应用参考家系信息构建猪12号染色体部分微位星位点遗传图的研究

为了提高猪１２号染色体遗传图的精度,选择德系大约克与二花脸猪通过回交方法建立了参考家系,采取了两胎共１５４头个体的血样,全血裂解法提取ＤＮＡ后,对每头猪的ＤＮＡ样品进行ＰＣＲ扩增后应用银染法检测了每头个体在猪１２号染色体上３个微卫星位点（ＳＷ１５５３,ＳＷ８７４,ＳＷ１３５０）的基因型,应用ＣＲＩＭＡＰ程序进行了统计分析,得到的３位点间的最佳排序为：ＳＷ１５５３－ＳＷ１３５０－ＳＷ８７４。其中在两个美国肉畜研究中心图中重组率为０的位点（ＳＷ１５５３,ＳＷ１３５０）上发现了重组,并与其他位点做了排序,提高了这一区域的定位精度。     

用非放射性原位杂交技术定位家猪PGD和HSL基因

用地高辛为标记物,以随机引物法标记猪ＰＧＤ ｃＤＮＡ和ＨＳＬ ｃＤＮＡ探针,经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后,将猪ＰＧＤ和ＨＳＬ基因分别定位在猪６号染色体６ｑ＾２５和６ｃｅｎ－６ｑ＾２１区域。     

猪12号染色体几个微卫星标记与部分生产性状的关系研究

众多的微卫星位点及其丰富的多态性是微卫星在各领域广泛应用的基础。在定位ＱＴＬ方面 ,现在通过建立猪资源家系 ,人们已把一些与繁殖、生长、胴体和肉质等方面有关的数量性状位点定位在某些微卫星附近。例如 ,3号染色体上微卫星ＳＷ2 4 2 7-ＳＷ2 51区域与猪的日增重、4号染色体上Ｓ0 1 0 1 -Ｓ0 1 0 7区域与背膘、腹脂、7号染色体上Ｓ0 0 64-Ｓ0 0 66区域与胴体组成和初生重有着很大的关联[1] 。 1 2号染色体为最短的中部着丝粒染色体 ,因与猪生产性状紧密相关的生长激素 (ＧＨ)基因位于其上而倍受重视[2 ,3] 。虽然目前对ＧＨ基因研究得…     

猪二价染色体上双色引物原位标记技术初探

人性成熟的猪睾丸中获得比有丝分裂中期明显要长的二价体，采用红、绿两种颜色的报告分子（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ和ｉｏ－１６－ｄＵＴＰ）来标记不同染色体ＤＮＡ的特 目的序列，得到了标记信号。由此探索了一种在猪二价染色体上能同时检测两种不同 列的绰物原位标记（ＰＲＩＮＳ）技术。讨论了影响双色和ＰＲＩＮＳ技术的几个因素。     

猪MHCⅠ类基因区基因组DNA的RFLP初步分析

用４种限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ，ＨｉｂｄⅢ和ＲｓｔＩ对纯种二花脸猪和梅山猪白细胞基因组ＤＮＡ进行内急酶消化和电泳，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ将ＤＮＡ转移到ＮＣ膜上，将来源于猪ＭＨＣ的Ⅰ类基因猪移植抗原基因片段克隆ＰＤ１－ＡＤＮＡ（４．３ｋｄ）用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，进行分子杂交反应，比较了不同品系和个体间的限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ），结果表明：（１）经各种     

组织型纤溶酶原激活剂cDNA真核表达质粒的构建与鉴定

将组织型纤溶酶原激活剂基因ｃＤＮＡ经多次亚克隆插入到真核表达载体ｐＳＶＬ的ＳＶ４０启动子和ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,构建了重组表达质粒ｐＳＶＬ－ｔＰＡ和ｐｃＤＮＡ３－ｔＰＡ。经酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,ｔ－ＰＡ基因的插向正确,可用于哺乳动物细胞和个体表达系统中表达。     

龙眼和荔枝染色体DNA的提取与鉴定

以龙眼“大乌圆”和荔枝“三月红”两个品种的幼叶和果实组织为试材，采用有细胞核被裂解之前，去除细胞质中的酚类物质和蛋白质，而后用ＳＤＳ裂解细胞核，异丙醇和乙醇沉淀染色体ＤＮＡ的方法，成功地从两种不同组织中提取和纯化了两种果树的染色体ＤＮＡ，ＤＮＡ的得率介于２８６￣３１４μｇ／ｇＦＷ之间，凝胶电泳显示无明显解现象，适宜作为ＰＣＲ模板应用，并成功地进行特异性基因扩增。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

棉花DNA导入苎麻的RAPD验证

为了寻找通过超干胚浸泡法已经将湘棉１２号ＤＮＡ导入苎麻湘苎３号基因组中的分子证据,对所产生的变异后代进行了ＲＡＰＤ验证,所用８０个随机引物中,有６个引物检测出变异材料９７－２４与受体的ＤＮＡ多太 ,３个引物检为异材料９７－２８与受体的多太,４个引物检为异材料９７－４与受体的多态性,并且有２个引物在变异后代中扩增出供体特异带,这些结果说明棉花ＤＮＡ导入苎麻后引起了后代基因组的变异。     

Scu—PA／t—PA基因cDNA在小鼠体内的表达

将Ｓcu－ＰＡ/t－ＰＡ两种基因cＫＮＡ所构建的表达载体pＳＶ２－ＳcuＰＡ,pcＤＮＡ３－ＳcuＰＡ及pcＤＮＡ３－tＰＡ混合后注入小鼠骨骼肌,观察了基因混合注射在小鼠体内 的表达情况。体外凝血试验结果显示,质粒注射后第３天凝血时间开始延长,约两周后凝血时间延长幅度最大。第１８天体内诱导产生ＤＩＣ,体外凝血时间试验组仍较空白对照组延长一倍以上,抗凝效果明显。相等基因水平下,混合基因注射表达水平和单独基因注射没有     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ－２－ＵＫ分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达

将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。     

南荻的染色体核型模式

观察分析了湖南洞庭湖区南荻变种“突节荻”的染色体核型．结果如下：２ｎ＝３８＝２２ｍ＋８Ｓｍ（４ＳＡＴ）＋２Ｓｔ＋６Ｔ，ｘ＝１９；１，２，３，４，６，７，９，１０，１１，１２，１３号染色体为ｍ；５，８，１４，１８号染色体为Ｓｍ；１５号染色体为Ｓｔ；１６，１７，１９号染色体为Ｔ；５号和８号两对染色体为随体染色体．染色体绝对长度平均４．６３μｍ，相对长度平均５．３６％．最大与最小臂比值分别为８．４３和１．００，平均２．６６．最长与最短染色体的比值为３．００，臂指数在５０％～８９．３９％之间，平均６４．６７％，其核型属于Ｓｔｅｂｂｉｎ的２Ｂ类型     

生殖激素诱导母牛双胎效果及同理研究

用生殖激素（ＰＭＳＧ和纯化的ＦＳＨ）诱导母牛双胎进行了试验研究。ＰＭＳＧ处理组：选产后５０ｄ以上１２头参试母牛，接其发情顺序随机分成３个组，每组４头牛，３组在发性周期的第１０ｄ分别向肌注ＰＭＳＧ２０００ＩＵ，１６５０ＩＵ，１３５０ＩＵ，间隔４８ｈ再肌注氯前列烯醇２支（４ｍＬ），发情后接常规进行人工授精，同时再肌注与ＰＭＳＧ等量的抗ＰＭＳＧ，间隔１２ｈ再输精１次。上述３组牛系组随机选２头牛在输第一次     

含6x小黑麦血缘的抗病小麦新材料的选育及醇溶蛋白分析

３ 个６ｘ 小黑麦品种和２ 个普通小麦品种杂交回交,选育出ＮＲ９８９２ 等１１ 个系群２１６ 个株系,其中大部份抗条锈病或（ 和） 白粉病。应用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＡＰＡＧＥ） 分析了ＮＲ９８９２ 系群的６４ 个株系及其亲本Ｃｕｒｒｅｎｃｙ、小偃６ 号和川育１２ 号的醇溶蛋白。结果表明：１７－１９ ％ 的株系含有黑麦１ＲＳ所特有的Ｇｌｄ１Ｂ３ 位点,５７－８１ ％ 的株系在Ｇ１ｉ－ ２ 位点发生了普通小麦与６ｘ 小黑麦遗传物质重组;６４ 个株系中出现了１ 种亲本类型,３ 种重组类型和３ 种突变重组类型,突变率１７－１９％ 。文中还讨论了６ｘ 小黑麦向普通小麦导入有用遗传物质的育种方法。     

在白色杜洛克×二花脸F2资源家系中定位影响猪210日龄8个体尺性状的QTL

 【目的】通过测量猪体长、体高、管围、胸围、胸宽、胸深、腹围和腿臀围等8个体尺性状,应用全基因组扫描定位影响猪体尺性状的数量性状位点(QTL)。【方法】在210日龄,活体测量白色杜洛克×二花脸资源群体129头F2个体的上述8个体尺性状,利用分布于猪18条常染色体和X染色体上的183个微卫星标记,对这129头F2个体及其父母和祖代亲本进行基因型检测。应用基于最小二乘线性回归分析的复合区间作图法在QTL Express进行在线QTL定位分析,并通过1 000次的Permutation来确定不同显著水平的临界值。【结果】在8条染色体上共检测到19个影响猪体尺性状的QTL,其中位于4和7号染色体上的5个QTL达到基因组1%显著水平,位于2和7号染色体上的2个QTL达基因组5%显著水平,但是没有检测到影响胸深的QTL。【结论】影响猪体尺性状的QTL位点大多数分布于不同染色体区域,QTL所解释的表型方差介于5.23%—41.58%。白色杜洛克和二花脸中均存在增加表型值的有利等位基因。     

不结球白菜抗病育种的研究：Ⅷ.矮抗五号和矮抗六号新品种的 …

在抗芜菁花叶病毒和霜霉病研究工作的基础上，利用杂种优势育种技术，以ＳＷ－１３自交不亲和系为母本，Ｖ－１２６和Ｘ－１８９自交系为父本，选育出综合性状优良的矮抗五号和矮抗六号新品种。其特点：（１）丰产：生产试验平均产量分别达５７．２和６３．６ｔ／ｈｍ＾２，比对照矮抗一号分别增加１２．８％和２５．３％；（２）抗病；两品种ＴｕＭＶ，霜霉病，黑斑病人工鉴定病情指数分别为４．０１（ＨＲ），１２．９６（Ｒ）和     

二花脸猪FSH β亚基位点PCR-SSCP标记与产仔数关系初探

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ－ＳｉｎｇｌｅＳｔｒａｎｄＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）作为遗传标记,对二花脸猪ＦＳＨβ亚基位点与产仔数性状的关系进行了研究。二花脸猪在被扩增位点有较大的变异,而在作为对照品种的大约克猪中则完全纯合。两品种在该位点基因频率差异显著。以标记基因型为因子,分别对二花脸猪群体的头胎产仔数、头三胎产仔数之和以及最高产仔数进行方差分析。结果表明,该标记位点与产仔数性状显著相关,其贡献率达到１０％以上。本文还就产仔数指标的选择作了讨论。     

全基因组关联分析鉴别白色杜洛克×二花脸F2资源家系中猪阴囊疝易感基因位点的鉴定

【目的】通过基于单倍型的病例-对照全基因组关联分析(GWAS)鉴别白色杜洛克×二花脸F2资源家系中影响猪阴囊疝的易感位点及位置功能候选基因,并在远缘纯种猪阴囊疝三联体核心家系（Trio）群体中进行重复验证。【方法】利用Illumina porcine 60K SNP芯片对1 020头白色杜洛克×二花脸F2资源家系阴囊疝群体(包含19个阴囊疝患病个体)进行扫描获取基因型。通过Plink v1.07软件对基因型数据进行质量控制;剔除个体基因型检出率< 90%的个体,剔除SNP位点检出率< 90%、哈迪温伯格平衡卡方检验P≤10-3和最小等位基因频率< 0.05及性染色体上和无法定位的SNP位点。质控合格的SNP位点用PHASEBOOK构建出F2资源家系中每个个体的单倍型,并采用隐马尔可夫模型将其归类到数目预先定义的祖先单倍型中。使用基于广义线性混合模型的GLASCOW软件进行利用祖先单倍型的病例-对照全基因组关联分析。采用保守的Bonferroni校正方法得到基因组显著水平和染色体显著水平的阈值。对F2资源家系中达到染色体显著水平的易感SNP位点在包含237个患病个体的远缘纯种猪阴囊疝三联体核心家系(Trio)群体中进行同样的质控,并利用Haploview软件对质控合格的SNP位点分别展开基于单点和基于单倍型的传递不平衡分析(TDT),进行重复验证。【结果】白色杜洛克×二花脸F2资源家系中全部个体的38 033个SNP标记通过质控。在GWAS分析中,共发现108个达染色体显著水平(P<2.63×10-5)的猪阴囊疝关联SNP位点,分别位于染色体2、8和17上,最强相关的SNP位点位于17号染色体上。在远缘三联体核心家系群中,724个个体的96个SNP位点通过质控。对质控合格的SNP位点进行基于单点的TDT分析,结果发现5个显著相关的SNP位点得到重复验证(P<0.05),其中2号染色体上有1个SNP位点和17号染色体上有4个SNP位点,分别位于IQGAP2,CHMP4B,SERINC3,ZNF334 等4个基因内或其上下游。基于单倍型的TDT验证分析发现两个易感单倍型框,其中与基于单点TDT验证分析有重合的仅有SSC17上CHMP4B内及下游的两个易感位点。结合疝气发生机制及TDT分析结果,推测IQGAP2和CHMP4B可能是影响猪阴囊疝发生的两个重要的位置功能候选基因。【结论】本研究利用基于小样本的GWAS分析和较大样本群验证分析,在SSC2和SSC17上分别鉴别1个和4个阴囊疝易感位点,在SSC17上鉴别到两个易感单倍型。易感位点附近的2个基因IQGAP2和CHMP4B可能是影响猪阴囊疝发生的位置功能候选基因,值得进一步研究。     

Na2CO3胁迫对不同草坪品种O2-产生及SOD活性的影响

以８个草坪品种为试验材料,研究了用１２．５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１Ｎａ２ＣＯ３处理后对其Ｏ２＾－的生成速率和ＳＯＤ活性影响。结果表明,在Ｎａ２ＣＯ３胁迫初期。８个草坪品种的叶片中Ｗ２＾－的生成速率都很低,随着胁迫天数的增加。Ｏ２＾－的生成速率逐渐增加,除了“午夜”和“派尼”两品种外,在第５ｄ均有下降的趋势;ＳＯＤ活性与处理前相比均有不同程度的升高,且随着胁迫天数的增加。ＳＯＤ活性继续升高,除“猎狗”品种