新生牛血中Cu/Zn-SOD的提纯及肝素、壳聚糖的逐层自组装包裹

试验旨在通过对超氧化物歧化酶（super oxide dismutase, SOD）改性,提高其稳定性。本试验采用了热变性提取方法从新生牛血中提取Cu/Zn-SOD,采用逐层自组装技术,以肝素与壳聚糖为材料,对从新生牛血中分离提纯的SOD进行物理包裹试验,并对包裹后Cu/Zn-SOD的稳定性进行研究。结果显示,在耐热稳定性上,包裹的SOD相对酶活性比天然SOD提高了3.3倍;在耐酸碱性方面,在pH分别为3.0、11.0的条件下,包裹的SOD相对酶活性较天然SOD提高了2.0倍;在抗胰蛋白酶水解的能力上,包裹的SOD相对酶活性较天然SOD提高了2.7倍。采用肝素、壳聚糖制成的外壳对SOD进行物理修饰可得到较好的效果,且其具有较强的机械强度、生物相容性较好,外表面的壳聚糖有助于帮助跨细胞膜转运,可应用于口服剂型SOD的开发。     

苯酚/氯仿抽提法提取牛血与鸡血DNA部分条件的比较研究

为了探讨苯酚/氯仿抽提法中加入血液和红细胞裂解液(PBS)的量对DNA提取效果的影响以及找到针对牛血和鸡血最合适的DNA提取条件,试验以安格斯牛和静原鸡为研究对象,采用苯酚/氯仿抽提法提取血液基因组DNA。结果表明:在试验第1步加入200μL鸡血1次,用1 500μL PBS重复裂解2次,可以得到高质量鸡的基因组DNA。当加入鸡血的量过大时,提取的DNA浓度过高且不纯,蛋白质等外源核酸的污染较严重。在试验第1步加入500μL牛血1次,用1 500μL PBS裂解,重复2次,可以得到高质量牛的基因组DNA。苯酚/氯仿抽提法可以节省时间,还可以避免血液的浪费。     

犬布氏杆菌Cu/Zn-SOD基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为检测犬布氏杆菌(Brucella canis)重组Cu/Zn-SOD蛋白的抗原性,本研究通过PCR方法扩增B.canis的Cu/Zn-SOD基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-SOD.将该质粒转化受体菌E.coli BL21 (DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳分析,...     

牛血发酵菌株发酵条件的正交设计优化研究

利用平板划线法,从农村个体屠宰场土壤中分离获得菌株A2,通过单因素及正交试验,对影响菌株发酵能力的接种量、反应时间、反应温度进行优化。正交试验结果表明菌株A2发酵牛血的最佳条件是接种量为3%、发酵温度为41℃、发酵时间为30h。     

海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及NOS cDNA克隆及序列分析

通过对海兰褐鸡法氏囊中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS cDNA克隆及序列分析,了解海兰褐鸡法氏囊中主要氧化-抗氧化酶的分布及其基因组成,为研究传染性法氏囊病及与法氏囊相关禽病的氧化-抗氧化发病机制奠定基础.结果显示,Cu/Zn-SOD、Mn-SODcDNA序列分别出现2个碱基的突变,iNOS cDNA序列与原始序列同源性为100％.海兰褐鸡法氏囊中存在Cu/Zn-SOD、Mn-SOD及iNOS 3种与氧化-抗氧化相关酶,并且Cu/Zn-SOD、Mn-SOD cDNA序列具有新特征,iNOS在海兰褐鸡体内是稳定存在的;海兰褐鸡可能与康奈尔K系鸡具有相似的遗传背景.     

啤酒酵母多糖提取工艺条件的研究

试验研究了从啤酒酵母中提取胞壁多糖的提取工艺。提取工艺路线为:酵母溶解→冻融→超声波破碎→碱溶→中和→沉淀→洗涤→烘干。通过正交试验对酵母破壁和碱溶条件进行优化,寻求最佳的工艺条件,多糖得率为19.4%,用苯酚-硫酸法测定多糖的含量为51.9%。     

响应面分析法优化菌株B10发酵牛血条件的研究

本文以氨基酸态氮含量为指标,选取影响菌株B10发酵牛血能力的接种量、发酵温度、发酵时间3个因素进行二次回归正交组合设计试验,利用响应面法对其发酵条件进行优化研究,利用MATLAB7.0软件对发酵后牛血氨基酸态氮含量的二次多项数学模型解逆矩阵分析。结果表明:在发酵时间为53h、温度为40℃、接种量为3%的条件下,发酵后牛血氨基酸含量最高,最大预测值为45.75mg/100g,实测值为45.15mg/100g,两者基本相符。     

荷花蜂花粉多糖提取条件的研究

采用温浸法,在单因素试验基础上设计4因素3水平正交试验,确定荷花蜂花粉多糖最佳提取工艺条件,采用苯酚-硫酸法检测多糖含量。结果表明:4因素对荷花蜂花粉多糖提取的影响顺序为提取次数>提取温度>料液比>提取时间;荷花蜂花粉多糖提取的最优条件为1:8的料液比,50℃水浴条件下,浸提3h。考虑到经济效益和成本因素,经两次提取后荷花蜂花粉多糖的提取率就可以达到99%,故最佳提取次数为两次。     

柑桔皮果胶的提取条件研究

以柑桔皮为原料，采用酸法萃取、乙醇沉淀工艺提取果酸。最佳条件为水料比１０：１，ｐＨ值１．５，萃取温度８５℃，萃取时间９０ｍｉｎ。果胶质量达到食用果胶的国家标准。     

薰衣草精油提取最佳条件的研究

研究旨在探讨采用超声波强化水蒸气蒸馏法提取薰衣草精油的最佳提取条件。通过单因素试验和二次回归正交试验,以超声强化时间、超声功率、液固比、提取时间作为主要影响因素,确定超声强化水蒸气蒸馏提取薰衣草精油的最佳提取工艺条件。结果表明:提取薰衣草精油的最佳工艺条件为超声强化时间17.6 min、超声功率171.0 W、液固比16.6:1、提取时间1.51 h。在该条件下,薰衣草精油得率的期望值是0.761%。通过验证试验,5个重复试验的薰衣草精油的得率为0.751%、0.761%、0.771%、0.773%、0.786%,平均值为0.768%。验证试验的平均值与理论的期望值(0.761%)非常接近,表明所选的工艺条件可行。     

毕赤酵母表达铜锌超氧化物歧化酶中试工艺研究

正交设计优化铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母在摇瓶及30L发酵罐的诱导表达条件,用两步层析法纯化表达的目的蛋白,在不同温度下进行原液稳定性试验。用考马斯亮蓝检测蛋白含量,活性检测试剂盒检测目的蛋白活性。纯化后原液参照中华人民共和国药典三部2005版进行检测,用SDS-PAGE、HPLC检测纯度,免疫印迹法检测rhCu,Zn-SOD特异性,等点聚焦测定该酶等电点,地高辛法检测残余DNA含量,酶联免疫法测定残余蛋白含量。结果显示正交试验的大罐高密度发酵最适条件比摇瓶的最适条所获得的目的蛋白活性高8倍,纯化后,HPLC纯度为99.7%,原液比活性大于6.0×103 U/mg,各项检测指标达到生物制品检定标准。该酶在45、65、85、100℃的半衰期分别为240、120、30、15。具有良好的酶稳定性。本研究建立了发酵、纯化的中试工艺,获得高表达、高纯度及高比活的铜锌超氧化物歧化酶,为规模化生产奠定了基础。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu/Zn-SOD cDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu/Zn-SOD cDNA序列的7个物种:人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu/Zn-SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

Separation and Purification of Cu/Zn-SOD from Newborn Bovine Blood and Prepatation of HEP and CHI Using Layer-by-layer Self-assembly Technique

In order to improve the stability of super oxide dismutase (SOD) with some modification,we used thermal denaturation extraction method to extract Cu/Zn-SOD from newborn bovine blood,and used layer-by-layer self-assembly technique,heparin and chitosan as material to modificate the SOD which separated and purified from newborn bovine blood.The results showed that compared with the natural SOD,the modified SOD increased 3.3 times in the thermal stability;In acid and alkaline,under the condition of pH 3.0 and pH 11.0,the acid-base resistance property of the modified SOD raised 2.0 times;On the antitrypsin hydrolysis ability,the relative enzyme activity of modified SOD had increased 2.7 times than natural SOD.The modified SOD with shell outside made of heparin and chitosan by physical modification could get better effect,and had the strong mechanical strength,better biocompatible,outer surface of chitosan was helpful to cross the cell membrane transport,and it could be applied to the development of oral dosage forms of SOD.     

消化酶及胎牛血清对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响

试验研究了不同浓度及组合消化酶对奶牛乳腺组织分离的影响以及不同FBS浓度培养基对奶牛乳腺上皮细胞纯化和生长的影响。试验结果表明,0.25%胰酶＋0.20%Ⅱ胶原酶对组织块分离效果最好,乳腺上皮细胞生长最多,5%与10%浓度FBS对奶牛乳腺上皮细胞纯化效果最好,5%与10%浓度FBS对细胞生长没有明显的差异（P〉0.05...     

消化酶及胎牛血清对奶牛乳腺上皮细胞培养的影响

试验研究了不同浓度及组合消化酶对奶牛乳腺组织分离的影响以及不同FBS浓度培养基对奶牛乳腺上皮细胞纯化和生长的影响。试验结果表明,0.25%胰酶+0.20%Ⅱ胶原酶对组织块分离效果最好,乳腺上皮细胞生长最多,5%与10%浓度FBS对奶牛乳腺上皮细胞纯化效果最好,5%与10%浓度FBS对细胞生长没有明显的差异(P>0.05),但明显高于其他处理组(P<0.01)。     

用血清酸滴定法对牛进行早期妊娠诊断的研究

采用血清酸滴定法对配种后16 d～45 d的1 008头不同品种的母牛进行了早期妊娠诊断研究,检出妊娠牛764头,未妊娠牛244头;与直肠检查结果对比,妊娠符合率为90.31%(690/764),未孕符合率为93.03%(227/244),总符合率为90.97%(917/1008).对3种不同品种牛试验结果经3组间及两组间卡方检验统计分析,无显著差异(P＞0.05).表明血清酸滴定法用于牛的早孕诊断具有诊断时间早、方法简便、结果准确等优点,宜于在基层推广.