实时荧光RT-PCR方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光RT-PCR(Real time RT-PCR)检测方法.该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现PCR扩增与检测同步进行.结果表明,实时荧光RT-PCR方法检测灵敏度比普通RT-PCR高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制

采用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒的外壳蛋白基因与3,非编码区,并将其构建到马铃薯X病毒(PVX)载体中.重组质粒经线性化及体外转录后接种烟草,获得含有病毒外壳蛋白基因的感病植株.感病组织可用于分子检测的质控,也可作为毒源来繁殖阳性参照物质.基于PVX载体制备的参照物质可降低检疫性病毒的生物安全风险,尤其对稳定性强、可造成严重经济损失的高风险病毒的检疫更具实用价值.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒北京和山东分离物的生物学测定及其基因组比较

为揭示黄瓜绿斑驳花叶病毒的分子流行学特征,通过RT-PCR和cDNA克隆技术获得并分析了从北京甜瓜和山东西瓜上分离的2个黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)分离物CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong的全序列.结果表明CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong的基因组分别由6423和6427个核苷酸组成,包括5'及3'端非编码区和4个开放性的阅读框,分别编码129kDa和186kDa复制相关蛋白、29kDa的移动蛋白及17.4kDa的外壳蛋白.寄主范围测定显示在供试的6科11种植物中CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong均可侵染葫芦科的葫芦、南瓜和西瓜以及茄科的本氏烟和藜科的苋色藜,不侵染供试的其它植物.CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong基因组的核苷酸同源性为99.5%,186kDa蛋白的核酸和氨基酸同源性分别为99.7%和99.8%,移动蛋白的核酸和氨基酸同源性分别为99.3%和98.1%,外壳蛋白的核苷酸同源性为100%.多序列比对分析结果显示,CGMMV的各分离物之间的分子差异并不明显,核苷酸同源性均在98%以上.将CGMMV-Beijing和CGMMV-Shandong与侵染葫芦科植物的烟草花叶病毒属其它成员比较,结果显示其亲缘关系较远,基因组的核苷酸同源性介于56.7%～59.6%,外壳蛋白的氨基酸同源性在44.7%～54.0%之间.综合分析显示,CGMMV分离物之间的差异并不明显,可能具有共同的侵染来源.     

山东省黄瓜种质资源概况

山东省的黄瓜种质资源丰富。经过“七五”至“九五”期间十几年的努力，在全省５０多个市、县、区收集到黄瓜品种资源共２０７份（其中１５份是变异材料），约为全国总数１３％。这些材料基因类型多，并多数用于杂交育种。有些地方品种经多代选育已成为生产上的良种。 从熟性、第一雌花节位、瓜形、皮色、刺瘤、刺色、风味、抗病性等７个方面阐述，供育种者参考。１熟性现有２０７份种质材料的熟性差别很大。同期播种的商品根瓜始收日数相差近２０天。从播种至根瓜采收日期小于等于６０天为早熟，６１～６９天为中熟，７１天以上为晚熟。据…     

高抗烟草花叶病毒的烟草种质资源筛选

为了解我国烟草种质资源对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抗性状况,为烟草抗病育种的亲本选择提供信息,本试验通过苗期TMV汁液摩擦接种,对1 191份烟草种质资源进行了TMV抗性鉴定.筛选出的对TMV表现为枯斑反应的高抗资源有:白肋烟40份、国内烤烟20份、国外烤烟28份、晒烟1份,合计89份.接种后21 d表现为花叶的资源有:白肋烟29份、国内烤烟430份、国外烤烟270份、国内晒烟352份、国外晒烟(雪茄烟)21份,合计1 102份.枯斑资源的比例白肋烟＞烤烟＞晒烟.云南省烟草农业科学研究院2006年保存白肋烟、烤烟和晒烟资源合计1 652份,本试验较系统的鉴定了72％种质资源的TMV抗性状况,可为种质资源的育种利用提供参考.     

大豆种质资源抗大豆花叶病毒的鉴定

在温/网室人工接种高病害压的条件下,对筛选的300份综合农艺性状优良的大豆种质资源进行抗大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)流行株系SC3和SC7的鉴定.结果表明,对SMV流行株系SC3表现抗病(高抗和抗病)的品种有84份,占鉴定品种的28.0％,对SC7表现抗病的有105份,占35.0％;兼抗SC3和SC7的有60份,占鉴定的20.0％;其中对SC3和SC7均表现高抗的品种如皖豆16、晋遗21、M0633和P9594等抗病资源用于大田生产将对SMV的流行起到控制作用.研究还发现,地方品种对强毒株系SC7有着较多的抗性资源,来自山西的4份种质资源对SC3和SC7的抗性均在中抗以上,可作为抗源用于抗病品种选育和与抗性相关的研究.对300份大豆种质资源的小区平均产量分析发现,高抗SMV品种的小区平均产量(514.39g)与高感品种的小区平均产量(517.34g)没有显著差异,由此可初步推测育成抗SMV且高产的品种是可能的.     

木槿花粉活力检测方法筛选

摘 要：以2个木槿（Hibiscus syriacus）品种花粉为材料,用TTC法和离体萌发法对木槿花粉活力进行了检测。结果表明：木槿花粉活力检测不适合用TTC法;以木槿花粉为外植体,采用蔗糖悬浮溶液为培养基,确定适合木槿花粉萌发的条件为15%蔗糖溶液+15 mg/L硼酸在30 ℃恒温培养箱中培育0.5 h即开始开始萌发。     

基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒

黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大.农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法.本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并...     

山东葫芦科蔬菜上病毒病种类检测及黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定

为了检测和鉴定山东地区葫芦科蔬菜上病毒病种类,从山东诸地11个蔬菜种植区采集了867个葫芦科蔬菜疑似感病样品。利用黄瓜花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、西瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、小西葫芦黄花叶病毒、南瓜花叶病毒、甜瓜黄斑病毒、瓜类褪绿黄化病毒、李属坏死环斑病毒及甜瓜坏死斑点病毒等特异性引物对疑似感病样品分别进行RT-PCR检测,各病毒检出率分别为34.8%,10.4%,20.0%,41.7%,27.0%,7.8%,2.6%,1.7%,0,0.9%。表明除PNRSV外,其他9种病毒在山东各地均有发生,且CMV和TMV发病率较高,2种或2种以上病毒复合侵染也很普遍。同时为明确山东地区CMV分离物的株系分化状况,选取11个地区有代表性的CMV阳性样品,测定其外壳蛋白(Coat protein,CP)和RNA3核苷酸序列并进行序列比对和进化分析,结果显示侵染山东地区葫芦科蔬菜的CMV分离物均属于IB亚组,与韩国分离物As(AF013291)相似性最高,未发现其他株系。     

烟蚜传播黄瓜绿斑驳花叶病毒的可能性及方式

为确定烟蚜体内携带的是否为黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）,采用RT-PCR和序列测定方法对其进行鉴定。本研究通过采集湖南宁乡、郴州、浏阳三个地区的田间烟蚜,提取RNA后反转录成cDNA,并以cDNA作为模板,通过设计引物进行PCR扩增,摇菌后测序。测序结果显示,在烟蚜体内扩增出与黄瓜绿斑驳花叶病毒相似度为99%的RNA病毒。对包括该分离物在内的22个基因核苷酸序列进行同源性比较和系统进化树构建,并结合地域来源进行分析,结果表明烟蚜体内的黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)来源于其携带的CGMMV。通过分析推测,烟蚜可传播黄瓜绿斑驳花叶病毒,且传毒方式为持久性。     

棚栽嫁接西瓜种栽地土壤黄瓜绿斑驳花叶病毒病带毒性研究

为明确棚栽嫁接西瓜地耕作层土壤黄瓜绿斑驳花叶病毒病的带毒情况,以棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病病株根部为中心按向边膜和相邻植株2 个不同方向分别采集植株根部以及距植株根部40、80 cm的表土(0~5 cm)、深土（与表土取样点相对应,距表土23~27 cm深）,及取病地不同耕作方式后的土壤,进行双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELLSA)检测以确定土壤的带毒性。结果发现：根围土壤带毒率检测中,健康株与隐症带毒株均不带毒,显症病株中,根部、边膜方向距根部40 cm和80 cm、相邻植株方向距根部40 cm和80 cm,5 个取样点的带毒率表土依次为100%、80%、70%、40%、20%,深土依次为80%、50%、50%、40%、30%;病地不同耕作方式后的土壤带毒检测中,西瓜—水稻—芋头未检测到病毒,西瓜2 年连作与3 年连作带毒率均高于90%,表土自然消解1 年、西瓜—水稻—西瓜、西瓜—蔬菜—西瓜、西瓜—蔬菜—春玉米、西瓜—蔬菜—水稻、西瓜—甘蔗—水稻的带毒率则依次为50%、42.86%、35%、30%、24%、20%。说明病株表土带毒率高于深土,离病株根部越近,或者病株藤蔓覆盖越茂盛,土壤带毒率越高;轮作对病地土壤中的病毒有降解作用。     

3种方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）的灵敏度对比分析

本研究以黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染的黄瓜叶片为材料,应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、核酸斑点杂交（NASH）技术,进行了检测灵敏度比较研究。三种检测方法灵敏度实验结果表明：RT-PCR检测灵敏度高于地高辛标记的核酸斑点杂交技术,以血清学为基础的DAS-ELISA检测灵敏度最低。通过灵敏度对比分析得出,核酸斑点杂交技术可以替代RT-PCR应用于基层的检疫检测。     

棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病发病动态及其田间扩展研究初报

为明确棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒病发生规律,对该病害的发病、蔓延和影响因素进行研究。毛竹搭建塑料大棚,无毒土壤上常规或低密度移栽健康嫁接西瓜苗,移栽后6、30天剪除部分瓜苗顶叶或倒2叶约半片后,将伤口浸渍在毒源中进行接种诱发,常规密度移栽苗自然生长,低密度移栽苗经整枝始终保持单株独立;健康植株用毒源污染剪刀、手指后整枝或毒源与健康藤蔓摩擦诱发。调查病田病株自然扩展以及拔除清除病健株后直播种子和套种瓜苗的控病效果。目测法定期调查显症病株,酶联免疫双抗体夹心检测法确定病株。接种后植株染病率高。低密度移栽苗：移栽后6天接种的瓜苗24天显症、34天突增、85天高峰,分别比移栽后30天接种的植株长4、4和30天;未接种的也在移栽后70天显症、95天高峰。常规密度移栽苗接种株也有类似趋势。显症病株率和带毒株率与日平均温度关系密切。病株中不同藤蔓上的叶片和相同藤蔓内的叶片既表现显症,也有隐症,甚至终生带毒隐症。病健藤蔓摩擦病株率100.0%,而染毒手指、剪刀整枝病株率则为91.7%和83.3%。病田内病情自然扩展先相邻连续,后点片;病地拔除清除病健株后,直播瓜苗和套种嫁接苗带毒株率分别为82.4%和77.0%,控病效果17.6%和23.0%。棚栽嫁接西瓜苗（植株）从感染黄瓜绿斑驳花叶病毒病到表现症状需要20天左右的潜伏期,继之产生显症病株突增和高峰,温度高,潜伏期短、进入突增和高峰快;隐症病株表现在株间、不同分枝藤蔓叶片间和相同藤蔓不同叶片间;移栽密度对发病无明显影响。田间扩展再侵染先相邻后点片,除了其他途径外,病健藤蔓接触摩擦传病作用大;病地当年连作重发的机率高。     

京郊设施蔬菜黄瓜花叶病毒的检测

为了明确北京地区设施蔬菜上常见病毒的发生情况,利用ELISA和RT-PCR方法对京郊设施蔬菜中的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)进行检测。共采集设施栽培的芹菜、观赏南瓜、结球生菜、大南瓜、辣椒、抱子甘蓝、番茄（‘大红袍’和‘红罗马’品种）、四棱豆、茄子共10个蔬菜作物样品的叶片进行测定。结果显示：芹菜、观赏南瓜、结球生菜、辣椒、茄子和番茄‘大红袍’品种的样品含有CMV,大南瓜、抱子甘蓝、四棱豆和番茄‘红罗马’品种的样品未检测到CMV。ELISA和RT-PCR检测结果一致,将检测结果为阳性样品的RT-PCR产物进行了序列测定和分析,验证了检测结果的可靠性。     

辣椒抗黄瓜花叶病毒病研究进展

黄瓜花叶病毒（CMV）病是影响辣椒生产的主要病害,是辣椒抗病育种的主攻目标。分子标记辅助选择育种可有效地克服传统育种的缺陷,加速育种进程。分子标记的开发依赖于基础研究,辣椒基因组数据的公布为辣椒抗CMV研究提供了一个新的契机。所以本研究就黄瓜花叶病毒的危害、辣椒抗源材料的筛选和抗性鉴定、抗性遗传规律分析及抗性基因定位等方面进行了总结归纳,为进一步辣椒抗CMV研究和分子标记辅助育种提供一定的理论参考。     

黄瓜花叶病毒番茄蕨叶分离物外壳蛋白基因的克隆和序列分析

在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术对其CP基因片段进行了扩增并克隆,获得了含该基因全长657 bp的cDNA片段。序列测定与比较分析结果表明,北京地区造成番茄蕨叶的CMV分离物CP基因片段核酸序列与GenBank上CMV亚组Ⅰ其他分离物同源性高达90%～99%,属于CMV亚组Ⅰ。该分离物与分离于我国芭蕉的另一亚组Ⅰ分离物GB同源性为94.37%,两分离物之间存在寄主适应性变异。