体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

雌二醇对犬卵母细胞体外成熟的影响

为探讨雌二醇(E2)对犬卵母细胞体外成熟的影响,在基础培养液中分别添加浓度为0,1.0,2.0,3.0μg/mL的雌二醇。结果表明,体外培养48h后E2浓度为2.0μg/mL组犬卵母细胞达到MI-MII期比率为20.9%,高于浓度为0组(12.9%)、1.0μg/mL组(14.6%)和3.0μg/mL组(15.0%),差异不显著(P>0.05)。体外培养72h后E2浓度为2.0μg/mL组犬卵母细胞达到MI-MII期比率为23.3%,高于浓度为0组(14.0%)、1.0μg/mL组(16.7%)和3.0μg/mL组(15.7%)差异不显著(P>0.05)。可见,在基础培养液中添加浓度为2.0μg/mL的雌二醇(E2)可促进犬卵母细胞核成熟到MI-MII期,但效果并不明显。     

猪卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

 自屠宰场取猪卵巢825个，得卵母细胞8346个，将其分为3类。分类后卵母细胞在含有pFF或PMSG的TCM-199培养液中于5%CO#-2、95%空气、饱和湿度、39℃下培养36小时。成熟卵母细胞用前培养法加肝素或咖啡因获能的鲜精，以2×10#+5/ml的精子密度体外受精。在授精12-17小时以后，一些受精卵以手术法移至受体母猪输卵管中，另一些则更换BMOC-2培养液继续体外培养。3类卵母细胞间的成熟率与卵裂率有明显的差异。成熟培养液中加入PMSG和pFF，可明显提高卵母细胞成熟率（67.7%:17.8%）和桑椹胚率（6.5%∶2.8%）用笔者的培养液，有些胚胎成功地越过4细胞阻断而获得了猪的纯体外培养桑椹胚（1990.5）。移入受精卵的9头母猪，有3头妊娠，其中1头于1990年9月产5头仔猪。离子测定结果显示不同离子（Na、Ca、Cl、K）在精子某些部分、卵母细胞和受精卵的表面分布有明显改变。RMP检测指出培养前A类和部分B类卵母细胞为负值，C类和剩余部分B类为正值。培养后不同时间3类卵母细胞RMP差异明显，说明其代谢水平强弱不一。受精后皆为负值，说明物质代谢比受精前更为活跃。     

铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响

研究了氯化铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育潜力的影响。培养液中铜的浓度以原子吸收光谱法测定。培养液中铜的浓度为0(对照组)、0.46和0.68 mg·L-1。结果表明,试验组在卵母细胞成熟和受精卵发育至2细胞率与对照组差异不显著(P>0.05),但试验组较对照组显著提高了桑椹胚和囊胚的发育率(P<0.05)。在卵母细胞体外成熟培养的0~22 h、受精卵培养的0~48 h、48~96 h、96~144 h和144~192 h,0.46 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了4.3%、8.7%、26.0%、28.3%和30.4%,0.68 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了2.9%、7.4%、23.5%、25.0%和27.9%。培养液中铜对牛早期胚胎培养至桑椹胚和囊胚有重要的作用,早期胚胎发育48 h后对培养液中微量元素铜的需求明显增加。     

已糖对猪卵母细胞体外成熟及体外受精后囊胚发育能力的影响

以NCSU-37为基础培养基,观察了葡萄糖、果糖和乳糖3种已糖对猪卵母细胞体外成熟和体外受精能力的影响,结果:①与浓度2.51、0.0 mmol/L比较,葡萄糖或果糖浓度为5.5 mmol/L时,猪卵母细胞MII期成熟率较高(P<0.05);而不同浓度的半乳糖对MII期成熟率无明显影响。②猪成熟卵母细胞体外受精后,葡萄糖或果糖组囊胚率分别为8.6%和8.2%,显著高于对照组及半乳糖组2.9%和9.2%(P<0.05);但对囊胚进行地衣红压片显示,果糖组囊胚质量达到A级率为43.2%(10/23),显著高于葡萄糖组24.3%(6/25)。研究表明,果糖对于猪卵母细胞的体外成熟及体外生产高质量囊胚效果较好。     

牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究

本研究分析了卵巢不同性周期阶段（卵泡期、黄体期）、外源激素（ＦＳＨ、ＬＨ、雌激素）和不同卵泡液浓度（１０％,２０％,３０％）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大（６３９％和５８７％）;成熟培养基中添加ＦＳＨ（１０ｍｇ／Ｌ）,ＬＨ（５ｍｇ／Ｌ）和同时添加ＬＨ、雌二醇（１ｍｇ／Ｌ）,可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为６３０％,６４０％,６９１％;卵泡液（１０％,２０％,３０％）代替血清,其成熟率分别为５０７％,５７６％,５１９％,２０％ｂＦＦ效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下（１×１０６～２×１０６个／ｍＬ）,Ｐｅｒｃｏｌ液处理精子的受精率（４７１％）显著低于上浮法处理精子的受精率（５７１％）（Ｐ＜００５）。     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的，胞质不均匀和不含卵丘细胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３差异极显。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显。Ｅ，ＣＦ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ２能显地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液（加入２×１０＾－＾６     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的、胞质不均匀和不含卵丘细胞胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３者差异极显著。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液培养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显著。Ｅ，Ｃ，Ｆ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ＿２能显著地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液［加入２×１０￣（－６）ｍｏｌ／（Ｌ·ｓ）ＦＳＨ］培养的成熟率分别为５０％，４４．４％，受精后的卵裂率分别为１６％，１０％，成熟率、卵裂率间均无显著差异。卵母细胞体外成熟培养３６，４０，４４ｈ后授精，其相应的受精率分别为２６．７％，４４．４％，４５．８％；卵裂率分别为０．３０％，２０％；以培养４０，４４ｈ的效果稍好，但三者差异不显著。     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

综述了猪卵母细胞体外成熟的影响因素,并探讨了猪卵母细胞体外成熟的最佳条件和培养体系。     

卵巢皮质与输卵管上皮细胞对猪卵母细胞体外成熟与体外受精的影响

在猪输卵管上皮细胞（pOECs）与猪卵巢皮质细胞（pOCCs）共培养体系中进行猪卵子体外成熟（IVM）,研究比较了pOECs与pOCCs对猪卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精与胚胎发育的影响。结果显示：pOCCs或pOECs参与猪卵子体外成熟可显著提高卵丘扩散与MⅡ期卵子的比例（P<0.05）,然而GV期卵子的比例却没有显著减少（P>0.05）;pOCCs组内成熟卵子的GSH含量显著高于其余各组（P<0.05）,而GSH在pOECs组与对照组之间差异不显著（P>0.05）;尽管pOCCs和pOECs共成熟可显著降低多精入卵的比例（P<0.05）,但是受精率与雄原核形成率（MPN）在各组间却无显著差异（P>0.05）;pOCCs和pOECs共培养均可以显著提高卵裂率与囊胚发育率（P>0.05）,然而囊胚细胞数在处理组与对照组间没有显著性差异（P>0.05）。研究认为,pOCCs与pOECs共培养体系能显著提高猪卵母细胞IVM质量,降低多精入卵的发生,并提高囊胚发育率。     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:改良TCMl99(mTCMl99)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P<0.05);基础培养基中添加PMSG、hCG和pFF,卵母细胞体外成熟率(80.63%)显著高于仅...     

猪卵母细胞体外成熟研究

[目的]探讨猪卵母细胞体外成熟的最佳培养条件。[方法]以NCSU-23为基础培养基,研究不同激素组合和培养时间（36、40、44和48 h）对猪卵母细胞体外成熟的影响。[结果]猪卵母细胞体外培养44 h后,成熟率最高,为81.4%;猪卵母细胞在成熟培养液培养22h后,再在无激素培养液中继续培养22 h时,成熟率最高;添加性腺激素的组成熟率显著高于不添加组,差异显著（P〈0.05）。[结论]在体外成熟培养过程中,添加性腺激素能显著提高猪卵母细胞成熟率。     

β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。     

瘦素对水牛卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎发育的影响

[目的]探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础.[方法]分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率和体外受精胚胎发育率的影响.[结果]在水牛卵母细胞体外成熟液阶段,添加瘦素不仅能促成熟,还能提高其胚胎发育潜能;在体外受精后的胚胎培养阶段,添加瘦素也能显著提高囊胚发育率,二者的最佳瘦素浓度均为10 ng/mL.在最佳瘦素浓度(10 ng/mL)下,常规精子体外受精后的囊胚发育率从19.7%(空白对照组)提高到27.0%,分离精子体外受精后的囊胚发育率从12.3%(空白对照组)提高到17.4%.[结论]瘦素能促进水牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育,并以添加10 ng/mL瘦素的促进效果最明显.     

颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

试验系统研究了颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为68.3%、45.6%和6.1%,组间差异显著(P<0.05),卵裂率分别为41.5%、8.1%和0,差异显著(P<0.05)。对照组和15×104个/ml、150×104个/ml颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为65.9%、60.2%和64.6%,无显著差异(P>0.05),但均显著高于1 500×104个/ml(50.0%)和1.5×108个/ml(30.3%)颗粒细胞组(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系统卵母细胞成熟率为75.8%,显著高于150×104个/ml颗粒细胞条件培养液组(63.4%)和M199培养液组(66.7%)(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系卵裂率为50.0%,显著高于150×104个/ml条件培养液组(36.7%)和M199培养液组(38.2%)(P<0.05)。     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟体外受精研究

对山羊孵巢卵泡卵母细胞的采集方法、 PMSG处理山羊促进多卵泡发育及受精体系进行了研究。结果表明：切割法获可用卵数高于抽吸法， PMSG处理获卵总数及可用卵数高于对照组， BO液法的受精率高于 TALP液法，而 TALP液法的桑椹胚率高于 BO液法。     

影响猪卵母细胞体外成熟的若干因素

介绍了以屠宰场废弃的猪卵巢为材料,通过系统技术途径得到猪早期胚胎的基本方法。重点探讨了不同发育阶段、不同培养系统、不同添加成分培养液以及不同培养时间等因素对猪卵母细胞体外成熟的影响,并对其体外受精卵裂能力进行了比较与评价。结果表明,采用mTCM199作为体外成熟基础培养液,并添加直径5~8 mm卵泡的卵泡液(pFF)和雌二醇(E2),直径为2~8 mm的卵巢卵泡COCs经体外成熟培养40 h,可得到较高的成熟率(66.7%)和体外受精卵裂率(29.2%)。本研究初步建立了猪2-细胞~4-细胞早期胚胎的体外批量生产技术,可望进一步改进和完善后应用于养猪业科研与生产实践。     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关因素

卵母细胞是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分，它是体外受精、性别控制、克隆及转基因等技术成功与否的前提和关键。影响猪卵母细胞体外成熟的因素很多，本文将从物理因素和化学因素两方面作简要综述。     

不同体外成熟时间对猪体外成熟卵母细胞孤雌胚胎发育的影响

对体外成熟33,41.49和57 h的猪成熟卵母细胞进行孤雌激活,并对激活后孤雌胚胎的囊胚发育率进行观察.成熟率方面,33 h组显著低于41,49和57 h组,分别为52.54%,79.19%,93.25%和93.75%(p＜0.05);卵裂率方面,41 h组显著高于57 h组,分别为92.26%和56.17%(p＜0...     

促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

在成熟液中同时添加不同浓度(0.25～2.0μg/mL)FSH和不同浓度(0.25～2.0μg/mL)LH,探讨这2种促性腺激素结合使用对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果显示,当FSH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL及LH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL时,猪卵母细胞的核成熟率极显著高于没有添加FSH和LH的对照组(P＜0.01),而FSH和LH不同浓度组合之间对猪卵母细胞核成熟影响差异不显著(P＞0.05).结果表明,成熟液中同时添加0.25μg/mL FSH和0.25μg/mL LH便能极显著地促进猪卵母细胞的核成熟率,国产FSH和LH用于猪卵母细胞体外成熟研究是可行的.