术, 选用4 个随机引物, 对87 个大花型香石竹品种总DNA进行随机扩增。4 个引物均得到了稳定的RAPD 图谱。扩增出的片段分子量在500～4300 bp 之间, 每个随机引物扩增出的条带数在8～12 条之间, 共扩增出2113 个条带, 平均每个引物扩增的DNA 条带数为915 条。根据DNA 谱带计算品种间遗传距离, 对87 个品种进行了聚类分析, 分为10 个组群, 组群间差异较大, 组群内差异较小。     

利用RAPD分析鉴别荔枝的焦核突变体

 采用随机扩增多态性DNA 方法, 对荔枝品种三月红、怀枝和它们的9 个自然焦核突变体进行了多态性分析。经500 个随机引物的筛选, 发现仅1 个引物OPL212 能在品种与突变体间扩增出多态性片段,其中2个焦核怀枝的特异片段大小为1 645 bp, 4 个焦核三月红的特异片段大小为722 bp , 初步认为这两条特异片段可能与荔枝的焦核基因相关。     

RAPD标记构建芥蓝×甘蓝分子标记连锁图

 以芥蓝C_100-12×甘蓝秋_50-Y7为杂交组合, 构建了F₂ 作图群体, 利用300 个随机引物对两亲本进行了RAPD 检测, 共筛选到150 个RAPD 引物在亲本间表现多态, 多态引物的比率为58. 3 %。共分析了52个引物产生的96 个多态性RAPD 标记在该群体中的遗传。96 个RAPD 标记中有94 个在F2 群体中的分离比符合3∶1 , 说明该群体适合于QTL 分析, 共发现两对共分离的RAPD 标记。利用该作图群体构建了甘蓝的基本遗传图谱。该图谱由9 个主要的连锁图构成, 覆盖基因总长度约为555. 7 cM。     

RAPD在枇杷品种鉴定中的应用

运用RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,即随机扩增多态性DNA)分析技术,对16个枇杷品种的基因组DNA进行RAPD分析,从几个随机引物中筛选出2个随机引物能从各个品种的基因组DNA扩增出DNA片段,在16个枇杷品种中2个引物扩增出19个DNA片段,其中3个为公共,16个为多态性或单态性DNA片段,表明不同枇杷品种基因型间存在着极为丰富的遗传多样性,扩增的DNA指纹图谱可将16个品种一一区分,为枇杷品种鉴定提供了新的方法,同时也为分子标记辅助育种提供了依据。