番茄脯氨酸脱氢酶基因的克隆与RNAi植物表达载体的构建

[目的]克隆了脯氨酸脱氢酶ProDH基因的全长cDNA,构建了ProDH基因的RNA干扰植物表达载体,并转化到农杆菌.[方法]以“耐运2000番茄”幼苗为试材,根据GenBan中公布的番茄脯氨酸脱氢酶ProDH基因的序列信息设计了一对特异性引物,克隆了该基因的全长cDNA,分析基因序列选择正反向片段并扩增,并通过酶切、连接的方法构建了ProDH基因的RNA干扰植物表达载体PBI121-PDHi利用冻融法将表达载体转化到农杆菌EHA105中.[结果]所克隆到的ProDH基因片段长2 001 bp,其中CDS为1 491 bp,编码380个氨基酸.测序结果与公布序列同源性100％,因此可以用来构建干扰载体;通过酶切与测序鉴定,证明表达载体构建成功.[结论]经特异性引物扩增检测,证明表达载体已转入农杆菌,为进一步的研究该基因奠定了基础.     

RNAi和GroEL介导的双价转基因番茄对TYLCV的抗性

本研究将已构建的SUC2-GroEL和pBI121-AC1-AC2植物表达载体共转化番茄,共获得19株卡那霉素抗性再生植株。经过PCR和RT-PCR检测,初步获得转SUC2-GroEL载体的阳性植株5株,转pBI121-AC1-AC2载体的阳性植株3株以及转SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2双载体的阳性植株2株。利用TYLCV侵染性克隆农杆菌注射接种法对T0代转基因阳性植株进行抗性鉴定,获得抗TYLCV的转基因植株7株。对T0代未扩出病毒条带的T1代植株进行抗性鉴定,结果发现转SUC2-GroEL、pBI121-AC1-AC2、SUC2-GroEL/pBI121-AC1-AC2不同载体的株系植株中平均带毒率依次是35%、25%和15%,推断转双基因的植株的抗病能力优于转单个基因植株的抗病能力。     

野生番茄单片段渐渗系抗旱性研究

以野生番茄单片段渐渗系为供试材料,采用盆栽控制水分的方法进行干旱胁迫和正常浇水两种处理测定和分析了与植物抗旱性密切相关的两项生物学性状和四项生理学性状(即株高、叶面积;脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性糖和可溶性蛋白质含量).结果表明:除亲本M82和IL2-2、IL2-4、IL3-2、IL4-4、IL5-2、IL7-3、IL9-3、IL12-1外,其余37份材料均呈现出了不同程度的抗旱表现,说明这37份材料所携带的渐渗片段可能与抗旱性有一定关系.     

野生番茄抗叶霉病生理指标的研究

欲获野生番茄抗叶霉病生理指标的重要数据资料 ,揭示其抗病机理。以多毛番茄、秘鲁番茄、小花番茄、多腺番茄醋栗番茄 5个野生番茄和 L 4 0 2栽培番茄为试材 ,设置接种处理和喷水作为对照。它们在接种叶霉菌生理小种1.2 .3后 ,其叶片的过氧化物酶 (POD)、多酚氧化酶 (PPO)、相对电导率、以及叶片木质素的变化情况。结果表明 ,野生番茄叶片中 POD、PPO活性、相对电导率和叶片木质素含量在接种后均有不同程度的增加基本上与抗病呈正相关 ,但各指标变化幅度和时间依各野生番茄又略有不同     

LeHT1、Permease基因在抗、感番茄黄化曲叶病番茄中的表达特征

选用分别含有抗番茄黄化曲叶病(TYLCD)基因Ty-1、Ty-2和Ty-3的3种抗病番茄材料(分别简称TY-1、TY-2和TY-3)和感病番茄品种(苏粉9号),利用携带TYLCV的烟粉虱对所选番茄材料幼苗接种病毒,从核酸水平检测抗病品系和感病品种的病毒侵入时间差异,并检测接种病毒前后己糖转运基因(LeHT1)和透性蛋白基因(Permease)在转录水平上的表达量变化。结果显示,感病品种与抗病品系TY-2在接种第2 d便检测到病毒,抗病品系TY-1和TY-3分别在3 d、15 d检测到病毒,说明病毒侵入时间早晚与番茄的抗病性没有直接关系。感病品种和抗病品系TY-1分别在接种后7 d、20 d有明显的发病症状,抗病品系TY-2和TY-3整个生育期均无发病症状。感病品种接种前LeHT1无明表达,接种后随时间增加表达量先上升后下降;抗病品系TY-2、TY-3在接种前有较高的表达量,接种后随时间增加呈下降趋势,抗病品系TY-1在接种后5 d时降至最低,随后稍有增加。接种后,Per-mease基因在感病品种中表达量显著提高,7 d后略有降低;抗病品系TY-1的Permease基因表达量先降低,15 d时表达量回升;抗病品系TY-2的Permease基因在接种后的表达量增加;抗病品系在TY-3中,Permease基因在接种前后表达水平变化不大,直至15 d时略有升高。接种前、后LeHT1和Permease基因在不同抗病材料和感病材料中具有不同的表达特征,表明不同抗源可能含有不同的抗病信号通路和抗病机制。     

枝条浸泡法鉴定番茄抗青枯病研究

采用枝条浸泡菌液法鉴定番茄品种对青枯病的抗性,并对影响鉴定结果的因素进行了研究。结果表明,菌液浓度以1×106～1×107cfu/mL、苗龄以38～48d、浸泡时间以6～12d为宜。该方法可以有效地鉴定番茄品种的抗性,有利于抗病基因鉴定时的取材保证,对抗性植株的快速鉴定及其幼苗的早期快速鉴定具有重要意义。     

番茄对南方根结线虫抗性遗传规律的研究

以南方根结线虫的抗病亲本P2(0897-2-1-2-3-1-2-1)、感病亲本P1(9905-1-2-1-1-1-1-1)及 F1(P1×P2),F2(F1自交后代),BC1P1(F1×P1)和BC1P2(F1 × P2)为试材,以南方根结线虫二龄幼虫为虫源,进行苗期二龄幼虫人工接种鉴定和病土盘栽自然发病鉴定,研究番茄南方根结线虫病的遗传规律.结果表明,人工接种鉴定的植株在接种15 d左右,感病植株开始发病,接种45 d后感病植株已充分发病,表现为植株矮小,叶片变小、变黄,部分植株下部叶片黄枯,有的枯死;病土盘栽自然发病鉴定的植株较苗期接种鉴定的植株迟12 d左右发病,病症相似.卡方检测表明,F1、F2、BC1P1和BC1P2群体中抗病植株和感病植株分别符合1∶0、3∶1、1∶1和1∶0基因模型,符合孟德尔遗传规律.认为该试验所采用的抗性材料P2对番茄南方根结线虫的抗性是受一对显性基因控制的,为该材料的利用奠定基础,也为抗南方根结线虫番茄品种的选育提供参考.     

不同种质番茄材料抗番茄黄化曲叶病毒病特性研究

以不同种质番茄为实验材料,利用苗期农杆菌接种法接种番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus, TYLCV),采用实时定量PCR和生理生化方法评价对TYLCV的抗性,统计分析不同抗性番茄材料不同发病时期的表型特征、带毒率、抗氧化酶活性、总酚与类黄酮含量及抗性基因表达量的变化情况,并分析各抗性指标之间的关系。结果表明,番茄材料带毒率为100%;853没有任何感病症状,802与803感病最为严重;抗氧化酶活性、总酚与类黄酮含量及抗性基因表达量在各时期均较高的有867、857、853,817与842次之,803最低。SOD活性、CAT活性、APX活性、总酚含量、类黄酮含量、Ty-1基因、Ty-2和Ty-3基因的表达量相互之间均呈极显著正相关(总酚与Ty-1之间为显著正相关,P<0.01)。番茄植株感染TYLCV后,Ty-1的表达相比于其他抗病基因具有延迟性。综合分析筛选出867、857、853三种抗病性较强的材料,植株体内的抗性基因、抗氧化酶、总酚与类黄酮之间呈正相关,共同提高了番茄植株对TYLCV的抗性。     

番茄叶霉菌及其抗病育种的研究进展

番茄叶霉病是一种世界性病害,文章综述了近年来国内外番茄抗叶霉病的研究进展。     

番茄品种抗性与青枯菌和土壤微生物的关系

对青枯菌（Ralstonia solanacearum）在番茄（Lyoopersicon esculentum Mill）抗、感品种根际土壤和根系组织中的数量变化，以及青枯菌与番茄相互作用后，抗、感品种根际微生物数量的变化进行了研究．结果表明，根际土壤中青枯菌数量与番茄品种抗性之间的关系不显著（P〉0．05），而根组织内青枯菌数量与番茄品种抗性密切相关；土壤接种青枯菌后第4d，抗病品种根际土壤真菌、细菌和放线菌数量均高于感病品种，并达到最高峰，第4d后微生物数量下降，并低于感病品种，而不接种青枯菌的对照组，抗病品种根际微生物的数量几乎都高于感病品种．     

表皮蛋白基因参与锈赤扁谷盗磷化氢抗性形成

【目的】作为昆虫表皮重要的结构物质,表皮蛋白（cuticle protein,CP）在昆虫对农药表皮穿透抗性形成过程中承担重要作用。锈赤扁谷盗（Cryptolestes ferrugineus）磷化氢抗性问题日益突出,论文旨在揭示表皮蛋白基因在该害虫磷化氢抗性形成过程中的作用。【方法】基于联合国粮农组织（FAO）推荐的生物测定方法解析5个地理种群（张家港、湘阴、淮安、怀化和太仓种群)锈赤扁谷盗磷化氢敏感性差异。首先通过锈赤扁谷盗转录组数据鉴定获得4个表皮蛋白基因,进而构建系统发育树,并对相应氨基酸序列进行分析。利用基因定量技术（RT-qPCR）解析上述4个锈赤扁谷盗表皮蛋白基因时空（不同发育阶段和成虫不同组织）和不同磷化氢抗性水平下的表达模式,以及表皮蛋白基因对磷化氢胁迫响应的表达模式。使用RNAi(RNA interference)技术对特定的表皮蛋白基因（CfRR2-1）进行沉默,并研究CfRR2-1被有效沉默后锈赤扁谷盗磷化氢敏感性变化情况。【结果】磷化氢敏感性测定结果显示,不同地理种群锈赤扁谷盗磷化氢敏感性水平差异显著,药剂抗性倍数（RR）范围为7.2—1 906.8。系统发育...     

青枯无致病力菌株诱导番茄抗青枯病的生化机制

用紫外诱变法获得的青枯无致病力菌株诱导番茄,植株产生了对青枯病的抗性反应,该菌株对致病菌没有直接的抑制作用,且对番茄不能致病.番茄经无致病力菌株处理后,体内与抗病反应相关的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)及多酚氧化酶(PPO)活性显著增强;酚类物质和木质素含量也显著提高;病程相关蛋白(PRP)含量也提高.这表明青枯无致病力菌株产生诱导抗性的机制可能是植物本身的抗病代谢过程被激活了.     

番茄新品种特宝1号苗期对青枯病的抗性测定

对从荷兰引进的番茄新品种特宝1号进行番茄青枯病（Ralstonia solanacearum）抗性测定试验,结果表明,该品种表现出较好的抗性.苗期人工接种后,30d才出现症状,比抗病品种抗青1号的发病时间推迟15d,发病率低且病害发展缓慢,校正发病率差异达到极显著水平.该品种还具有早熟、生长势强、不易早衰、丰产性好和特别耐贮运等特点.     

Transgenic technologies in cassava for nutritional improvement and viral disease resistance: a key strategy for food security in Africa

As a major staple food source in Africa and other tropical developing countries, cassava (Manihot esculenta) provides basic sustenance for many subsistence farmers. However, cassava roots mainly accumulate starch with limited contribution of other nutrients such as proteins and vitamins. Also, two viral diseases, cassava mosaic disease (CMD) and cassava brown streak disease (CBSD), cause great losses in cassava production in sub-Saharan Africa and the Indian sub-continent. Genetic engineering provides promising approaches to improve nutritional value and increase resistance to viral diseases in cassava. This report presents several successful case studies on engineering protein content by overexpression of nutritious storage proteins and improving cassava resistance to viral diseases by RNA interference. Perspectives on the sustainable acquisition of new knowledge and development of biotechnology to solve these bottlenecks are discussed.     

内生砖红镰刀菌对番茄生长和抗病的影响

为探究内生真菌砖红镰刀菌在番茄生长及抗病过程中的作用,使用1×107CFU/mL砖红镰刀菌芽生孢子悬液浸根处理发芽的番茄,结果显示:处理50 d后番茄株高较对照组增加了1.15倍;叶绿素a、叶绿素b含量较对照组分别增加1.16倍和1.47倍;根系生物量较对照增加1.38倍;砖红镰刀菌处理组对番茄枯萎病的病情指数(45.16%)较对照组(74.15%)下降;浸根处理20 d时植物生长素合成关键基因SlYUC5、水杨酸合成关键基因SlICS1表达水平与未处理对照组相比无显著差异;处理30及40 d后,SlYUC5表达水平较对照组相比表达显著上升,SlICS1表达水平较对照组显著降低;茉莉酸合成途径关键基因SlLOXD在20 d时表达水平较对照组显著下调38.73%(P<0.01),而在30 d时其表达量与对照组无显著差异,40 d后,其表达量较对照组显著上调(2.33倍,P<0.01);试验组中植物抗性相关蛋白基因SlPR1a在20、30和40 d的表达量被显著上调了7.89倍、5.77倍和1.8倍(P<0.01)。进一步用GFP标记菌株进行荧光定殖观察并通过qPCR法计...     

耐贮运加工番茄新品种长红的选育

长红是利用美国亨氏公司品种分离选育的N-444,与分离选育的含有番茄耐贮突变体基因alc的N-448配制的晚熟耐贮运加工番茄一代杂交种,该品种晚熟,生长势强,果实硬度高、耐贮运,抗病性好,总产量比对照87-5增产22.2;.可作为晚熟直播品种栽培.     

高抗青枯病大果型番茄杂交一代新品种'浙杂204'的选育

培育抗病品种是防治青枯病最经济、最有效的手段.本研究选育出高抗青枯病大果型杂交一代大红果番茄品种--'浙杂204'.其母本'T9175'系从亚洲蔬菜研究发展中心的高抗青枯病材料'CL1466'的后代中经7代单株选择而成,父本'T9185'是从欧洲引进的'T9502'和亚洲蔬菜研究发展中心引进材料'T9132'杂交后经8代株系选择而成.'浙杂204'主要适合长江流域和华南地区青枯病高发地区种植.其品质优良,贮运性佳,高抗青枯病和枯萎病,抗番茄花叶病毒(ToMV)病,中抗叶霉病,座果能力强,平均(6穗果)可达316.37 kg·hm-2.     

M蛋白基因shRNA抑制PRRSV在Marc145细胞中复制的研究

 【目的】通过靶向PRRSV基因组中的M基因的siRNA来抑制PRRSV在Marc145细胞中的复制。【方法】构建4个能转录小发夹RNA（shRNA）的质粒,将其与靶蛋白表达质粒共转染HEK293A细胞,观察荧光或进行半定量PCR;或将其转染Marc145细胞,感染PRRSV后进行IFA、TCID50和实时PCR检测。【结果】shRNA表达质粒对M融合蛋白表达的抑制率约为50％,使M真核质粒表达蛋白的mRNA水平降低54%～64%,表达的shRNA在PRRSV感染后48 h使病毒的TCID50和mRNA水平均降低到1/10～1/100倍,间接免疫荧光结果表明shRNA表达质粒转染孔的荧光细胞数显著减少。【结论】shRNA表达质粒特异性的抑制了靶蛋白M和PRRSV的复制,靶向PRRSV基因组M基因不同区域的siRNA可以作为控制该病毒传播的候选策略。     

针对人蛋白激酶CK2α亚基的shRNA表达质粒的构建与鉴定

目的:构建针对人蛋白激酶CK 2α亚基的shRNA表达质粒。方法:以mU 6pro为载体,化学合成shRNA表达模板,并定向克隆到载体的U 6启动子下游,琼脂糖凝胶电泳法筛选阳性克隆,基因测序法检测插入模板序列的正确性。结果:获得了正确的重组质粒,插入的转录模板序列完全正确。结论:成功构建了针对人蛋白激酶CK 2α亚基的RNA i体系。     

4个番茄品种及其亲本指纹图谱的构建

采用改良的CTAB法提取番茄4个品种及7份品种亲本的基因组DNA,通过AFLP-PCR分子标记方法进行DNA指纹分析,构建亲本及品种的指纹图谱.从20对引物中筛选出9对重复性好,多态性丰富的AFLP引物来构建番茄指纹图谱,7份亲本材料扩增的多态性位点从10～27条不等,平均每份材料17.56条,多态性位点比例为41.2...