精子中H-Y抗原的蛋白和mRNA表达背离

目的:进一步验证成熟精子中是否存在H-Y抗原的mRNA,并探讨精子mRNA的保留机制。方法:采集健康男性志愿者的精液,通过上游法纯化精子,使用多克隆抗H-Y抗原的IgY抗体和FITC标记的兔抗鸡IgG对精子进行免疫组化和流式细胞仪检测,观察成熟Y精子膜表面是否带有H-Y抗原。提取成熟精子总RNA,用RT-PCR的方法观察精子mRNA中是否含有H-Y抗原的mRNA。结果:免疫组化实验显示可在许多精子的头部与尾部的交界处非常清晰地看到H-Y抗原的荧光;流式细胞仪检测显示49.86%精子为H-Y抗原阳性。RT-PCR结果显示,未扩增到H-Y抗原的mRNA特异性条带。结论:成熟精子表面存在有H-Y抗原,但未检测到H-Y抗原的mRNA。     

IgY抗体在免疫检测中的应用进展

卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of yolk,IgY)是鸟类、爬行动物和两栖类动物体内的主要抗体,与哺乳动物IgG功能类似,一般从被抗原免疫的母鸡卵黄中提取。与IgG相比,IgY具有许多突出的优点,在制备针对多种抗原的多克隆抗体、免疫检测、人类和动物疾病的预防治疗等方面均得到广泛应用。对IgY在免疫检测方面的应用进展进行了综述。     

鸡蛋黄抗体(IgY)的分离与研究

以鸡白痢沙门氏菌灭活苗,鸡新城疫(NDV)油剂灭活苗,传染性法氏囊炎(IBDV)油剂灭活苗,分别免疫接种健康母鸡.用异丙醇——丙酮法,分离提取高免鸡鸡蛋的蛋黄抗体(IgY)·经凝集试验,血球凝集抑制试验(HI)和琼脂扩散试验(AGP)检测蛋黄抗体(IgY)的抗体滴度,结果分别均高于血清的抗体滴度.另外,还以聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)监测比较了蛋黄抗体(IgY),血清和蛋黄液,结果表明,IgY的抗体球蛋白纯度均高于血清和蛋黄液.     

抗猪瘟IgY的制备及临床应用初报

应用合理的免疫程序,用猪瘟抗原免疫蛋鸡,并以水稀释法、聚乙二醇萃取法结合透析对所产蛋的卵黄部分进行处理,成功地提取到抗猪瘟IgY(SF-IgY),获得率为6.83mg/mL。该制剂纯度为45.14％,能中和1000MID猪瘟兔化种毒,用于紧急治疗猪瘟后,临床应用效果确实。     

兔H-Y抗血清的制备和验证

本研究选取1.5~2.0 kg体重的新西兰兔2窝,提取同窝公兔睾丸H-Y抗原并测定蛋白浓度。采取2种不同的免疫方法,制备兔H-Y抗血清,经Western-blot技术检测兔睾丸H-Y抗原组分,应用ELISA法检测抗血清效价,其中5份抗血清中只有0830#产生较高的效价,达1:100以上。本试验结果为兔睾丸抗原组分的测定和兔H-Y抗血清的效价测定提供了一种新的方法。     

抗嗜水气单胞菌IgY的提纯及体外抑菌效果研究

以灭活嗜水气单胞菌(AS 1.927菌株)为抗原免疫蛋鸡,采用水稀释法粗提蛋黄液IgY和硫酸铵法纯化粗提物中IgY,研究其在上清液中的抗体提取率及其体外抑菌效果.研究表明,pH 5.0、10×水稀释法粗提后上清液中IgY抗体提取率为78.34%,33%(v/v)饱和硫酸铵法纯化后上清液中抗体提取率为64.1%,SDS-PAGE电泳显示纯化后的IgY纯度较高.pH 5.0、10×水稀释法粗提后的特异性IgY浓度达1.0 mg/mL时,嗜水气单胞菌在18 h内无生长.结果提示,用水稀释法和硫酸铵法提取蛋黄中的抗嗜水气单胞菌特异性IgY,具有简便、快捷、高效的特点,所制备的IgY活性较高,可用于嗜水气单胞菌感染引起的水生动物疾病预防和控制.     

用H-Y抗血清对大鼠胚胎进行性别鉴定的研究

利用高度近交系大鼠的新生仔睾丸作抗原对处女大鼠进行免疫,制得 H-Y 抗血清.将同系大鼠的桑椹胚置于含有抗血清的培养液中体外培养5～6小时.结果表明其中部分胚胎能继续发育至囊胚(46.7%);另一部分胚胎停滞发育(53.3%),但解除抗体后重新恢复发育能力(34%).经胚胎移植后证明,前者约有79%发育为雌鼠,而后者约86%发育为雄鼠.由此可见,H-Y 抗血清对雄性胚胎具有特异性的抑制作用.用同样方法免疫远交系大鼠,所得抗血清不能对雄性胚胎产生抑制作用.     

乙型脑炎病毒SA1444-2株E蛋白C端片段的克隆及原核表达

[目的]为进一步研制检测乙脑抗体试剂盒奠定了基础.[方法]以本实验室已构建的重组质粒pET-E(E为乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白)为模板,利用PCR扩增乙型脑炎病毒E蛋白基因3'端部分片段,克隆入原核表达栽体pET-32a( ),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析表达产物.[结果]所表达的融合蛋白分子量约为38KD,表达产物以水溶形式存在,37℃,诱导4 h的诱导培养条件最佳,表达量约占菌体总蛋白的20%.表达产物经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白.ELISA检测表明,表达的蛋白能与猪乙脑病毒抗体血清发生特异性反应,具有很好的抗原性.[结论]基因工程表达的JEV E蛋白有望成为重要的实验室诊断抗原.     

乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白C端片段的克隆及原核表达

[目的]为进一步研制检测乙脑抗体试剂盒奠定了基础。[方法]以本实验室已构建的重组质粒pET-E(E为乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白)为模板,利用PCR扩增乙型脑炎病毒E蛋白基因3′端部分片段,克隆入原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析表达产物。[结果]所表达的融合蛋白分子量约为38KD,表达产物以水溶形式存在,37℃,诱导4 h的诱导培养条件最佳,表达量约占茵体总蛋白的20?。表达产物经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。ELISA检测表明,表达的蛋白能与猪乙脑病毒抗体血清发生特异性反应,具有很好的抗原性。[结论]基因工程表达的JEV E蛋白有望成为重要的实验室诊断抗原。     

五龙鹅IgY、IgM分子特性研究

为丰富和完善鹅Ig分子特性的研究,以层析、离子交换等方法分离纯化五龙鹅的免疫球蛋白及重链、轻链、Fab段、Fc段,进行鹅Ig的多态性、分子质量、氨基酸组成、稳定性等分子特性研究。结果表明:五龙鹅IgY存在几个亚类,总分子质量为166ku,重链约为60ku,轻链约为23.5ku;鹅IgM的重链分子质量分别为51.72、48.30和44.09ku,轻链20.30ku,所以,总分子质量约为660~740ku;五龙鹅Ig重链的分子质量均小于鸡、鸭;IgY的Fab段分子质量为48.67ku,Fc段为68.62ku。IgY的重链和轻链中碱性氨基酸摩尔分数小于酸性氨基酸,为酸性蛋白质,而IgM则为碱性蛋白质;IgY中Cys摩尔分数为2.25%,IgM为3.26%;鹅IgY的重链和轻链中Pro的摩尔分数相差较大,分别为7.69%和0.10%;鹅IgY在pH3.5~11.5的范围内十分稳定,IgM在pH4.0~10.5的范围内稳定,IgM的酸碱稳定性小于IgY,但在pH3.5~4.5时活性增加5%~8%;研究表明五龙鹅IgY热稳定性较差,热变性反应级数为1.2。     

卵黄免疫球蛋白配基亲和纯化碱性磷酸酶

 以卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin　yolk,IgY)为配基,对小牛肠组织来源的碱性磷酸酶进行免疫亲和纯化。采用1.5mol·L-1的NaCl进行洗脱,可使酶的纯化倍数达到64倍,活力回收率达到90%。IgY抗体对碱性磷酸酶亲和力的测定结果显示固有亲和力和相对亲和力分别为6.275×10-7　mol·L-1和5.0 μg·ml-1。     

卵黄抗体添加剂对断奶仔猪肠道微生物区系的影响

在25日龄断奶仔猪日粮中添加卵黄抗体（IgY）粉,检测其对断奶仔猪各肠段pH值及肠道内容物微生物区系的影响。结果表明,与空白对照组相比,IgY可以显著降低断奶仔猪空肠和回肠的pH值,有利于乳酸杆菌的生长,抑制大肠杆菌的生长。并且IgY对大肠杆菌的抑制作用与抗生素接近。