文心兰高效再生体系的建立

[目的]建立文心兰高效再生体系,为利用转基因技术进行品种改良提供科学依据.[方法]以文心兰柠檬绿的无菌苗叶片为材料,探讨不同植物生长调节剂配比对其原球茎诱导的影响,开展增殖、生根及移栽研究,建立其高效稳定的再生体系.[结果]影响文心兰原球茎诱导的3种植物生长调节剂主次排序为萘乙酸(NAA)>噻苯隆(TDZ)>6-苄氨基嘌呤(6-BA),在1/2MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L TDZ的诱导率最高,达48.0%.培养基中活性炭含量及碳水化合物种类对文心兰原球茎增殖的影响存在明显差异,不同活性炭含量处理间的原球茎增殖系数存在显著差异(P<0.05,下同),添加1.0 g/L活性炭较添加0.5 g/L活性炭的增殖系数显著升高,不同碳水化合物种类间的原球茎增殖系数排序为海藻糖>麦芽糖>蔗糖,最佳增殖和分化培养基为1/2MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭+20 g/L海藻糖.添加10%椰子水的文心兰幼苗生根数显著高于添加10%香蕉汁和10%苹果汁,每株平均生根量接近4.00条,即生根效果最佳的培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+10%椰子水.移栽过程中根部用水苔包裹后再移至椰糠中,保证光照、水分适宜,适当添加缓释肥,移栽成活率可达100%.[结论]利用海藻糖或麦芽糖作为碳源的文心兰原球茎增殖效果较优,生根数和生根质量优势明显;不同植物生长调节剂配比、碳源和有机物的添加对文心兰组织培养具有明显的促进效果.     

蝴蝶石斛兰高效再生体系研究

对蝴蝶石斛兰高效再生体系的研究结果表明,将蝴蝶石斛兰杂交种子接种于3/4MS BA 0.5 mg/L NAA 1.0mg/L 活性炭1.0g/L 白糖20.0g/L 琼脂5.8g/L培养基中培养60d后可得到大量原球茎;将原球茎接种于MS BA 2.0 mg/L NAA 0.5 mg/L椰子汁5% 白糖20.0 g/L 琼脂5.8g/L培养基中培养45d后大量增殖,60d后可分化出小苗;将小苗接种于1/2MS IBA 2.0 mg/L NAA 1.5 mg/L 15%～20%椰子汁 白糖20.0 g/L 琼脂5.0 g/L培养基中培养,50 d后可形成具5～6片叶、2～4条根的健壮小苗:将小苗移植于混合基质(水苔或碎砖:碎碳为4:1、蕨根和珍珠岩适量)中成活率达90%以上.     

铁皮石斛高效再生体系研究与应用

以原球茎为实验材料,对影响铁皮石斛再生体系的主要影响因素进行试验,建立铁皮石斛在生产中的高效再生体系。试验结果表明,在基本培养基MS、Fonnesbech和N6中,最适合的基本培养基为MS;原球茎最佳增殖培养基为MS＋6-BA0．75mg／L＋NAA0．2mg／L＋4．0％白糖,接种35d后原球茎增殖倍数为4．19;最佳分化培养基为Ms＋6-BA0．3mg／L＋3．0％白糖,分化率为74％。分化出的丛芽在生根培养基MS＋AC0．05％＋白糖3．0％中,28d生根率达到87％。     

蝴蝶兰再生体系优化的研究

探讨了蝴蝶兰的组织培养技术和方法。试验表明:用幼叶在散射光下培养诱导蝴蝶兰原球茎的效果最好,最适培养基为:MS+6-BA10mg/L+NAA1mg/L+CW20%+蔗糖20g/L+琼脂7g/L(pH值5.4);最适增殖培养基为:MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L+CW20%+蔗糖20g/L+琼脂7g/L(pH值5.4);最适生根长苗培养基为:1/2MS+NAA1mg/L+苹果酸30g/L+香蕉泥100g/L+活性炭1g/L+蔗糖15g/L+琼脂7g/L(pH值5.4)。     

文心兰杂种胚培养研究

以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体,采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径,探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响,建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明,适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CM 150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),培养90~100d后相对萌发率为155.6%,原球茎基本不增殖,利于叶的分化;适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1),分化率显著最高,为87.8%,添加马铃薯泥能显著提高分化率,促进芽苗的粗壮;将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.5g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)培养基上培养40d后生根率为100%,且根系发达,植株健壮;生根苗炼苗后以水苔作为基质,移栽成活率达91.7%。     

文心兰离体培养技术研究

应用植物离体培养技术研究文心兰增殖技术。结果表明:文心兰原球茎增殖的最佳培养基为MS+6-BA4mg·L~(-1)+NAA0.4mg·L~(-1)+活性炭1.5g·L~(-1)+蔗糖20.0g·L~(-1);最佳的幼苗分化培养基是1/2MS+6-BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.5mg·L~(-1)+蔗糖20.0g·L~(-1)+琼脂10.0g·L~(-1)为佳;最佳的壮苗培养基以1/2MS+NAA1.0mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+活性炭2.0 g·L~(-1)+黄瓜汁10%为佳。     

蝴蝶兰组培再生体系的建立初探

本试验通过对影响蝴蝶兰组织培养中培养基、原球茎诱导及增殖、培养条件、抑制褐变等几个关键因素进行试验比较,建立蝴蝶兰离体培养再生体系。结果表明,H培养基比MS、VW培养基更适合于蝴蝶兰的培养;叶片较根尖易诱导出原球茎;在温度24℃、光照时间为12小时/天的培养条件下利于原球茎的生长;BA2.0mg/L的浓度利于原球茎的增值;适量的活性炭可有效地抑制褐变的产生;BA0.5mg/L、NAA0.1mg/L有利于试管苗生成;NAA1.0mg/L利于试管苗瓶内生根。     

文心兰茎尖诱导丛生芽高频率植株再生

以文心兰茎尖为外植体,通过基本培养基(MS、1/2MS、1/2 N6)、植物激素(6BA、NAA)、培养条件(有机添加物、糖、培养物状态)等关键因子对文心兰丛生芽诱导、增殖、生根各培养阶段影响的试验,探讨了文心兰以丛生芽途径再生植株的关键技术.结果表明:茎尖诱导丛生芽较适培养基配方为1/2 MS+6BA 2.0 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1,诱导率为84.6%;丛生芽在MS+6BA 2.0 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1 +蔗糖30 g·L-1培养基中增殖效果较好,增殖系数为5.5;株高2.0～3.0 cm的试管苗是丛生芽增殖的最佳培养材料;生根培养基适宜配方为1/2MS+IBA0.5 mg·L-1 +苹果汁100 g·L-1 +活性碳0.5 g·L-1 +蔗糖20 g·L-1,生根率为100%.     

文心兰的组织培养与快速繁殖

取文心兰的茎尖组织作为外植体,经过2次灭菌后,接种到N6培养基上。在25℃,2000 Lx光照条件下培养2个月,即可诱导生成原球茎。将诱导生成的原球茎分割成小的组织块,经过1~2个月的继代培养后,又生成新的原球茎,如此反复切割培养,实现了原球茎的增殖。原球茎再经过生根,进而长出新叶,即可分化形成完整的植株。     

文心兰原球茎诱导条件的优化

以蜜糖文心兰不同生长期的新芽为试材,研究影响文心兰原球茎诱导的主要因素,结果表明:以半开展新芽的顶芽或侧芽为外植体,用0.1%升汞溶液灭菌9 min,待外植体成活长成第一代植株时,再进行剥茎尖处理诱导原球茎形成,采用这种方法,外植体成活率明显提高,并在最短时间内诱导形成原球茎(PLB)。适宜的PLB诱导培养基为改良1号 6-BA 2.0 mg.L-1 NAA 0.2 mg.L-1。     

影响文心兰原球茎增殖培养之因素分析

以蜜糖文心兰茎尖诱导形成的原球茎(PLB)为试材,研究了影响文心兰原球茎增殖的主要因素,结果表明:采用改良1号为基本培养基,配合6-BA2.0mg/L NAA0.2mg/L,添加香蕉泥50g/L Peptone1g/L作为有机添加剂、2%的白糖作为外源碳源,以液体振荡方式进行培养,这样的组合是原球茎增殖培养的最佳组合,能够获得最大的繁殖效率,有利于原球茎形态的保持。研究还表明,同一外植体的原球茎繁殖代数控制在9～10代即繁殖种苗数量控制在1.5万～2.0万以内,既能保证较高的增殖速度又能避免变异种苗的发生。     

大花蕙兰再生体系建立的研究

[目的]研究并建立大花蕙兰再生体系。[方法]用75%酒精和0.1%升汞进行表面灭菌,以MS为基本培养基,采用L9(33)正交试验设计进行类原球茎增殖的优选,以继代培养40 d后的增殖系数及幼苗分化率为考察指标。[结果]在大花蕙兰离体再生过程中,侧芽是最容易启动的外植体;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AC 0.1 g/L是类原球茎诱导的最佳培养基;1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L是类原球茎增殖和幼苗分化的最适宜培养基;芽分化后,待长至2~3 cm时,小心切下接入1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+GA31.0 mg/L+香蕉泥150 g/L培养基中生根壮苗效果最好。[结论]为规模化生产提供依据。     

文心兰丛生芽组培快繁研究初报

笔者主要采用正交设计安排试验,探索通过以丛生芽途径再生植株的方法进行快速繁殖。研究的主要问题集中在不同基本培养基类型、不同激素配比和用量的选择、不同添加物的选择几个方面对丛生芽增值的影响。以期筛选出最优技术参数组合,提高丛生芽增殖系数,建立文心兰最优再生体系。结果表明:影响丛生芽增殖的显著因子分别是基本培养基、细胞分裂素BA、生长素NAA。最适宜的培养基配方是MS BA3.0mg/L或4.0mg/L NAA0.4mg/L或0.6mg/L 椰乳汁150.0ml/L或番茄汁150.0ml/L Vc0.2mg/L 活性炭1.0g/L 糖30.0g/L 琼脂8.0g/L pH5.4。     

文心兰花期调控技术研究

对蓝西、蜜糖、百万金币、红猫、巴黎文心和蜘蛛文心共6个品种的文心兰采用不同的光照、温度、施肥配比和植物生长调节剂处理,发现最适于花芽萌发的光照强度为190001x,温度条件为(日温～夜温)28～17℃.施肥配比为N:P:K=10:30:20,同时满足这些条件进行催花,蜜糖、百万金币和巴黎文心的抽花率可达70%以上,蓝西、红猫分别为55%和66%.蜘蛛文心的花芽分化必须经过较低温处理,经(日温～夜温)25～15℃处理60d,抽花率达到72.3%.6-BA处理对参试文心兰的抽花率未见明显影响.     

秋水仙素对文心兰离体诱变的影响

以秋水仙素为诱变剂,结合组织培养技术,对文心兰丛生芽和原球茎进行诱变试验,并应用分子标记技术检测诱变后代的变异情况.结果表明：培养基添加秋水仙素混合培养法是文心兰丛生芽诱变的最佳途径,以添加500mg·L^-1的秋水仙素诱导10d效果最佳,植株变异率高达26.7%,变异植株类型包括植株粗壮、多叶、叶片变宽、变厚、矮化、叶片线艺等;经5～6次继代培养,部分变异株系仍保持稳定遗传性状,其中筛选出的稳定绿叶金边、金叶绿边变异株系RAPD 标记表明其在DNA 水平上发生了变异,为文心兰育种提供了新的方法和思路.     

丽格海棠再生体系建立的研究

对丽格海棠幼嫩叶片和叶柄离体培养与植株再生过程进行了研究,建立了丽格海棠的再生体系.该体系是以1 cm2左右带叶脉的幼嫩叶切片为外植体;丛生芽诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L或MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+4%芦荟原汁,接种培养30～40 d;丛生芽继代培养基为MS+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.1 mg/L,培养时间20 d;生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,培养时间30 d.该体系的建立对丽格海棠种苗快速繁殖和规模化生产将有着重要的指导意义.     

大豆再生体系的研究进展

大豆的再生体系一直是大豆遗传转化发展的主要障碍,近些年随着研究的深入,得到了很大的发展。文章对大豆遗传转化体系的各种再生体系优缺点进行了比较和综述,并对大豆再生体系的前景进行了展望。     

文心兰组织培养初步研究

以文心兰花梗为材料,采用不同激素配比、光照强度、培养基分别进行愈伤组织诱导、芽分化诱导和幼苗形成试验。结果表明,在添JJIINAA1．Omg／L＋6-BA0．2mg／L＋TDZ0．3mg／L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g／L的培养基上,愈伤组织的诱导率最高,可达70．O％;在250lx的散射光条件下,文心兰花梗愈伤诱导率达到最高;在6-BA0．4mg／L＋NAAO．2mg／L激素组合条件下,从愈伤组织分化出幼苗的形成率和商品化率可达到最佳效果;中、低无机盐浓度且全量的基本培养基较利于幼苗分化;当分化形成的幼苗株高为1-2cm时利于壮苗生根,生根苗在适宜条件下移栽,成活率可达99．O％以上。因此,采用适合的激素配比、光照强度、基本培养基对花梗进行愈伤组织诱导、分化芽和幼苗,同样可以实现文心兰的大量繁殖。