砂地柏提取物对粘虫肠道组织的影响

对新发现的一种杀虫植物砂地柏（ＳａｂｉｎａｖｕｌｇａｒｉｓＡｎｔ．）果实提取影响粘虫（ＭｙｔｈｉｍｎａｓｅｐａｒａｔａＷａｌｋｅｒ）幼虫肠道组织进行了研究,结果表明,砂地柏提取物对粘虫肠道组织的膜结构及亚细胞结构均能造成一定的损伤和影响,对马氏管结构亦有破坏作用,这可能是导致粘虫中毒死亡的主要原因。     

砂地柏果实提取物杀虫活性初探

砂地柏果实丙酮提取物及精油对菜青虫等６种重要害虫均不同程度地表面出生物活性。对菜青虫具有拒食,胃毒和触杀作用,用粘虫只表现出较强的拒食和胃毒作用,可抑制玉米象及赤拟谷盗种群形成,干扰棉铃虫的生长发育,其精油对供试昆虫有很强的熏蒸活性。     

砂地柏果实提取物杀虫活性初探

砂地柏果实丙酮提取物及精油对菜青虫等６种重要害虫均不同程度地表现出生物活性。对菜青虫具有拒食、胃毒和触杀作用,对粘虫只表现出较强的拒食和胃毒作用,可抑制玉米象及赤拟谷盗种群形成,干扰棉铃虫的生长发育,其精油对供试昆虫有很强的熏蒸活性。     

新杀虫植物砂地柏研究进展

对新发现的一种杀虫植物砂地柏的资源、化学、药理学及杀虫活性等方面研究情况及进展作了论述。通过对砂地柏药理学及杀虫活性等方面的研究结果的总结和分析，为害虫防治方面的基础理论和实际应用研究提供了依据。     

砂地柏果实提取物对棉铃虫生长发育的影响

测定了新杀虫植物砂地柏果实的不同提取物对棉铃虫幼虫生长发育的影响,结果表明,砂地柏果实的不同提取物能明显抑制棉铃虫幼虫的生长发育速率;砂地柏果实不同提取物对供试幼虫体内羧酸酯酶活性的影响作用不同,甲醇提取物和石油醚回流物能不同程度激活羧酸酯酶活性,而甲醇回流物则对羧酸酯酶有抑制作用     

砂地柏果实提取物对棉铃虫生长发育的影响

测定了新杀虫植物砂地柏果实的不同提取物对棉铃虫幼虫生长发育的影响,结果表明,砂地柏果实的不同提取物能明显抑制棉铃虫幼虫的生长发育速率,砂地柏果实不同提取物对供试幼虫体内羧酸酯酶活性的影响作用不同,甲醇提物和石油醚回液物能不同程度激活羧酸酯酶活性,而甲醇回流物则对羧酸酯酶有抑制作用。     

新杀虫植物砂地柏研究进展

对新发现的一种杀虫植物砂地柏（Ｓａｂｉｎａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ Ａｎｔ．）的资源、化学、药理学及杀虫活性等方面研究情况及进展作了论述．通过对砂地柏药理学及杀虫活性等方面的研究结果的总结和分析，为害虫防治方面的基础理论和实际应用研究提供了依据。     

砂地柏提取物对粘虫和玉米象取食、存活及繁殖的影响

利用小叶碟添加法和饲料混药法测定了砂地柏的甲醇提取物对粘虫和玉米象生物活性的影响。结果表明：砂地柏甲醇提取物对粘虫表现出强烈的拒食活性。务处理的总校正死亡率均未超过３０％,但试虫在取食了一定量毒叶约１２ｈ后,表现出明显的中毒症状。甲醇提取物的２个浓度处理对玉米象成虫的种群形成抑制率均达到８０％以上,表现出很强的种群形成抑制作用。丙酮溶剂对玉米象成虫的种群形成有一定影响。     

砂地柏果实中杀虫活性成分研究

以菜青虫为为标准试虫进行生物活性跟踪测试,对杀虫植物砂地柏果实中杀虫活性万分进行了分离。经溶剂提取,４次柱层析及重结晶,得到一种杀虫活性成分纯品,代号为ＳＦＯ２,生测结果表明,ＳＦＯ２对菜青虫有较强的拒食及胃毒毒钉作用,但没有酶杀活性。     

砂地柏果实中杀虫活性成分研究

以菜青虫（ＰｉｅｒｉｓｒａｐａｅＬ．）为标准试虫进行生物活性跟踪测试,对杀虫植物砂地柏（ＳａｂｉｎａｖｕｌｇａｒｉｓＡｎｔ．）果实中杀虫活性成分进行了分离。经溶剂提取、４次柱层析及重结晶,得到一种杀虫活性成分纯品,代号为ＳＦＯ２．生测结果表明,ＳＦＯ２对菜青虫有较强的拒食及胃毒毒杀作用,但没有触杀活性。     

东方粘虫U6启动子的克隆及功能验证

为了持续获得大量短片段干扰RNA(short interference RNA,siRNA),通过染色体步移技术克隆得到东方粘虫U6snRNA基因5′-端侧翼启动子序列1 426bp。经生物信息学分析,该序列含SPH元件、八聚体序列(OCT)、远端序列元件(DSE)、近端序列元件(PSE)及TATA box等RNA聚合酶Ⅲ(RNA polymeraseⅢ,RNA PolⅢ)U6启动子的特征元件。通过构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体的方式,对增强型绿色荧光蛋白EGFP基因进行RNAi,证明克隆得到的东方粘虫U6启动子可成功驱动shEGFP表达,具有U6启动子功能。为后续构建以东方粘虫V-ATP酶H亚基为靶基因的沉默载体奠定基础。     

粘虫中肠胰蛋白酶基因启动子的克隆及其功能分析

【目的】通过克隆粘虫Mythimna separata(Walker)(Lepidoptera:Noctuidae)中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列,并分析启动子功能,为进一步探索昆虫胰蛋白酶活性调控机制奠定基础。【方法】利用Genome Walking方法克隆粘虫中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列,运用在线分析软件NNPP v.2.2和数据库JASPAR进行序列分析,构建由胰蛋白酶基因启动子驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体,通过转染草地贪夜蛾sf21细胞系,瞬时表达后用双荧光素酶报告基因检测系统分析该启动子活性。【结果】克隆得到粘虫中肠胰蛋白酶基因5′端侧翼启动子序列1 863bp,其中含TATA框、CAAT框等启动子核心序列及GATA、STAT、C/EBP等转录调控元件。双荧光素酶报告基因检测系统分析表明,相对于空载体pGL3-Basic,所构建的重组载体p(-1 673/+25)具有明显的启动子活性。【结论】克隆得到的启动子片段明显具有启动报告基因表达的能力,可用于在胰蛋白酶基因启动子水平和转录因子水平研究杠柳新苷活性化合物的激活机理。     

雷公藤甲素对粘虫中肠消化酶及其组织结构的影响

测试雷公藤甲素对粘虫中肠消化酶活性的影响 ,并对中毒试虫的中肠组织结构进行显微观察。结果表明 ,处理试虫脂肪酶活性在痉挛期和麻痹期分别下降 2 6 .0 %和 39.1% ,达极显著水平 ;淀粉酶、蛋白酶活性在各个时期的变化均不显著 ;中肠细胞变厚且混乱变形 ,组织许多部位呈消融状 ,肠壁细胞层排列不规则 ,柱状细胞与杯状细胞排列不整齐 ,并有纵肌、微绒毛脱落现象。     

鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素对粘虫生物活性初步研究

采用小叶碟添加法测定了鬼臼毒素 ( Podophyllotoxin)和脱氧鬼臼毒素 ( Deoxypodophyllotoxin)对粘虫 ( Mythimna separata W.)的生物活性。结果表明 ,二者对粘虫 4龄幼虫均有很强的拒食作用 ,2 4h、48h和72 h的 AFC50 值分别为 1 .40 86、1 2 .45 1 4、0 .8881 mg/m L和 0 .4686、1 .1 0 66、0 .2 5 99mg/m L;二者对粘虫的生长发育抑制作用也较强 ,致使粘虫生长发育各历期均延迟 ,化蛹率、羽化率、产卵量等均明显降低     

茉莉酸甲酯诱导的玉米对粘虫生长发育的影响

【目的】研究取食经茉莉酸甲酯（MeJA）处理的玉米对粘虫生长发育的影响,揭示玉米相关抗虫机制,为利用植物自身抗性进行害虫防治提供理论依据。【方法】对玉米苗喷施100μmol/L的MeJA溶液,将处理24 h后的玉米苗喂食粘虫1龄幼虫,连续喂食直至化蛹,观察分析粘虫生长发育情况;通过荧光定量PCR研究外源MeJA处理后玉米植株茉莉酸通路上关键基因的表达变化,并用超高效液相色谱—串联质谱（UPLC-MS/MS）对处理后的玉米叶片相关激素进行定性和定量分析。【结果】与对照相比,取食经MeJA处理的玉米叶片后,6龄粘虫幼虫体重减轻11.67%,蛹重减轻18.20%,羽化率降低7.35%,成虫存活时间缩短0.93 d,而蛹期延长0.27 d。荧光定量PCR检测结果,外源MeJA处理24 h后,ZmLox基因的表达量显著上调（P<0.05,下同）,达对照的5.57倍;ZmAos基因表达量在处理12 h后显著增加,24 h后降至对照相近水平;ZmAoc基因和ZmOpr基因表达量在处理后12和24 h无显著变化（P>0.05,下同）。UPLCMS/MS定性定量分析结果表明,喷施MeJA 24 h后,玉米叶片中二氢茉莉酸（H₂JA）含量显著增加,为对照的5.67倍,而茉莉酸（JA）、茉莉酸—异亮氨酸（JA-ILE）和MeJA含量无显著变化。【结论】外源喷施MeJA能诱导玉米产生防御能力,影响取食的粘虫生长发育;ZmLox基因的显著表达和激素H₂JA的产生可能是玉米抗虫的一个重要机制。     

5种杀虫剂对粘虫不同发育阶段的室内毒力

采用胃毒法、卵和蛹采用浸渍法,测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、氯虫苯甲酰胺、辛硫磷、联苯菊酯、高效氯氟氰菊酯5种杀虫剂对粘虫卵、1龄幼虫、3龄幼虫、5龄幼虫和蛹的室内毒杀作用。结果表明:供试5种杀虫剂对卵的触杀作用依次为甲氨基阿维菌素苯甲酸盐高效氯氟氰菊酯联苯菊酯辛硫磷氯虫苯甲酰胺;对幼虫的毒杀作用依次为甲氨基阿维菌素苯甲酸盐联苯菊酯、高效氯氟氰菊酯氯虫苯甲酰胺辛硫磷;对蛹的触杀作用依次为高效氯氟氰菊酯联苯菊酯辛硫磷甲氨基阿维菌素苯甲酸盐氯虫苯甲酰胺。甲氨基阿维菌素苯甲酸盐对粘虫卵和幼虫的毒杀效果最好,对卵、1龄幼虫、3龄幼虫、5龄幼虫的LC50分别为0.276、1.555、0.109和1.483 mg/L;高效氯氟氰菊酯对粘虫蛹的触杀效果最好,LC50为5.539mg/L。建议根据粘虫发生的实际情况,在生产中将甲维盐和高效氯氟氰菊酯作为防治粘虫的首选药剂。与其他供试的4种杀虫剂相比,氯虫苯甲酰胺对粘虫卵和蛹的毒杀作用最弱,对1龄、3龄、5龄幼虫的毒杀作用略高于辛硫磷或与其相当,显著低于联苯菊酯、高效氯氟氰菊酯和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐,建议在粘虫大发生时慎用。     

饥饿胁迫对粘虫幼虫糖原、海藻糖含量和蜕皮激素滴度变化的影响

为探究饥饿胁迫对粘虫Mythimna separata (Walker)代谢活动的影响,选用其4~6龄幼虫进行饥饿处理（1 d,2 d,3 d）,分别测定饥饿及正常取食的粘虫幼虫糖原、海藻糖含量和蜕皮激素［20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)］滴度的变化情况。结果表明：与对照组相比,饥饿组随处理天数的增加,其糖原含量逐渐降低,4~6龄饥饿第3天时分别为15.11 mg/g、16.13 mg/g和15.50 mg/g,均与对照组差异显著;海藻糖的含量则逐渐升高,各龄期饥饿第3天时分别达到35.41 mg/mL、39.56 mg/mL和40.06 mg/mL,其中第2天和第3天的含量均显著高于对照组;4龄对照组的20E滴度先升高后降低,且在试验过程中发现有部分幼虫在第3天蜕皮进入5龄,而饥饿组第3天的20E滴度为39.92 ng/L,较对照组的最大值49.71 ng/L低9.79 ng/L且差异显著,但饥饿组在处理第3天时却未发现蜕皮;5龄饥饿第2天和第3天的20E滴度均显著低于对照组,说明幼虫在饥饿胁迫下生长发育减缓,但6龄饥饿组的20E滴度均显著高于对照组,说明该阶段20E急剧增加,使末龄幼虫加快发育以便提前进入蛹期,各龄期饥饿3 d时其20E滴度分别为39.92 ng/L、45.36 ng/L和48.03 ng/L。可以看出,糖原、海藻糖和蜕皮激素均参与粘虫幼虫对饥饿胁迫的适应,这为进一步揭示饥饿肋迫下粘虫幼虫体内关键因子的调控机制以及繁殖适应性奠定基础。     

松油烯-4-醇对粘虫酯酶活性及同工酶的影响

以粘虫为试虫,测定了松油烯-4-醇对其酯酶活力和酯酶同工酶的影响。结果表明,松油烯-4-醇对粘虫血淋巴酯酶有一定的激活作用,在兴奋期、痉挛期、麻痹期和复苏期,酯酶活性分别为对照的1．03、1．07、1．43和1．16倍;试虫同工酶的变化与酯酶活力变化基本吻合,即酶活力增强时,同工酶的主酶带增强或新增一些酶带;酶活力变弱时,同工酶的主酶带减弱或一些弱带完全消失。     

杠柳新苷Ｔ作用东方粘虫幼虫中肠细胞的免疫定位研究

【目的】明确杠柳新苷T作用后在东方粘虫幼虫中肠肠壁细胞中的分布,探讨其杀虫作用机制。【方法】鉴于杠柳新苷T对东方粘虫幼虫具有明显的胃毒活性,而对小地老虎幼虫无杀虫活性,采用胶体金免疫电镜技术,比较观察了杠柳新苷T处理的东方粘虫幼虫和小地老虎幼虫中肠肠壁细胞的变化。【结果】东方粘虫幼虫经杠柳新苷T处理后,胶体金颗粒首先出现在微绒毛上,且密度随着处理时间延长而逐渐增大,最终破坏微绒毛;同时,胶体金颗粒在细胞内的细胞器膜上也有出现,并损伤细胞器。小地老虎幼虫经杠柳新苷T处理后,中肠肠壁细胞及细胞器均没有明显变化,其上也没有发现胶体金颗粒的存在。【结论】杠柳新苷T对东方粘虫幼虫和小地老虎幼虫的选择性与其在2种试虫中肠肠壁细胞上的特异性结合存在显著差异有关,杠柳新苷T作用东方粘虫幼虫后的初始结合部位可能是其中肠肠壁细胞,推测杠柳新苷T的靶蛋白可能存在于中肠肠壁细胞膜及细胞器膜上。     

利用RNAi技术沉默东方粘虫V-ATP酶H亚基研究

昆虫V-ATP酶(vacular-type ATPase)是以ATP为能量跨膜转运H+的质子泵,对其亚基进行干扰都会影响ATPase的活性,进而影响昆虫的生理生化指标。本研究利用特异性引物通过RT-PCR法扩增东方粘虫(Mythimna separata)V-ATPase H亚基的2个片段,合成相应dsRNA,通过显微注射导入3龄粘虫体内,观察试虫表型及存活情况,RT-PCR检测试虫体内H亚基的表达。结果表明,注射粘虫V-ATPase H亚基的dsRNA能够显著降低粘虫中肠V-ATPase H亚基的表达水平,直至导致目的基因沉默和粘虫死亡。本项研究成功实现东方粘虫体内V-ATPase H亚基基因沉默。