奶牛衣原体流产的病原分离与鉴定

2004～2005年莱西市某奶牛场从西安地区引进奶牛163头，在饲养过程中，奶牛相继发生流产。因缺乏当地动检相关手续，我们对其进行相关检疫，结果布病、白血病、蓝舌病为阴性，衣原体补体结合试验阳性率高达25．81％。经过对病料的分离培养与病原鉴定，确认该奶牛场引进的这批奶牛存在着鹦鹉热衣原体病原。     

应用间接免疫荧光法检测狂犬病病毒

取０．５ｍｌ兔ＢＨＫ－２１新鲜健康细胞液和０．１ｍｌ狂犬病病毒细胞液在含小飞片青瓶中混合，培养２４小时后制片，加抗狂犬病病毒兔抗体感作，用抗逸荧光抗体染色，通过荧光显微镜观察细胞浆内黄绿芭一病毒是否在细胞内增殖，从而建立了检测狂犬病病毒的间接免疫荧光法。     

云南省红河州猪衣原体性流产的病原分离鉴定

从母猪流产胎儿病料中分离到３株衣原体，将分离株鸡胚卵黄囊膜悬液接种７日龄鸡胚能致鸡胚规律性死亡；碘染色阴性；补体结合试验阳性；对鸡胚致死死毒价为１０^-9ＥＬＤ５０／０．４mL;该毒株能使小白鼠在３d内全部死亡。结果表明，该分离株为鹦鹉热衣原体；采用该场分离毒株,采用该场分离毒株制备的灭活苗免疫注射，母猪流产率由免疫前的３７．２１％下降到４．４２％，降低了３２．７９个百分点。     

乳牛衣原体性流产的病原鉴定及免疫原性研究

对采自甘肃、陕西和宁夏奶牛场的发生不明原因流产乳牛病料进行了间接血凝试验（IHA）、PCR、病原分离鉴定和MOMP基因检测，证实病原为鹦鹉热衣原体（Chlamydia psittaci）。对分离株Sx5和Nx进行毒力稳定性和免疫原性测定，用鸡胚连传20代，SX5和NX株的毒力比较稳定，毒力效价分别为10^-11ELD50和10^-10ELD50；用这2株菌对小鼠和牛做免疫效力试验，结果显示，免疫鼠5／5和5／5保护，对照鼠0／5保护；免疫牛3／3和3／3保护，对照牛0／3保护。表明，SX5和NX株具有良好的免疫原性，可以作为疫苗研制的候选菌株。     

羊流产嗜性衣原体重组ompA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

原核表达羊流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,C.abortus)ompA蛋白,包被ompA蛋白抗原,筛选反应条件,成功建立了血清抗体ELISA检测方法。PCR扩增ompA蛋白基因并进行原核表达,经纯化、复性和Western blot鉴定后作为包被抗原,通过反应条件筛选、灵敏性、特异性、重复性检验和临床样品检测,创建了羊流产嗜性衣原体血清抗体间接ELISA检测方法。结果表明,建立pET-28α-ompA阳性质粒并表达约为40 000的ompA蛋白,Western blot显示纯化复性的ompA蛋白具备抗原性与特异性。反应条件筛选结果为ompA蛋白包被360 ng;血清及二抗分别稀释1∶50,1∶5 000并37℃作用1 h;TMB显色10 min。在优化条件下,D_(450)≥0.327为阳性,反之为阴性;特异性、敏感性和重复性结果显示,对布氏杆菌、羊痘、羊口疮、小反刍兽疫和产气荚膜梭菌阳性血清的检测结果均为阴性且50份流产性衣原体阳性血清检出率为98%,批内和批间D_(450)值变异系数分别为1.56%～2.56%和2.35%～3.25%。应用建立的方法对临床175份血清检测,阳性率为52%,商品化衣原体间接血凝检测阳性率为49.1%,阳性符合率为96.5%。本试验建立的间接ELISA检测方法可用于羊流产性衣原体血清抗体水平检测。     

宁夏地区奶牛衣原体性流产病原的分离与鉴定

为了研究宁夏地区奶牛发生流产的原因,对从不同牛场采集的病料进行了间接血凝(IHA)试验和病原的分离、鉴定。结果表明:IHA试验平均阳性率为24.14%;从奶牛流产胎儿中分离到2株微生物(NY1、NP),经鉴定为鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci),毒力效价分别为1×10-6ELD50和1×10-5ELD50。     

肉鸽衣原体病病原分离鉴定

广东某肉鸽场幼龄鸽群发生以结膜炎、鼻炎和口腔炎，呼吸困难，腹泻，消瘦，生长发育缓慢为物征的传染病。从发病鸽分离到2株菌(SG1、SG2)，经电镜形态学观察、人工培养基接种试验、碘胺敏感性试验及碘染色试验鉴定为鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)。用IHA试验检查该鸽群衣原体抗体，阳性率到达92．0％。本次的鸽子传染病诊断为鸽衣原体病。     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

新疆地区2株驴源马流产沙门菌的分离鉴定及致病性分析

【目的】研究确定导致新疆地区2个规模化驴场出现流产的疑似病原沙门菌,并探究其致病能力和耐药性情况。【方法】通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验对分离菌进行了鉴定,并对分离菌的鞭毛基因FliC进行了PCR扩增及序列分析,通过致病性测定、荷菌量检测及病理组织学观察,鉴定和分析了分离菌的致病性,并通过药敏试验分析其耐药性。【结果】通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验,确定分离到的2株细菌均为马流产沙门菌,分别命名为G1-1和XD1-2。对这2个分离株的鞭毛基因FliC的遗传进化分析结果显示,2株分离菌FliC氨基酸序列之间的相似性为99.0%,2株分离菌FliC氨基酸序列与爱尔兰马源马流产沙门菌分离株Ireland-HE801373、Ireland-HE801378株相似性均最高,且均为99.3%;分离株G1-1与爱尔兰马源马流产沙门菌分离株Ireland-HE801373和Ireland-HE801378及国内马源马流产沙门菌分离株China-KJ486797.1和China-KJ486769.1亲缘关系较近,分离株XD1-2则与美国肠炎沙门菌分离株USA-EBQ1214032.1亲缘...     

流产衣原体TaqMan实时荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用

流产衣原体是导致绵羊地方性流产的主要病原体,给全球畜牧业经济发展构成了巨大威胁。为建立一种灵敏、特异且快速的检测流产衣原体的实时荧光定量PCR方法,依据衣原体蛋白酶样活性因子的基因组序列设计了针对检测流产衣原体的引物和TaqMan探针,对反应体系和反应条件进行了优化,对方法的灵敏度、特异性及重复性进行了评价,并初步应用于临床样本检测。结果显示,该方法的最低检测限为26 copies/μL,灵敏度是普通PCR的10倍;与其他可以引起类似症状的病原体无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3%;对156份流产羊拭子的基因组进行检测,检出率为78.21%。研究表明,该方法可以很好的应用于流产衣原体的大规模临床样本检测,为流产衣原体病的高通量检测和流行病学调查提供技术手段。     

流产衣原体检测技术与分型方法研究进展

流产衣原体(Chlamydia abortus)广泛分布于世界各地,能感染猪、牛、羊等多种家畜,引起孕畜流产,是危害畜牧业最严重的衣原体病原。针对流产衣原体抗体检测的血清学方法如间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等在兽医临床检测中广泛使用。以聚合酶链反应(PCR)为代表的病原分子生物学检测技术敏感性和特异性高,有效地弥补了血清学方法的不足。在流行病学研究中,进一步对流行菌株的分型分析在阐释流产衣原体遗传进化、毒力演变和跨物种传播以及疫情预警和疫苗研制等方面具有重要意义。论文就当前国内外广泛应用的流产衣原体检测技术和分型方法进行综述,可为我国动物衣原体病的诊断和防控提供参考。     

羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对陕西省关中某奶山羊养殖场呼吸道症状引发死亡的羔羊进行病原检测.无菌采集死亡羔羊肺脏组织接种50 mL/L绵羊血琼脂平板,分别置于恒温培养箱与厌氧培养箱中36℃±1℃培养24 h,厌氧培养平板无菌生长,恒温培养血平板上可见大量溶血的灰白色、半透明的圆形菌落,挑取单菌落纯化培养后对分离株进行染色镜检、生化鉴定、16S r...     

免疫萤光技术检测禽用活疫苗中衣原体的污染

本文主要描术字用萤光抗体技术对４０批禽病疫苗，以不同的形式进行了检测。第一，取１０批新城疫疫苗，分别用ＮＤ阳性血清中和，接种鸡胚，并任取一批与１０＾－４稀释的衣原体混合后接种鸡胚，作为阳性对照；第二，取２０批禽病疫苗直接涂片检测同时设衣原体对照；第三，取１０批ＮＤ苗，用ＮＤ阳性血清中和，接种鸡胚，同时每批苗分别为１０＾－１４衣原体稀释液混合，接种鸡胚作对照，结果４０批疫苗均未检出阳性，衣原体对照均     

测鸭出血症病毒间接免疫荧光试验的建立

为寻求一种检测鸭出血症病毒 (duck hemorrhagic disease virus,DHDV)快速、敏感、实用的方法 ,建立了间接免疫荧光试验 ,并测定了一抗 (兔抗鸭出血症病毒阳性血清 )、二抗 (FITC标记的羊抗兔 Ig G)的最佳使用浓度及最佳感作时间分别为 1∶ 2 0、6 0 m in和 1∶ 10 0、6 0 min。以建立的间接免疫荧光试验检测了 DHDV于番鸭胚成纤维细胞中的复制动态 ,结果表明 ,接毒后 36～ 6 0 h为 DHDV大量复制期 ;6 0～ 12 0 h为 DHDV从核膜以出芽方式进入胞浆中成熟的阶段 ;12 0～ 14 4 h为大量 DHDV自胞浆中释放至胞外阶段。该方法快速、特异 ,可用于该病的实验室诊断。     

羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及ELISA检测方法的建立

从疑似山羊干酪性淋巴结炎羊的肩前淋巴结脓肿内分离到2株菌,经鉴定均为羊伪结核棒状杆菌。利用羊伪结核棒状杆菌标准菌株(ATCC19410株)制成外毒素作为检测抗原,通过酶标抗体、阳性血清、外毒素抗原最适浓度的选择试验,确定适当的抗原、抗体和酶标抗体稀释浓度,建立了间接ELISA方法用于检测抗体。用建立的ELISA方法检测100份待检羊血清,其中阳性血清4份,阳性检出率为4％。     

鹅链球菌的分离与鉴定

安徽某种鹅场70—120日龄种鹅发生以败血症为特征的急性传染病。从该鹅场采集病料对该病病原进行分离，细菌学检验，并进行生化试验，动物接种试验等，证实为链球菌病。     

J-亚群禽白血病病毒中国广东野毒株的分离与鉴定

通过接种鸡胚成纤维细胞、间接荧光抗体试验(IFA)和聚合酶链式反应(PCR)从疑似J-亚群白血病的病鸡中,分离鉴定出J-亚群白血病病毒。抗J-亚群白血病病毒gp85单克隆抗体JE9的IFA试验和PCR试验均证明病鸡被J-亚群白血病病毒感染。     

绵羊骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定与成肌诱导分化

试验旨在分离绵羊骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cells,SMSCs）,建立绵羊SMSCs体外分离、培养及鉴定体系,为后续研究提供种子细胞。以新生健康绵羊为试验动物,采用胶原酶Ⅳ和胰酶两步酶消化法和差速贴壁法分离并纯化SMSCs。用RT-PCR和免疫荧光法鉴定SMSCs标记基因配对盒基因7（paired box 7,Pax7）、结蛋白（Desmin）和生肌调节因子1（myogenic regulatory factors 1,MyoD1）的表达情况;用血清撤离法诱导SMSCs向成肌细胞方向分化,成肌诱导后观察肌管的形成,免疫荧光法检测成肌分化特异性标志肌球蛋白重链（myosin heavy chain,MHC）的表达。RT-PCR结果显示,扩增条带与预期相符,所分离细胞表达SMSCs标记基因Pax7、Desmin和MyoD1;免疫荧光鉴定结果显示,所分离细胞表达SMSCs标记蛋白Pax7、Desmin和MyoD1;成肌诱导后镜下可见细胞相互融合形成多核的肌管,并表达成肌特异性标志MHC。本试验分离了绵羊SMSCs,建立了适用于绵羊SMSCs的体外培养体系,并成功进行了成肌诱导分化,为今后研究绵羊骨骼肌生长发育机制提供了试验材料和技术支撑。