PCR技术在检测隐孢子虫中的应用

隐孢子虫可造成多种动物的腹泻及其它症状，给畜牧业造成了巨大损失。作者就PCR在隐孢子虫的病原鉴别、活性确定、环境检测、药物筛选等方面的应用作一综述。     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究

应用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）-限制片段长度多态性 （restriction fragment length polymorphism, RFLP）方法对微小隐孢子虫（C．parvum）、安氏隐孢子虫（C．andersoni）和火鸡隐孢子虫（C．meleagrides）的鉴别进行了研究。结果显示C．parvum BOCC2、C．andesoni BOCC2和C．meleagrides CHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp，扩增产物分别经VspI酶切后形成3种不同的RFLP图谱，根据RFLP图谱可鉴别C．parvum、C．andersoni和C．meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。     

贝氏隐孢子虫单克隆抗体的研究

作者采用杂交瘤技术获得两株分泌贝氏隐孢子虫特异性抗体的杂交瘤细胞－２Ｈ１１和２Ｃ７，经３～４次克隆化后，阳性率均达１００％。染色体数分别平均为９４和９５。经分析，两株单克隆抗体识别抗原分子区的相关位点，为今后进行贝氏隐孢子虫的诊断及免疫学研究奠定了基础。     

猪隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病是一种全球性的人兽共患病 ,猪隐孢子虫病世界各地均有报道 ,严重威胁着人类和动物的健康。本文对猪隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和生活史、流行病学特点、诊断、防治等方面目前研究状况进行了综述 ,为猪隐孢子虫病的有效防制提供参考     

隐孢子虫病流行病学研究进展

隐孢子虫病是一种呈世界性分布的人畜共患原虫病 ,该病给畜牧业生产造成严重的经济损失 ,是艾滋病患者的主要致死因素之一。本文就隐孢子虫的感染情况、感染来源、传播途径、年龄、性别及季节性等进行综述 ,并讨论了尚未解决的问题。     

牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

从牛隐孢子虫病的病原分类、内生发育史、体液免疫和细胞免疫、流行病学特点、诊断、防治等几方面阐述了牛隐孢子虫和隐孢子虫病的研究现状，总结了前人对牛隐孢子虫3个有效种的生物学特性研究的结果，为进一步了解牛隐孢子虫病的流行病学及有效防制该病提供了参考。     

隐孢子虫病

隐孢子虫病黄永康，王寿昆综述陈天铎审校（隔建省龙岩农校，福建农学院动物科学系）隐孢子虫病是隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｎｍ）引起的一种人畜共患寄生虫病。１９０７牛Ｔｙｚｚｅｒｘ首次从无症状的实验小鼠胃粘膜中检出隐孢子虫时，并未引起足够的重视。...     

隐孢子虫病检测技术研究进展

隐孢子虫是动物和人腹泻的重要病原,也是人类艾滋病患者的主要致死因素之一.当前,对隐孢子虫病的研究已成为全球寄生虫学研究领域的热点由,于迄今尚无治疗隐孢子虫病感染的特效药物,因此,快速、简便、准确地发现隐孢子虫是控制该病的关键.随着分子生物学技术的应用,隐孢子虫病的检测技术得到了极大的发展.笔者就近年来隐孢子虫病检测技术进行了简要综述.     

隐孢子虫研究进展

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种以腹泻为特征的人畜共患寄生原虫病。本病具有广泛的宿主类型，可以寄生于哺乳类、鸟类、爬行类及两栖类等150种以上的人和动物。对于免疫系统正在发育的幼儿和幼畜以及免疫缺陷病人，隐孢子虫入侵的机会较大，免疫系统发育正常的人和动物也能感染该病，但机会小一些。自Tyzzer(1907)在鼠胃腺中发现隐孢子虫以来，一直以为隐孢子虫感染并不常见，是一种条件性病原。直到1976年Nime才报道了第一例人的隐孢子虫病，从此以后，有关此病的报道越来越多，到了1986年，世界卫生组织(WHO)更将本病列为人的爱滋病(AIDS)怀疑指标之一。     

隐孢子虫病研究概况

<正> 隐孢子虫病(cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(cryptosporidium)引起的一种人畜共患原虫病。自Tyzzer(1907)在小白鼠体内首先发现隐孢子虫以来,有关学者对隐孢子虫病的病原学、流行病学、临床病理学、诊断学、药物治疗及预防等方面做了大量研究,取得显著进展。本文就人畜隐孢子虫病的研究概况,作一综述。     

水源中隐孢子虫种类和基因型鉴定技术研究进展

目前，隐孢子虫有效种有20个。隐孢子虫的分子流行病学研究表明，隐孢子虫具有宿主特异性。目前，感染人的隐孢子虫种和基因型有C．horninis、C.parvum、C．meleagridis、C.felis、C.canis、C.nuris、C．suis genotype和C．cervine genotype等。水源性隐孢子虫暴发，具有重要的公共卫生意义。分子鉴定技术已广泛应用于检测水中隐孢子虫，水中检测到的隐孢子虫有9个。通过分析其分子组成特性表明，成年牛可能是水污染的主要根源，除了居民用水和农业污染外，鹿、麝鼠、田鼠、鸟和其它野生动物可能也与水污染有关。隐孢子虫分子基因型鉴定工具可能为水源保护性研究提供一个更有力的溯源追踪工具。     

隐孢子虫致病机理的研究进展

本文主要从病理组织、营养代谢、免疫应答等方面对隐孢子虫致病机理进行综述。     

奶牛隐孢子虫Nested PCR—RFLP方法的建立及初步应用

为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT141,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫（Cryptos poridium parvum,C．p）和安氏隐孢子虫（Cryptosporidium andersoni,C．an）卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800bp和500bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊／g粪便;对于由内引物扩增出的500bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT141酶切,酶切后的片段分别为416bp和92bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切。用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19．02％和3．5％,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是Cp和C．an,进口奶牛感染的主要是C．p。研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的NestedPCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种。     

火鸡隐孢子虫在鹌鹑体内发育史的研究

分离自鹌鹑的火鸡隐孢子虫经口感染２日龄鹌鹑，潜在期为３ｄ，开放期为４－１８ｄ。它在鹌鹑体内发育史过程为：卵巢经口接种后，于十二指肠，空肠，回肠肠腔中子孢子脱囊，至接种后６ｈ全部子孢子脱囊完毕。接种后６ｈ在小肠中出现滋养体。接种后１２ｈ在小肠中出现内含８个裂殖子的裂殖体及裂殖子，接种后４８ｈ滋养体和裂殖体开始出现于直肠。接种后５４ｈ，在小肠，直扬中出现含有１６个子弹形小配子的小配子体。小配子与大配子     

合肥市犬隐孢子虫感染情况初步调查

目的了解合肥市犬隐孢子虫的感染情况。方法在合肥市随机采集不同年龄、性别与饲养条件的犬粪样69份,采用金胺-酚改良抗酸染色法检测粪样隐孢子虫感染情况,并根据卵囊大小和形态,进行虫种鉴定。结果犬隐孢子虫感染率为28.99%。对68个隐孢子虫卵囊进行观察和测量,椭圆形卵囊大小平均为6.20μm×4.34μm,卵囊形状指数平均为1.44,初步鉴定为鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）;近圆形卵囊,大小平均为4.69μm×4.58μm,卵囊形状指数平均为1.125,初步鉴定为微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）。结论犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;饲养管理条件差的犬隐孢子虫感染率高;而隐孢子虫感染率与性别没有关系。     

园养东北虎等猫科动物隐孢子虫感染情况的调查

为掌握东北虎等多种猫科动物隐孢子虫的感染状况，本试验采集216份东北虎等多种猫科动物粪样，离心水洗除去重铬酸钾后，应用Sheather’s蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法进行检查。Sheather’s蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法镜检结果显示，东北虎等多种猫科动物隐孢子虫的平均阳性率分别1．39％（3／216）和5．09％（11／216）。可见，目前园养东北虎等养猫科动物隐孢子虫感染率仍维持在较低水平。     

野生动物隐孢子虫的种类和基因型

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是一种全球性的人兽共患原虫病,具有广泛的宿主范围,可以感染鸟类、哺乳类、鱼类、爬行类、两栖类以及人在内的240多种动物。野生动物隐孢子虫做为人隐孢子虫病感染的重要传播来源,对其进行生物学研究具有重要的公共卫生意义。本文分别叙述了野生动物隐孢子虫的种类及基因型,为进一步研究野生动物的隐孢子虫病提供了有效的参考。     

微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。     

贝氏隐孢子虫内生发育虫体的扫描电镜观察

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中 ,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形 ,平均直径 1 3μm ;typeⅠ裂殖体 ,平均直径 2 4μm～ 3 0 μm ,内含 8个裂殖子 ,呈逆时针旋涡状或呈桔瓣状排列 ;typeⅡ裂殖体内含 4个裂殖子 ,两种类型裂殖体的裂殖子之间填充着颗粒状残体并包围着一个大的球形残体。成熟裂殖子逸出的方式分为 4种类型。裂殖子大小为 3 0× 0 6 μm ,呈香蕉形。大配子体呈球形直径 3 3μm～ 4 2 μm ,小配子体直径为 3μm～ 3 6 μm。小配子呈子弹状 ,大小为 1 2 μm× 0 3μm ,并观察到成熟小配子的释放方式。带虫空泡可分为无球形残体和有球形残体两类 ,根据观察结果推测带虫空泡基部的梳状结构不具备营养器官的功能 ,营养器官应为带虫空泡的底部     

贝氏隐孢子虫对丝毛乌骨鸡的致病性试验

２ 日龄丝毛乌骨鸡经口接种贝氏隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｂａｉｌｅｙｉ）卵囊２×１０６ 个／只,潜隐期４ｄ,排卵囊开放期１８ｄ,排卵囊高峰期为感染后（ Ｐ Ｉ Ｄ）７～１４ｄ。呼吸道症状出现于 Ｐ Ｉ Ｄ１０,死亡率为１３３％ （２／１５）。扫描电镜观察发现气管纤毛脱落,寄生有各阶段发育虫体及杆形细菌和渗出的红细胞;法氏囊也寄生有大量虫体,粘膜上皮细胞肥大,微绒毛脱落, Ｐ Ｉ Ｄ２０ 在法氏囊粘膜表面见有许多虫体逸出后留下的带虫空泡。试验证明丝毛乌骨鸡为贝氏隐孢子虫的新宿主。使用扫描电镜系统观察了贝氏隐孢子虫感染引起的组织形态学病理变化。