大肠杆菌O157:H7的疫病生态学研究进展及其控制对策

大肠杆菌O157：H7是一种感染剂量低,致病性强,临床上无特效治疗药物的新型肠道致病菌,在世界范围内多次爆发流行,已构成严重的公共卫生问题。对大肠杆菌O157：H7的基本生物学特征,从非生物因素（包括传染源、气候等因素）和生物因素两个方面综述了影响大肠杆菌O157：H7传播的环境因子,最后从病原菌的监测诊断技术、废弃物堆肥处理、加强食品以及饮水安全管理等方面提出了控制大肠杆菌O157：H7的对策,最终为大肠杆菌O157：H7的疫病生态学研究提供了理论基础和参考依据。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7研究进展

本文综述了近年来肠出血性大肠杆菌O157:H7的病原学、流行病学、临床诊断及预防控制等方面的研究进展。表明牛是该菌的主要贮存宿主,主要通过食源性途径传播,以患者出现出血性结肠炎、阑尾炎、食管狭窄和结肠穿孔等严重胃肠道并发症为基本特征。目前对该菌的自然携带宿主及其引起的感染尚缺乏有效的治疗手段,因此对该菌的防控就显得尤为重要。     

O157:H7型大肠杆菌在反刍动物中的研究进展

大肠杆菌正常栖居于哺乳动物的肠道,和宿主呈共生关系,但其致病菌株能通过食物链进入人体造成出血性结肠炎。在肠出血性大肠杆菌中,O157：H7型大肠杆菌因致病力强、检出困难而危害最大。反刍动物为该茵的无症状宿主,其屠宰时通过改善下水道设施和清洁体表可减小胴体受污染的机会,而屠宰前的管理和日粮方面的措施亦可控制消化道或粪中的病菌数量,但目前说法不一,需要进一步研究。     

用PCR鉴定大肠杆菌O157:H7

根据大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的编码ｅａｅ蛋白的ｅａｅ Ａ基因和大肠杆菌编码Ｈ７抗原的ｆｌｉＣ基因的核苷酸序列,合成了２对窦核苷酸引物,建立了一个检测大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的ＰＣＲ方法,对１１株已知大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＮＭ：无运动性）株和其他不同属的４２株已知肠道致病菌的检测结果表明,该方法只从大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７（ＮＭ）株的ＤＮＡ中产生预期的扩增产物,而从其他菌株的ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ不     

致病性大肠杆菌O157：H7研究概述

概述了致病性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的生物学特性、流行病学、诊断、治疗和预防等,并加以分析。揭示了大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７感染对人类的危害,以及加强对该病进行研究和防治的重要性。     

大肠杆菌O157:H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157:H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157:H7快速定量检测的实时定量PCR方法.该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍.方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157:H7,对非大肠杆菌O157:H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应.利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157:H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.     

畜禽产品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测

为了解大肠杆菌O157:H7在畜禽产品中的带菌情况,采集2个屠宰场、福州市部分超市及农贸市场上的畜禽产品(猪肉、禽肉、蛋、内脏)631份.采集的样品经改良EC新生霉素增菌肉汤增菌后,增菌液用快速检测试纸条和酶联免疫反应测试盒进行检测;菌液涂抹于山梨醇麦康凯琼脂平板和大肠杆菌O157显色培养基平板,选取可疑菌落用乳胶凝集试剂盒进行检测,结果均未检出大肠杆菌O157:H7.     

Antigen Epitope Peptides and Immunogenicity Analysis of E. coli O157: H7 Ivy Protein

To evaluate the feasibility of synthetic polypeptides O157:H7 Ivy146-157 as a vaccine antigen, a bioinformatics method was employed to analyze the secondary structures, hydrophilicity plot, flexibility plot, surface probability plot and antigenic index of the Ivy. A B-cell epitope peptide sequence was identified and synthesized. BALB/c mice were immunized with Ivy146-157, antibody titers and splenic lymphocytes proliferations in mice were tested. The results showed that the antibody titers were 1:6 400 after immunized mice three times. And the native Ivy protein of O157:H7 R14 strain was identified by polyclone antibody Ivy146-157. The MTT assay results indicated the splenic lyphocytes were increased after immunized polypeptides Ivy146-157, and had significant difference with the control group (P<0.05). These results indicated that polypeptides Ivy146-157 could induce a strong humoral and celluar immune respond, and it would provide a theory as a vaccine antigen for further researches.     

肠出血性大肠杆菌O157：H7噬菌体的分离纯化

分离纯化了抑制肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E coli,EHEC）0157：H7的噬菌体,并对其进行效价测定。将宿主菌EHEC0157：H7培养制成悬液后与污水样品37℃共培养16h,将培养物离心、过滤除菌后得到该菌的噬菌体原液。噬菌体原液采用双层琼脂平板法进行5次纯化,得到直径相同的噬菌斑。纯化后噬菌体的效价达到12×10^pfu。电镜观察表明,该噬菌体呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,该噬菌体属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。     

猪源大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白抗原表位分析及验证

利用生物信息学分析大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白FliC的二级结构及亲水性、抗原指数、柔性区域和表面可能性等指数,预测大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白FliC的潜在B细胞抗原表位,为其致病性研究提供理论基础。利用DNAStar软件Protean程序中Garnier-Robson方法和Chou-Fasman方法分析鞭毛蛋白FliC的α-螺旋、β-折叠、转角区域和卷曲区域,通过Kyte-Doolittle方法、Karplus-Schulz方法、Emini方法和Jameson-Wolf方法分析鞭毛蛋白FliC的亲水性、柔性区域、表面可能性和抗原指数。综合分析得出鞭毛蛋白FliC 63-74、236-247、338-349、460-471、542-553位氨基酸序列为潜在的B细胞优势抗原表位。化学合成法合成优势抗原表位338-349和460-471肽段,免疫BALB/c小鼠3次后,采用ELISA方法验证抗体水平。ELISA结果显示,338-349、460-471肽段具有很强的抗原性,能引起BALB/c小鼠产生高滴度的抗体。     

应用测试片快速检测食品中的大肠杆菌O157：H7

目的应用大肠杆菌O157:H7测试片快速检测食品中的大肠杆菌O157:H7。方法对大肠杆菌O157:H7测试片的各项指标及影响因素进行测试,并将其应用于食品检测。结果大肠杆菌O157:H7测试片的检测灵敏度高,其对纯菌的检测低限可达3cfu/mL;特异性较强,与鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌等21种非目的菌无交叉反应;快速,24h内可报告阴性检测结果。应用该测试片检测各种食品206份,检测结果与SN标准的符合率达到98.5%。结论应用测试片检测食品中的大肠杆菌O157:H7具有快速、方便、经济、无需昂贵设备等优点。该测试片可适应于食品中大肠杆菌O157:H7的快速初筛。     

Isolation and characterisation of Shiga toxin-producing Escherichia coli O157:H7 from calves in Argentina

Four hundred and twenty-two calves were examined for intestinal carriage of Shiga toxin-producing Escherichia coli O157:H7 using conventional plating. Two (0.5%) E. coli O157 were recovered. They were compared with 96 Argentine strains of different origin by pulsed-field gel electrophoresis, phage typing and PCR-RFLP of stx2 genes. One strain isolated from a calf, was closely related with 18 strains of clinical origin.     

沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7双重荧光PCR检测方法的研究

目的建立一种能同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的快速检验。方法根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157:H7 RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应条件,建立可同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的检验,并与miniVIDAS快速初筛方法和SN标准方法进行比较。结果本研究建立的双重荧光PCR方法可同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7,对纯菌的检测灵敏度均低于10CFU/双重荧光PCR反应体系。应用本方法检测36株标准/参考菌株,结果只有9株目的菌标准/参考菌株出现特异性扩增,其余27株非目的菌均呈阴性反应。定量检测重复性试验结果,批内和批间的变异系数均小于2%。应用本方法检测人工染菌样品,结果与miniVIDAS和SN方法检测结果一致,但检测时间比miniVIDAS快了3倍,比SN标准快了10多倍。结论本研究建立的双重荧光PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好的优点,可在8小时内完成样品沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的检验。     

牛源大肠杆菌O157:H7的分离鉴定

为调查新疆部分地区E.coli O157：H7的感染情况和菌株致病性,从新疆阿克苏、伊犁、塔城3个地区的牛场采集新鲜粪样564份,对E.coli O157：H7进行分离与鉴定。利用E.coli营养肉汤（EC肉汤）对样品进行增菌后,用山梨醇麦康凯培养基（SMAC）平板选择性培养,再经过4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷培养基（MUG）的筛选,对疑似菌株进行生化和PCR鉴定,并将分离鉴定到的菌株进行小鼠攻毒试验。结果显示,从伊犁地区采集的样品中共分离出2株E.coli O157：H7（Y166和Y226）,其检出率为0.88%;小鼠攻毒试验中,Y166和Y226试验组小鼠在48 h内全部死亡,具有一定致病性;从阿克苏、塔城所采样品中未分离到E.coli O157：H7。     

牛源大肠杆菌O157：H7的分离及毒力基因鉴定

从2个牛场采集新鲜粪便,增菌后,免疫磁珠富集,涂布筛选性培养基,挑取可疑菌落用rfbE/fliC二重PCR和血清学方法鉴定。设计毒力基因stx1、stx2、eae、hlyA和tccp相应引物,针对O157：H7对分离株进行PCR鉴定。口服攻毒链霉素处理的BALB/c小鼠明确分离株致病性。结果显示,成功分离到7株出血性大肠杆菌O157：H7,并且有1株迟缓性发酵山梨醇麦康凯培养基。毒力基因检测显示,其中6株毒力因子表型为stx1-stx2＋eae＋hlyA＋tccp＋,另有1株表现型为stx1＋stx2＋eae＋hlyA＋tccp＋,各分离株tccp基因均为阳性,但携带的重复片段数量有差异。所采集样品中肠出血性大肠杆菌O157：H7的检出率高达12%。1×1010 CFU同剂量口服接种经PBS洗涤的5株O157：H7分离株全菌,小鼠存活率有差异分别为40%,50%,60%,20%,50%,各分离株在小鼠体内排菌时间也有差异分别为攻毒后7,9,13,13,15d。