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多重RT-PCR检测猪口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和猪水疱性口炎病毒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
建立了一种同时检测猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪水泡病病毒(SVDV)和猪水疱性口炎病毒(VSV)三种病原体的多重RT-PCR方法。参照文献报道的基因序列,设计合成了三对特异性引物;PCR扩增条件进行优化后,用这三对引物对同一样品中的FMDV、SVDV、VSVRNA模板进行扩增,结果同时得到了三条特异性条带,大小与试验设计相符:FMDV(208bp)、SVDV(862bp)、VSV(638bp),且对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核酸扩增结果为阴性;三种病毒RNA模板检出的最小量均为10fg。试验证明,此方法经济、快速、敏感、特异,可用于FMDV、SVDV和VSV这三种猪水泡性疾病的鉴别诊断及流行病学调查。 相似文献
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为了研究规模猪场病毒性疾病早期、快速诊断方法,试验采用多重PCR方法对来自宁夏灵武地区某种猪场的临床血清进行了猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)的病原诊断。结果表明:在哺乳仔猪、保育猪、母猪及种公猪中均检测出PRV、PCV-2阳性个体,PCV-2的阳性率达87.5%,PRV的阳性率为12.5%,但未检测出PPV。临床样品主要为PCV-2和PRV混合感染,阳性率达45.3%,其中1头主要采精的长白种猪携带有PCV-2和PRV。因此,推断该场仔猪发病可能与种公猪的带毒有关,建议该场仔猪全群免疫,同时对感染与带毒种猪群进行净化。 相似文献
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为了快速、灵敏、准确的鉴定猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcine parvoviurs,PPV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2),从而为猪病的预防以及诊断提供依据,根据GenBank上发表的核苷酸序列分别设计了三对能特异性扩增PRV、PPV、PCV2的引物,并成功构建了重组质粒作为阳性对照,经过条件优化后建立了检测PRV、PPV、PCV2的三重PCR检测方法,对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保质期进行研究,并进行了初步的临床验证.试验证明,该检测试剂盒能同时扩增出猪伪狂犬病毒219bp的核苷酸片段,猪圆环病毒2型410bp的核苷酸片段以及猪细小病毒71 1bp的核苷酸片段,并通过在PCR缓冲液中添加5%的DMSO和1M的甜菜碱,减少了非特异性扩增,提高了检测试剂盒的灵敏度.该诊断试剂盒为流行病学的研究以及疾病的诊断提供了简单快速的选择. 相似文献
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猪圆环病毒分子生物学研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
猪圆环病毒(porc ine c ircov irus,PCV)是迄今发现的最小的动物病毒,对养猪业造成的损失日趋严重。作者对猪圆环病毒的基因组、功能基因、功能蛋白、基于分子生物学的诊断方法、研究热点等方面进行了详细综述,为圆环病毒的研究和防治提供了科学的理论依据。 相似文献
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猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均是能引起仔猪腹泻的冠状病毒,通过临床症状和剖检很难鉴别诊断,建立同时检测且能够鉴别诊断这3种疾病的快速检测方法对于临床诊断具有重要的意义。参照GenBank中登录的PDCoV,NPEDV M和TGEV N基因的基因序列,利用Primer5.0设计合成3对能扩增特异性目的片段的引物,构建重组质粒,并对RT-PCR反应条件进行优化,建立了检测PDCoV,PEDV和TGEV的多重RT-PCR诊断方法,并对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性分析。利用该方法对河南176份临床样品进行检测,并与普通RT-PCR检测方法对该检测方法进行比较分析。结果表明,所建立的三重RT-PCR方法对PDCoV的最低检测量是3.14×103拷贝/μL;PEDV的最低检测量是3.88×104拷贝/μL和TGEV的最低检测量是3.68×104拷贝/μL。所建立的方法具有较好的特异性,对猪博卡病毒(PboV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟(CSFV)和猪圆环病毒(PCV)等猪常见病毒的扩增结果均为阴性。应用所建立的三重RT-PCR方法对176份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV,PDCoV和TGEV检测,并将检测结果和单重RT-PCR检测方法比较,结果显示,多重RT-PCR检测结果与常规单一RT-PCR的结果符合率均为100%。综上,本试验建立了能同时检测PDCoV,PEDV和TGEV的三重RT-PCR方法,为临床上这3种疫病的快速检测和流行病学调查奠定了基础。 相似文献
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根据GenBank中已发表的猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型 (porcine circovirus type 2,PCV2)基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV 的VP2、PRV的 gD、和PCV2的ORF2基因为各病毒的诊断靶序列,设计特异性引物,在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了3种病毒的多重PCR技术,可同时扩增PPV 313 bp、 PRV 217 bp和PCV2 447 bp的特异性片段。用多重PCR技术与单项PCR技术对比检测试验证明两者的符合率为100%,表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可同时鉴别诊断这3种病毒。从10个发病猪场和门诊病例的病猪采集的211份样品,用建立的多重PCR检测方法,检出PPV阳性42份,阳性率为19.91%;PRV阳性26份,阳性率为12.32%;PCV2阳性56份,阳性率为26.54%;2种以上病毒混合感染25份,混合感染阳性率为11.85%。检测结果表明,山西省猪群已感染这3种疫病。 相似文献
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河南省部分地区猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒和猪瘟病毒核酸检测分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解河南省部分地区猪群中猪伪狂犬病(PR)、猪圆环病毒病(PCVD)和猪瘟(CSF)3种伴有神经症状的免疫抑制性疫病的感染情况,本研究应用RT-PCR、PCR方法对近期采集的豫西地区84份伴有神经症状的病料进行猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒检测分析。结果显示,PRV、PCV-2和CSFV的阳性率分别为75%、60.71%和32.14%;总单感率为32.14%,各自单感率分别为25.00%、3.57%、3.57%;总混感率为60.71%,PRV/PCV-2、PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV 4种混感型的混感率分别为32.14%、3.57%、10.71%和14.29%。结果表明,河南省部分地区存在这3种伴有神经症状的猪免疫缺陷性疫病的流行,包括单感流行和混感流行;单感中以PRV流行为主,混感中以PRV/PCV-2这种混感型流行为主;混感复杂,具有PRV/PCV-2、PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV四种混感型;总混感率比总单感率高,而PRV的单感率比PRV/CSFV、PCV-2/CSFV和PRV/PCV-2/CSFV 3种混感型的混感率却都要高。以上结果为该地区猪群神经症状疫病的诊断和防控积累了资料。 相似文献
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目前的猪病由原来的单一病原转变为多因子协同作用,给我国的养猪业造成很大的损失,严重影响养猪业的发展.猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪蓝耳病病毒混合感染成为许多猪场面对的难题,而了解病毒的致病机理对于疾病有着积极的指导作用,从而为开展猪病防制工作提供帮助。 相似文献
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本文对猪圆环病毒的病原特性、流行病学、临床症状、疾病诊断及防治措施等方面的研究进行了综述,重点介绍了该病的临床症状和诊断技术,并对猪圆环病毒今后研究的方向提出了展望. 相似文献