无核葡萄胚挽救技术研究

[目的]研究无核葡萄胚挽救过程中的一些主要影响因素,为今后开展无核葡萄胚挽救育种提供参考。[方法]以6个无核葡萄杂交及自交组合未成熟胚珠为试材,研究了接种时期、培养基及激素浓度对无核葡萄胚挽救效果的影响。[结果]各组合适宜的胚珠接种时期为：火星无核×无核白鸡心在花后40d,金星无核×康能无核在花后55d,优无核×布朗无核在花后45d;采用ER为基本培养基更有利于胚珠的发育和萌发;不同品种的胚珠对培养基中IBA浓度要求不同,幼胚发育程度较高,败育时期较晚的胚珠,适合较低的IBA浓度,胚发育程度较低,败育较早的胚珠则需要较高的IBA浓度。[结论]接种时期、培养基种类和培养条件对无核葡萄胚挽救的成功都非常重要,且各条件的确立要视具体品种而定。     

南方地区无核葡萄胚挽救及其取样时间研究

[目的]探讨无核葡萄品种离体培养的培养条件,并确定最佳取样时期.[方法]选取南方无核葡萄品种中5个自然授粉胚珠和4个杂交组合的胚珠为试材,通过形态学观察确定取样时间,探索适宜南方无核葡萄品种的胚挽救程序.[结果]适宜火焰无核×寒香蜜、碧香无核、火焰无核、奥迪亚无核等的胚挽救程序为授粉后30 ～40 d剥取胚珠接种在ER培养基,暗培养90d,取胚转入WPM培养基上成苗.[结论]该研究可为提高幼胚离体发育和萌发成苗率提供科学依据.     

无核葡萄胚挽救影响因素研究

正通常情况下,根据葡萄果实内是否有种子而将其分为有核葡萄和无核葡萄。在葡萄生长发育过程中的开花结实阶段,从雌配子体发育到有性生殖过程完成的任何一个阶段出现障碍,就会形成无核果。不同阶段出现障碍形成各种类型的无核葡萄。本试验研究了不同取样时期、培养基类型及激素浓度等因素对无核葡萄自交胚挽救后代的影响,优化昆诺无核和雷明无核胚挽救体系,试验结果为无核葡萄的育种研究提供了技术支持。     

种子败育型无核葡萄胚发育及败育的细胞学研究

以种子败育型葡萄火星无核、康能无核为试材,系统研究其胚发育及败育的细胞学进程,分析胚乳败育与胚败育的关系。结果表明,种子败育型无核葡萄与有核葡萄的胚均能发育到球形胚阶段,但不同品种发育到该阶段的时间不同,火星无核在花后28~37 d处于球形胚阶段,康能无核在花后31~40 d,有核葡萄白香蕉的球形胚阶段是花后28~40 d,随后无核葡萄的胚逐渐败育,而有核葡萄的胚历经心形胚和鱼雷形胚阶段,最后发育成熟。种子败育型葡萄胚乳败育均早于胚败育,可能是胚败育的直接原因。火星无核、康能无核胚挽救适宜取材时期分别在花后34 d和花后40 d。     

无核葡萄胚挽救苗的抗病性鉴定

【目的】对无核葡萄胚挽救苗进行抗白粉病、黑痘病和霜霉病鉴定,筛选抗病无核葡萄杂种单株。【方法】2008-2009年,采用田间自然鉴定方法,对欧洲葡萄无核品种×中国野生葡萄、无核品种×有核品种、无核品种×无核品种、无核品种自交共10个组合获得的219株胚挽救苗进行抗病性鉴定。【结果】在219株无核葡萄胚挽救苗中,筛选出抗白粉病且抗黑痘病和霜霉病的杂种4株[05-1-2(爱莫无核×北醇),03-2-14、03-2-19、03-2-24(火焰无核×黑龙江实生)],抗白粉病且抗黑痘病的杂种2株,抗白粉病且抗霜霉病的杂种9株,抗黑痘病且抗霜霉病的杂种73株,仅抗白粉病的杂种3株,仅抗黑痘病的杂种32株,仅抗霜霉病的杂种29株。【结论】获得的抗病无核葡萄杂种单株可为进一步选育新品系奠定基础。     

无核葡萄胚挽救苗的驯化及移栽技术

胚挽救技术是无核葡萄种质创新的重要途径之一,胚挽救苗从实验室移栽至大田的最终成活率直接影响无核葡萄的育种效率。试验以种子败育型(stenospermocarpy)无核葡萄品种为试材,从葡萄种类、胚挽救苗质量、移栽方法、基质种类和组成4个方面对葡萄胚挽救苗移栽成活率的影响进行了系统研究。结果表明,不同无核葡萄品种移栽成活率存在显著差异;选取健壮苗(根数≥3个,根长≥10cm,叶数≥6个,叶色深绿,茎高≥10cm,茎秆粗壮)进行炼苗移栽,可以显著提高无核葡萄胚挽救苗的成活率;蘸取浓度为200mg·kg-1的生根粉(ABT10)30s+培养室炼苗15d+温室炼苗15d的移栽方式较好;珍珠岩∶草炭∶园土=4∶1∶1作为移栽基质较好。初步探索出一套简单易行、实用高效的葡萄胚挽救苗优化配套移栽技术。     

提高无核葡萄胚挽救中幼胚成苗率的研究

 【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚的成苗均有影响;在二倍体无核葡萄作母本的杂交组合中,以二倍体无核葡萄作父本比以四倍体有核葡萄作父本更有利于胚的成苗。在3种不同配方的培养基中,适宜于无核葡萄离体幼胚发育和成苗的培养基是MM4。ER添加4 mmol?L-1脯氨酸培养基最有利于无核葡萄胚的发育。低温处理3 d对红宝石无核×森田尼无核和红宝石无核×黑奥林胚的成苗促进最大。【结论】无核葡萄胚挽救的适宜培养基是ER+4 mmol?L-1脯氨酸或MM4培养基,低温处理幼果3 d能有效提高二倍体无核葡萄×二倍体无核葡萄胚挽救中胚的成苗率。     

葡萄胚挽救技术优化及无核和玫瑰香味新种质创制

【目的】研究葡萄玫瑰香味性状,为无核香味葡萄育种提供重要的材料基础,探究亲本基因型、胚发育形态以及生长调节剂对胚萌发的影响,进一步优化无核×玫瑰香味组合胚挽救体系,并结合分子标记技术初步对杂交后代进行无核性状鉴定。【方法】利用顶空固相微萃取结合气质联用方法,对10个玫瑰香味和无玫瑰香味葡萄品种的果实香味物质含量进行测定,从中筛选出浓香型品种作为亲本;结合课题组前期研究结果,以6个玫瑰香味品种为父本,5个欧洲无核品种为母本,配置13个杂交组合;无菌条件下,从幼果中剥离杂种胚珠,离体黑暗培养8周,随后将发育的杂种幼胚接种于添加不同激素浓度和比例的胚萌发培养基中,通过优化胚萌发培养基配方,提高幼胚萌发率和成苗率。幼苗经温室炼苗后,将成活的F1代移栽至大田。利用分子标记早期辅助选择具有无核性状的F1代杂种株系。【结果】萜烯类物质是玫瑰香味的主要呈香物质,8个玫瑰香味品种均能检测到萜烯类物质,其总含量为0.0246—1.3824。筛选出‘亚历山大’‘阳光玫瑰’‘玫瑰香’等玫瑰香味物质含量相对较高的品种,可作为杂交亲本,用于创制兼具无核和玫瑰香味新种质;利用胚挽救技术从13个杂交组合获得杂种株系1...     

无核葡萄新品种沪培2号

沪培2号葡萄是以无核品种杨格尔为母本,紫珍香为父本杂交,杂交胚经离体胚挽救而育成的无核葡萄新品种。果穗圆锥形,平均穗质量350克,果粒为长椭圆形或鸡心形，平均粒质量5.3克，果皮深紫红色，果肉中等硬，无核，可溶性固形物含量15％～17％，总酸0．65％，风味浓郁，上海地区7月中下旬果实完全成熟。该品种树势强旺，成花容易，早果丰产，适应性强。2007年11月通过上海市农作物品种审定。     

几种无核葡萄品种的胚珠和胚的败育进程

无核葡萄胚败育是一个极其复杂的生物学过程[1]。Ledbetter(1989)等曾描述过大孢子体发育及受精和合子胚的第一次分裂过程,但未谈到合子胚的发育和败育问题[2]。张莉等(1991)曾报道过几种无核葡萄胚珠和胚发育的特点[3]。但胚珠败育与胚的败育是否存在相关性和同步性,败育的相关基因是否是同一基因,这些问题尚不清楚。为此,我们以江苏地区近年引进的5个无核葡萄品种为试验材料,进一步观察其胚珠和胚的发育和败育进程。1　材料与方法供试品种5个:森田尼无核、克瑞森无核、奥迪亚无核、幻想无核和优无核,均为种子败育型无核品种。5个品种…     

土壤干旱对葡萄果实黄烷醇类多酚时空积累的影响

[目的]阐明土壤干旱对葡萄果实发育过程中黄烷醇类多酚时空积累的影响。[方法]以酿酒葡萄赤霞珠(Vitis vinifera L.cv.‘Cabernet Sauvignon’)果实为试材,采用避雨棚和断根沟措施,人工模拟土壤干旱,初步研究了土壤干旱对葡萄果实中黄烷醇类多酚时空积累的作用。[结果]土壤干旱并未改变葡萄果实黄烷醇类多酚的空间积累模式,果梗含量最高,种子、果皮次之,果肉最低。在果实发育过程中,土壤干旱明显促进果肉和种子中黄烷醇类多酚积累,但对果梗和果皮作用不明显。[结论]土壤干旱并不改变葡萄果实发育过程中黄烷醇类多酚的时空积累规律,但能促进果实,特别是果肉和种子中黄烷醇类多酚的积累。     

红地球和无核白鸡心葡萄对碳酸钠的耐性鉴定

[目的]研究红地球和无核白鸡心葡萄对不同浓度Na2CO3的耐性。[方法]以红地球和无核白鸡心葡萄扦插苗为材料,在盆栽条件下进行盐分胁迫处理。[结果]与对照相比,Na2CO3胁迫下,葡萄叶绿素含量、电解质渗透率、过氧化物酶活性都有不同程度的变化。[结论]经比较,无核白鸡心葡萄对Na2CO3的耐性较强,而红地球葡萄对Na2CO3的耐性较弱。     

套袋对葡萄浆果品质的影响

[目的]为推广应用葡萄套袋栽培提供依据。[方法]以葡萄品种无核白鸡心、晚红为试材,测定了不同套袋(白纸袋、蜡纸袋、黄条纹纸袋)处理的葡萄果穗重、果粒重、着色程度、病果率、可溶性固形物含量、有机酸含量、维生素C含量等。[结果]晚红、无核白鸡心套袋后均明显地增加了果穗重和果粒大小,单粒重比对照增加了0.7~2.4 g(除无核白鸡心套用白纸袋外),病果率明显低于对照。无核白鸡心葡萄以蜡纸袋的效果最好,增加了维生素C的含量,可溶性固形物的含量也显著高于对照。晚红以白纸袋和黄条纹袋比较好,降低了有机酸的含量,增加了维生素C的含量。[结论]葡萄套袋后可以提高品质和商品性。     

不同花穗整形长度对‘魏可’葡萄果实品质的影响

[目的]研究不同花穗整形长度对‘魏可’葡萄果实品质的影响,以期为生产实践提供依据.[方法]以‘魏可’葡萄为试验材料,开花前7d分别留花穗穗尖的3、5、7 cm,疏除花穗其余部分,并以不整穗作为对照,测定果实纵横径、果形指数、单果重、可溶性固形物、可滴定酸等指标.[结果]不同花穗整形长度可在一定程度上提高‘魏可’葡萄成熟果实的果实品质,对可滴定酸含量无显著影响.其中,保留花穗尖5 cm能显著增加果实纵横径、果实单果重,提高可溶性固形物含量,且能保持魏可的果形不变.[结论]保留花穗尖5 cm为‘魏可’葡萄花穗最适整形长度.     

5个无核葡萄品种在吐鲁番地区的栽培性状及制干特性分析

【目的】分析5个无核葡萄品种在吐鲁番地区的栽培性状、果实品质及制干特性差异，为新无核葡萄品种的推广利用和产区品种结构优化提供参考。【方法】以吐鲁番地区目前主栽(无核白)及新引入或推广(长粒无核白、无核白鸡心、波尔莱特、紫甜无核)的5个无核葡萄品种为试材，在露地栽培条件下，系统研究比较5个无核葡萄品种物候期、生长结果习性、果实品质及制干特性差异，利用主成分分析法评价各品种葡萄、葡萄干综合品质。【结果】5个无核葡萄品种在物候期、生长结果习性、果实品质及制干特性方面存在明显差异。无核白、长粒无核白、无核白鸡心熟性表现为中熟，紫甜无核中晚熟，波尔莱特晚熟；无核白鸡心、紫甜无核结果枝率均在65.00%以上，但无核白鸡心萌芽率仅53.70%;无核白平均单株产量超过35.00 kg,无核白鸡心仅14.28 kg;无核白鸡心、紫甜无核果粒质量均超过6.00 g,无核白仅3.79 g;紫甜无核葡萄可溶性固形物含量仅19.66%,而其他品种均超过21%;波尔莱特可滴定酸含量为0.65%,紫甜无核仅0.34%;无核白鸡心和紫甜无核分别具有淡玫瑰香味和淡牛奶香味；葡萄综合品质排序为紫甜无核>无核白鸡心&...     

赤霉素对早紫葡萄无核及果实品质的效应

以大棚栽培的3年生早紫葡萄(Vitis vinifera)为材料,研究了在花前10 d喷施不同浓度的赤霉素(GA3)溶液对果实品质、无核率及座果率的影响。结果表明:喷施赤霉素(GA3)溶液后都能达到无核化的效果,其中以50 mg/L的赤霉素(GA3)溶液无核处理的效果最好,无核率可达93.33%;果实的可溶性糖及可溶性固性物含量也均最高,而且其着色度、表面光洁度等外观品质也最好。     

复合酶法澄清葡萄籽提取液工艺研究

[目的]对葡萄渣提取液进行澄清,并对工艺参数进行优化.[方法]选择果胶和纤维素复合酶对葡萄籽提取物进行澄清,分别在最适温度和常温作用、最适pH和不调pH条件下此较了复合酶对葡萄籽提取液澄清效果及多酚和原花青素含量的影响.[结果]试验表明,复合酶对葡萄籽提取液澄清效果受温度的影响较大,调节pH对澄清度的影响则表现不明显.正交试验证明,最佳澄清工艺条件为pH 5.5,酶解温度45℃、作用时间6h、酶剂量60 mg/kg,透光率达到76％,澄清过程中不影响葡萄籽多酚以及原花青素含量.[结论]研究可为葡萄籽提取液的开发利用提供理论依据.     

葡萄全基因组DELLA蛋白基因家族鉴定及其应答外源赤霉素调控葡萄果实发育的特征

【目的】明确DELLA蛋白基因在葡萄基因组数据库中的数量、结构和组织表达差异,探究DELLA蛋白在葡萄赤霉素(GA)信号传导及葡萄无核果实发育机理中的作用机制。【方法】基于拟南芥、水稻等植物中的DELLA蛋白基因,利用HMMER程序和NCBI的CDD程序鉴定葡萄基因组中的DELLA蛋白基因;以‘白罗莎里奥’葡萄品种为试材,采用PCR技术克隆3个DELLA蛋白基因的c DNA全长序列;通过启动子作用元件分析预测其潜在功能;利用生物信息学软件对其染色体定位、基因结构、系统进化、理化特性、亚细胞定位及蛋白互作等进行分析;利用农杆菌介导的烟草瞬时表达技术分析DELLA蛋白的亚细胞定位情况;采用q RT-PCR方法检测葡萄DELLA蛋白基因应答GA在果皮、果肉、种子(或种子区)的时空表达特征。【结果】鉴定得到3个葡萄DELLA蛋白基因,克隆并验证其精确序列,分别命名为Vv GAI1(VIT_201s0011g05260)、Vv RGA(VIT_214s0006g00640)及Vv SLR1(VIT_211s0016g04630),其染色体定位、开放阅读框(ORF)大小、编码氨基酸数量分别为:Chr1、1 773 bp、590个;Chr14、1 710 bp、569个;Chr11、1 599 bp、532个。基因结构分析表明其DNA序列均无内含子,只有1个外显子,基因结构高度保守。进化分析显示Vv GAI1与Vv RGA亲缘关系较近,被聚类为一组,而Vv SLR1为另一组。3个基因的启动子均含有响应赤霉素和胚乳发育相关的作用元件,表明它们可能参与响应GA信号传导和胚乳发育过程。亚细胞定位结果显示3个DELLA蛋白均定位于细胞核。q RT-PCR结果显示除果皮中Vv SLR1在近成熟期具有表达高峰外,其余均在幼果期高表达,且外源GA处理均不同程度降低了3个DELLA蛋白基因在葡萄果皮、果肉和种子区的表达,尤以种子区下调水平最为显著。蛋白互作分析表明3个DELLA蛋白均为葡萄GA信号传导的核心作用元件,均可能与GIDI1和SLY1互作参与葡萄GA信号传导。【结论】葡萄基因组中含有3个DELLA蛋白基因家族成员;不同物种间DELLA蛋白结构高度保守;GA可能通过负调控这3个成员参与葡萄果皮、果肉和种子区的发育,且3个成员均可能通过应答GA信号调控葡萄无核果实的发育。