MPSG＋APMSG对山羊超排效果的研究

在山羊繁殖季节，对１７只关中奶山羊应用ＰＭＳＧ（对照组，ｎ＝９）或ＰＭＳＧ及其抗血清（ＡＰＭＳＧ）（试验组，ｎ＝８）进行了超排处理，并对超排前后血浆１７β－雌二醇（１７β－Ｅ２）和孕酮（Ｐ４）变化进行了监测。结果表明，试验组山羊发情后１２ｈ给予ＡＰＭＳＧ，可以显著改善ＰＭＳＧ的超排效果。     

不同方法提取鸡血清IgG及纯度鉴定

本文用Ｎａ_２ＳＯ_４和（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４两种盐沉淀鸡血清ｒ－球蛋白，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱和ＤＥＡＥ－３２柱进一步纯化，将获得的ＩｇＧ利用免疫电泳和聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）电泳进行纯度鉴定，结果表明：在本试验条件下，盐析方法获得的ｒ－球蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱分离获得高纯度的鸡ＩｇＧ，ＤＥＡＥ－３２柱经０．１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）洗脱，２ＭＮａＣｌ解离获得的ＩｇＧ纯度较差。     

烟叶超氧物歧化酶的研究

从烟叶中提取的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），经ＰＡＧＥ垂直板电泳后，用氮蓝四唑（ＮＢＴ）法活性染色，并经凝胶薄层扫描（λ＝５９５ｎｍ），结果显示粗酶液有６条同工酶谱带，经纯化后的酶只有一条谱带。此纯酶液置冰箱３６ｈ后，可获得长方形结晶。结晶酶液用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析（１．５ｃｍ×１００ｃｍ）和ＳＤＳ－和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为２４８３０和２８９００。用等电聚焦电泳测得该酶等电点为６．８０。该酶在ｐＨ５～９范围内活性较稳定，在７５℃保温１５ｍｉｎ活性尚保留５４％。此酶对ＫＣＮ、氯仿－乙醇不敏感，但受到ＥＤＴＡ，Ｈ_２Ｏ_２的强烈抑制，表明烟叶中分离纯化得到的ＳＯＤ为酶分子中结合Ｆｅ的Ｆｅ－ＳＯＤ。     

新霉素磷酸转移酶Ⅱ基因和β—葡萄糖苷酸酶基因的制备

采取小量快速制务粒ＤＮＡ的方法制备双元质粒载体－ｐＢＩ１０１，用限制性内切酶ＰｓｔＩ从ｐＢＩ１０１中切下新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮＰＴⅡ）基因，ＨｉｎｄⅢ和ＳａｃＩ切下β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因，ＮＰＴⅡ主ＧＵＳ基因分别经琼脂糖凝胶电泳分离，最后用二氧化硅吸附剂从琼脂糖凝胶中提纯出ＮＰＴⅡ和ＧＵＳ基因。     

口服富硒蛋对人血清抗氧化活性影响分析

本文报道通过口服富硒蛋后，人血清硒（Ｓｅ），发硒（Ｓｅ），血清谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ），过氧化脂质（ＬＰＯ）等指标的变化，以进一步探讨了Ｓｅ对人体抗氧化，清除自由基作用的影响，实验结果表明，所有观察对象服硒蛋３个月后，血清Ｓｅ，发ＳｅＧＳＨ－Ｐｘ均明显升高，血清硒平均值由原来的０．０８８μｇ／ｍｌ上升至０．１４４μｇ／ｍｌ，发硒由０．１９５ｍｇ／ｋｇ至０．５１４ｍｇ／ｋｇ，ＧＳＨ－Ｐｘ活     

人雄激素受体LBD基因融合表达产物的分离制备

利用硫氧还蛋白事例表达系统,将编码人雄激素受体（ｈＡＲ）激素结合区（ＬＢＤ）的基因（编码ｈＡＢ５８４－９１８氨基酸）插入质粒ｐＴｒｘ Ｆｕｓ中ｔｒｘＡ基因的３′端,重组后的质粒ｐＴｒｘＡＲ导入Ｅ．ｃｏｌｉ ＧＩ７２４中,经Ｔｒｐ诱导,该转化的菌株表达一融合蛋白。通过制备包含体,再利用制备型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ或Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析都可较好地纯化分离该融合表达产物（达到ＳＯＳ电泳单点纯）,     

PMSG+APMSG对山羊超排效果的研究

在山羊繁殖季节,对１７只关中奶山羊应用ＰＭＳＧ（对照组,ｎ＝９）或ＰＭＳＧ及其抗血清（ＡＰＭＳＧ）（试验组,ｎ＝８）进行了超排处理,并对超排前后血浆１７β－雌二醇（１７β－Ｅ２）和孕酮（Ｐ４）变化进行了监测。结果表明,试验组山羊发情后１２ｈ给予ＡＰＭＳＧ,可以显著改善ＰＭＳＧ的超排效果。     

胰岛素样生长因子-1的放射免疫测定方法的建立

胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）分别与两种载体蛋白——牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和卵清蛋白（ＯＡ）用戊二醛连接,经紫外分光光度仪扫描确定偶联成功。以ＩＧＦ－１－ＢＳＡ作为免疫原,皮内多点注射免疫青紫兰兔,制备ＩＧＦ－１抗体,经ＥＬＩＳＡ法测定,血清效价为１∶２０００,放免工作浓度为１∶１５０００。采用氯胺－Ｔ标记ＩＧＦ－１,用酸醇抽提法处理样品,去除ＩＧＦ－１结合蛋白。所建立的ＩＧＦ－１放免标准曲线,其最小检测量为０．０６ｎｇ／ｍＬ,批内误差为４．８％,批间误差为８．２％（ｎ＝１０）。     

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析

嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的液体培养物上清在５６℃或与乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）作用，其胞外蛋白酶（ＥＣＰａｓｅ）的活力有不同程度的下降，将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加Ａｈ－Ｊ－１上清作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ３７℃原位消化，染色，显示上清中存在至少５种分子量不同的蛋白酶，ＡｈＪ－１株的培养上清经硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２０     

有机硒对山羊血硒水平与谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

用陕西省紫阳县双安产富硒玉米饲喂山羊引起中毒后，测定了全血硒含量，谷胱甘肽过氧化物酶活性（ＧＳＨ－Ｐｘ）红细胞（ＲＢＣ）血红蛋白（Ｈｂ）结果表明，全血硒含量变化与临床症状相致，可作为硒中毒病的诊断指标；血硒含量与ＲＢＣ，Ｈｂ呈弱负相关，与ＧＳＨ－Ｐｘ活性有试验前３０ｄ呈正相关，试验４０ｄ后呈负相关，ＧＳＨ－Ｐｘ活性变化与临床症状出现时间不一致，仅可作为山羊硒中毒病诊断的参考指标。     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％     

人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ　Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ　Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。     

鸡新城疫和减蛋综合症异源二联油乳剂灭活疫苗的研制

将鸭源鸡新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ１０株和鸡减蛋综合症（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ２株同时接种于同一鸭胚内复制，增殖 ９６ ｈ收取尿囊液，用甲醛灭活后加白油佐剂制成 ＮＤ和 ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗。简化了生产工艺、降低了制苗成本。经试用表明，该疫苗可有效地预防ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生。     

日本血吸虫体γ—氨基丁酸的检测

用高压液相色谱技术（ＨＰＬＣ）和同位素示踪技术确认日本血吸虫体内含有谷氨酸（Ｇｌｕ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）和琥珀酸（ＳＡ）。ＧＡＢＡ的含量为１２．７０±３．２７μｇ／ｇ（以虫湿重计）。虫体具有摄取外源性ＧＡＢＡ的能力。虫体不能将＾３Ｈ－Ｇｌｕ转化为＾３Ｈ－ＧＡＢＡ，也不能将＾３Ｈ－ＧＡＢＡ转化为＾３Ｈ－ＳＡ。初步表明：虫体内ＧＡＢＡ的合成和降解与哺乳动物体内由Ｇｌｕ→ＧＡＢＡ→ＳＡ的代谢过程不     

日本血吸虫体γ－氨基丁酸的检测

用高压液相色谱技术（ＨＰＬＣ）和同位素示踪技术确认日本血吸虫体内含有谷氨酸（Ｇｌｕ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）和琥珀酸（ＳＡ）。ＧＡＢＡ的含量为１２．７０±３．２７μｇ／ｇ（以虫湿重计）。虫体具有摄取外源性ＧＡＢＡ的能力。虫体不能将３Ｈ－ＧＩＡ转化为３Ｈ－ＧＡＢＡ，也不能将３Ｈ－ＧＡＢＡ转化为３Ｈ－ＳＡ。初步表明：虫体内ＧＡＢＡ的合成和降解与哺乳动物体内由Ｇｌｕ→ＧＡＢＡ→ＳＡ的代谢过程不同。     

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较

利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到     

低硒雏鸡口服亚硒酸钠机体抗氧化系统动态变化的研究

本试验对低硒雏鸡口服亚硒酸钠后血清、肝、肾、心、脾、胰脏中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性及脂质氢过氧化物（ＬＰＯ）含量的动态变化进行了研究。结果表明,组织中ＧＳＨ－Ｐｘ活性均早于血清出现升高,尤以胰脏上升最早;１９２ｈ时后,肾、脾ＧＳＨ－Ｐｘ活性出现第二次升高,至７６８ｈ时仍呈上升趋势。ＬＰＯ含量变化与ＧＳＨ－Ｐｘ呈相反趋势。     

免疫途径对雏鸡分泌型免疫球白A细胞分布的影响

通过饮水，滴鼻和肌肉注射用鸡新城疫弱毒苗免疫鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白－辣根过氧化酶（ＳＰＡ－ＨＲＰ）和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组化染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）和呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）中的ＳＩｇＡ细胞的生成和分布。结果表明：滴鼻和饮水免疫组雏鸡ＧＡＬＴ和ＲＡＬＴ中产生ＳＩｇＡ细胞较早，较多，并于首免后２４ｄ和３０ｄ达到最高峰，肌肉注射组雏鸡ＳＩｇＡ细胞在各相应部位仅零     

蛋白激酶C抑制剂对CNE—2Z细胞周期的影响

目的：蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡时细胞周期的观察。方法：ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），终浓度分别为１×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞２４ｈ，用流式细胞仪（ＲＣＭ）分析。结果：诱导组细胞周期与对照组比较，ＳＴ使细胞Ｇ１和Ｓ期明显减少及Ｇ２期明显增加，（Ｐ〈０．０１），ＳＳ使     

两种有胃真骨鱼胃肠胰系统中内分泌细胞的鉴别与定位

使用４种哺乳动物抗血清；胰高血糖素（Ｇｌｕ），胃泌素（Ｇａｓ），生长抑素（Ｓｏｍ）５－羟色胺（５－ＨＴ），采用过氧化物酶标记的链霉亲和素（Ｓ－Ｐ法）免疫细胞化学技术，对尼罗非鲫和短盖巨脂鲤（白鲳）的胃肠胰（ＧＥＰ）内分泌系统进行了研究。结果表明：２种鱼的消化道和胰岛都不同程度地存在ＡＰＵＤ细胞的分布。除了Ｇｌｕ在消化道中为阴性外，其余３种抗体在２种鱼的消化道中均有阳性特异性反应，其中５－ＨＴ细胞最