水貂阿留申病毒（ADV）单克隆抗体的研制

以ADV-G为抗原,利用细胞融合技术,建立了5株特异的抗ADV单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞,其中Y_9、Y_(19)和Y_(13)酶印迹(Western Blot)阳性,均与ADV-G的85K和75K蛋白反应。B_4和Y_(21)单克隆抗体为间接ELISA阳性。     

水貂阿留申病毒部分VP2基因的克隆表达和重组蛋白的免疫学分析

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列设计合成1对特异引物,利用PCR方法扩增ADV国内分离株部分VP2基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-28a中.经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,构建了原核表达载体pET-28a-VP2.阳性重组质粒转化宿主菌BL21,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和免疫印迹分析.结果表明蛋白获得了表达,表达产物的分子质量为21 kD,与理论推测的分子质量一致;在终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导下,5 h时表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗水貂抗体所识别,具有相应的抗原性.     

一株水貂阿留申病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析

为了对水貂阿留申病毒的诊断防治提供依据,验证水貂阿留申病毒在我国的遗传演化情况,研究了阿留申病毒的诊断抗原。将疑似阿留申病毒感染致死的送检水貂进行PCR初步诊断,并应用猫肾传代细胞系(CRFK)进行了分离培养。提取细胞培养物的DNA,经PCR检测呈阳性后,对分离前后的阿留申病毒VP2基因全序列进行克隆测序,其结果与GenBank上传的其它ADV亚型VP2序列进行了比较后证明:获得了一株可以在CRFK细胞中稳定生长的水貂阿留申病毒毒株(命名为ADV-ZYL1)。氨基酸分析发现,ADV-ZYL1毒株与美国强毒力毒株ADV-Utah-1的氨基酸同源性最高,为96.1%,与ADV-Far East的氨基酸同源性为92.7%,表明ADV-ZYL1的VP2蛋白氨基酸存在很高的突变率。     

水貂阿留申病毒VP2基因主要抗原表位区的原核表达

根据GenBank中已发表的水貂阿留申病毒(ADV)VP2基因核苷酸序列分别设计合成两对引物,用PCR方法扩增ADV国内分离株VP2基因中主要抗原表位区的两个片段,分别将其克隆到原核表达载体pMAL-c2的多克隆位点中。经酶切、PCR扩增和测序分析证实其已正确插入到表达载体中,且阅读框是正确的,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE检测和免疫印迹分析。结果表明两段蛋白均获得了表达,表达产物的分子质量分别约为63、65kD,与理论推测的分子质量一致;并在终浓度为1mmol/L的IPTG诱导下,4h时其表达量达到高峰;Western blot分析表明表达蛋白能被兔抗MBP抗体所识别,具有一定的抗原性。     

水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白研究进展

水貂阿留神病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(VP1、VP2、NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用。为此,综述了国内外关于水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白的研究情况,以期为该病的进一步研究提供参考。     

猪萨佩罗病毒VP1蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

猪萨佩罗病毒(PSV)是一种小RNA病毒,在临床上多与猪流行性腹泻病毒、捷申病毒等引起混合感染.近年来,我国多个省份报道在猪体内分离到该病毒,因而有必要加强对PSV的相关研究.参照PSV-HuN2株序列,将VP1基因插入pGEX-6p-1中进行重组蛋白表达.将蛋白质溶液与弗氏佐剂混合,按照标准程序免疫6～8周龄BALB...     

水貂阿留申病

水貂阿留申疾病是目前全世界水貂饲养业中危害最严重的三大疫病之一。虽然疾病对非阿留申系列的水貂一般不致死亡,但对皮张却有严重损害,由此造成的损失估计每年可达几百万美元。本文对水貂阿留申疾病的发现,病原体特性,传染方式,疾病的症状和诊断,以及防治方法作了比较全面的介绍。最后,作者根据自己饲养水貂的经验,对我国应该如何防治水貂阿留申疾病提出了一些看法。     

水貂肠炎细小病毒结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析

对水貂肠炎细小病毒SMPV-11株结构蛋白VP2基因进行扩增,获得了基因序列全长为1755bp的SMPV-11株VP2基因,其编码584个氨基酸;应用DNAStar分析软件对该序列进行同源性分析发现,SMPV-11株VP2基因与其他6株水貂肠炎细小病毒株核苷酸和氨基酸均有较高的同源性,分别为99.2%～99.4%和98.6%～99.1%,与猫泛白细胞减少症病毒标准株CU-4株同源性为99.3%和99.1%,系统发生树分析表明它们属于同一个分支。本研究为水貂肠炎细小病毒分子流行病学调查和新型疫苗的研究奠定基础。     

水貂阿留申病毒实验感染艾虎的研究——Ⅰ.病毒抗原的提取及超薄切片电镜观察

本试验应用水貂阿留申病毒“辽金ADV81—02”病毒株对对流免疫电泳阴性、临床表现健康的艾虎进行了实验感染。结果表明,在感染阿留申病毒的艾虎及复归水貂脏器(肝、脾、淋巴结)中均能提取出阿留申病毒抗原,并在免疫电镜下发现了典型的阿留申病毒颗粒。超薄切片电镜观察表明,病毒粒子主要分布在感染艾虎的肝、胂、淋巴结、肾和小肠。     

兔出血症病毒VP60蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化的重组兔出血症病毒核衣壳蛋白(VP60)为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备抗衣壳蛋白的单克隆抗体,获得了2株能稳定分泌抗VP60蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(AE11和AH4).分别利用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)等方法对单抗的免疫活性和特异性进行检测,结果证明,此两株单抗均能识别重组的VP60和天然病毒的衣壳蛋白,而IFA结果显示只有AE11能和RHDV反应,可观察到强烈的特异性绿色荧光,表明成功制备了抗RHDV的VP60特异性单抗.     

口蹄疫病毒O型病毒VP1蛋白表达及鉴定

利用大肠杆菌p ET-30a表达系统表达口蹄疫病毒(FMD)O型野毒株完整的VP1蛋白,并以Western blot试验进行鉴定。结果表明:VP1蛋白以可溶性表达,大小约为25 ku,可与标准O型口蹄疫病毒阳性血清特异结合。由此说明,口蹄疫病毒VP1原核表达蛋白有良好的反应原性,为构建口蹄疫病毒病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)和快速特异诊断试剂研制奠定基础。     

水貂阿留申病PCR完全诊断技术

本研究参考并分析GENBANK中阿留申病毒、肠炎细小病毒的序列及本实验室测序的两种病毒序列，设计并实验筛选出阿留申病毒诊断引物2对和肠炎细小病毒1对；其中阿留申病毒诊断引物ADV537与肠炎细小病毒引物PAR593组成联合诊断引物。由于2种病毒同属细小病毒属，基因某些区段相似，用于2种病毒的鉴别诊断、阿留申病毒与肠炎细小病毒混合感染的诊断。     

水貂阿留申病诊断方法的研究进展

综述了水貂阿留申病诊断方法的研究进展,为有效检测水貂阿留申病提供可靠的理论依据,将有利于水貂养殖场对水貂阿留申病的防制工作。     

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

1材料与方法1．1材料新生牛血清购自GIBICO生物公司;青霉素、链霉素购自哈尔滨制药六厂;降脂烷购自sigma公司;过碘酸钠购自上海生物试剂公司;脱脂乳购自飞鹤乳业公司;Babl／c小鼠购自兰州生物制品研究所。     

鸭瘟病毒gB蛋白单克隆抗体的制备

【目的】制备鸭瘟病毒(DPV)gB蛋白单克隆抗体,为建立DPV快速诊断方法及进一步鉴定DPV的抗原表位奠定基础。【方法】克隆DPVgB基因,构建其表达载体并进行原核表达,纯化DPV gB蛋白,以其作为抗原免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,进行间接ELISA及亚克隆筛选,并对单抗亚类及抗原性进行鉴定。【结果】PCR扩增出915bp的目的基因,成功连接于pET-28a载体,并转化大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,获得4株稳定分泌抗DPV gB蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为A8D7、E6C3、H11F8、H6F6,间接ELISA检测其腹水效价分别为1∶103、1∶103、1∶105、1∶103,亚类鉴定结果分别为IgG2b、IgG2a、IgG2b、IgG1,轻链均为kappa链。Western blot结果显示4株单抗均能与DPV gB蛋白特异性结合,IFA结果表明4株单抗是针对DPV产生的。【结论】成功获得了特异性针对DPV gB蛋白的单克隆抗体。     

水貂阿留申病的危害及其防制

水貂皮素有软黄金之称,是世界珍贵裘皮市场的三大支柱之一.我国自20世纪50年代引种扩繁以来,种貂已达百万余只,年产貂皮500余万张,为国家创利税上亿美元.但由于阿留申病(AD)的危害,使该产业的发展严重受阻,水貂AD已成为影响养貂业发展的世界攻关性病害,被列位水貂三大疫病之首.     

水貂阿留申病诊断技术的研究进展

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的自身免疫性疾病,目前尚无有效疫苗,每年结合打皮期筛查淘汰病貂是该病防控的主要手段.目前,水貂阿留申病的主要诊断方法是依据临床症状和血清的对流免疫电泳检测.对流免疫电泳需要在实验室内进行,使用范围局限.综述了国外该病诊断的最新研究进展,以期为该病诊断技术的开发提供思路.     

抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

[目的]制备抗猪瘟病毒（CSFV）的单克隆抗体（MAb）。[方法]以纯化的猪瘟病毒免疫4～6周龄BALB／c雌鼠,取其脾细胞与SP2／O骨髓瘤细胞进行融合,筛选出抗CSFV单克隆抗体杂交瘤细胞株。[结果]经间接ELISA获得3株能稳定分泌抗CSFVE2蛋白的MAb杂交瘤细胞,分别命名为1AS、5F3和4D2。Mab亚型鉴定表明3株MAb均为IgG2b,轻链均为K链。Westernblot结果表明3株Mab均能识别重组E2蛋白。间接免疫荧光试验表明3株Mab均与CSFV呈阳性反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）呈阴性反应。[结论]该研究为建立CSFV特异性检测方法奠定了基础。