谷氨酸棒状杆菌在乙酸盐和葡萄糖基质上的蓝白生长筛选(英文)

在谷氨酸棒状杆菌乙酸盐代谢调控关键酶-异柠檬酸裂解酶aceA基因两段启动子区域后面组装了无启动子的β-半乳糖苷酶报道基因,并且带上四环素抗性标记基因构建了两个检测质粒pROH7 和pROHO.通过该两个质粒转化了谷氨酸棒状杆菌野生型菌株Corynebacterium glutamicum ACTT 14752,分别获得了含有两个检测质粒的两种谷氨酸棒状杆菌,由此建立了谷氨酸棒状杆菌在乙酸盐和葡萄糖基质上的两个蓝白生长筛选系统.结果显示当两种菌株生长在含有葡萄糖的基本培养基上时呈现白色菌落,而生长在含有乙酸盐的基本培养基上时呈现蓝色菌落;其中菌落颜色还随菌株中检测质粒pROH7 和pROHO的不同而呈现淡蓝色和深蓝色的变化.含有检测质粒pROH7 和pROHO菌落的颜色变化反映了细胞在葡萄糖和乙酸盐不同和碳源上的调控状态,该两个质粒在鉴定乙酸盐代谢中的调控变化方面是有积极意义.     

ICL、ICDH、ODH和GDH酶与L-谷氨酸的合成

通过对对数生长期细胞的异柠檬酸裂解酶（ICL）、异柠檬酸脱氢酶（ICDH）、α-酮戊二酸脱氢酶（ODH）和谷氨酸脱氢酶（GDH）的分析以及对细胞L-谷氨酸产生量和发酵残糖的综合分析,发现由于乙醛酸循环关键酶ICL的缺失,L-谷氨酸产生量大幅下降,说明乙醛酸循环是谷氨酸棒杆菌中的主要回补途径,L-谷氨酸合成需要乙醛酸循环。在保证乙醛酸循环回补功能的前提下,提高ICDH活性,减弱ODH活性,有利于L-谷氨酸的合成。     

基于pGhost4系统保加利亚乳杆菌乙酸激酶敲除载体的构建

保加利亚乳杆菌凭借其微生物特性和效能优异等特点成为当下产乳酸最重要的微生物菌株之一。乙酸是保加利亚乳杆菌代谢乳酸最主要的副产物,它的大量生成降低葡萄糖的代谢利用率,并且消耗了能量。乙酸激酶是控制乙酸生成的关键酶,敲除乙酸激酶基因,理论上可以阻断戊糖磷酸途径中乙酸的生成,从而优化代谢途径提高葡萄糖代谢乳酸的利用率。研究以Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ATCC 11842公布的乙酸激酶基因ack序列设计引物,以保加利亚乳杆菌基因组DNA为模板,PCR克隆出ack上下游片段,利用重叠PCR技术将上下游片段拼接在一起,并连入具有温敏性的p Ghost4载体。     

外源硝态氮对盐胁迫下马齿苋谷氨酸积累及其代谢酶活性的影响

为了阐明外源硝态氮对盐胁迫下马齿苋谷氨酸积累及其代谢酶活性的影响,采用石英砂砂培试验,以苏马齿苋2号为材料,设定3个NaCl浓度[S_1(0 mmol/L)、S_2(50 mmol/L)、S_3(100 mmol/L)],4个外增硝态氮浓度[N_0(0 mmol/L)、N_1(8 mmol/L)、N_2(10 mmol/L)、N_3(12 mmol/L)],培养15 d后对马齿苋各项指标进行测定。结果表明,在S_2盐分处理下,马齿苋生物量、可溶性蛋白含量、谷氨酸含量以及谷氨酸合成酶活性、谷氨酸脱氢酶活性明显高于S_1盐分处理。在S_3盐分处理下,各指标数值明显降低。整体上看,外源硝态氮的添加可增加S_1、S_2盐胁迫下马齿苋生物量、可溶性蛋白含量、谷氨酸含量以及谷氨酸合成酶的活性,基本呈现N_2N_3N_1N_0的趋势,但对盐胁迫下马齿苋谷氨酸脱氢酶活性的影响不显著。由此可见,外源硝态氮可有效促进盐胁迫下马齿苋中谷氨酸的积累,提高其代谢关键酶活性,以S_2N_2处理(50 mmol/L NaCl浓度,10 mmol/L外源硝态氮浓度)效果最佳。     

沿海滩涂盐生植物生境土壤酶活性的差异

滩涂盐生植物群落演替与土壤生物、土壤酶有关联,研究表明,盐城滩涂盐碱土营养成分较脱盐种植的水稻田中少,盐分明显偏高。水稻田土壤酶活性与盐生植物生境土壤的相比,脲酶和磷酸酶活性较高,氧化酶活性较低。盐生植物生境土壤中脲酶活性大小是芦苇>互花米草>盐地碱蓬,磷酸酶活性大小顺序为互花米草>芦苇>盐地碱蓬,氧化酶活性差异是互花米草>盐地碱蓬>芦苇,活性差异与酶代谢特点、植物环境差异有联系。     

反刍月形单胞菌乙酸生成缺陷株的构建及相关酶活性分析(英文)

[目的]构建反刍月形单胞菌乙酸生成的缺陷株并分析其发酵特性。[方法]应用转座子标签法,通过转座子供体菌E.coliS17-1/pZJ25∷Tn5对受体菌反刍月形单胞菌进行转座子诱变,采用含卡那霉素和氟乙酸纳的选择性培养基筛选接合子。[结果]共筛选出稳定的对卡那霉素和氟乙酸具有抗性的转座工程菌7株。对反刍月形单胞菌的突变株进行16SrRNA鉴定和Tn5的PCR鉴定,及乙酸激酶(AK)和磷酸乙酰转移酶(PTA)酶比活力分析,确定突变株属于pta基因缺失型氟乙酸抗性菌株。[结论]为进一步研究反刍兽瘤胃微生物乙酸的细胞代谢网络和调控奠定基础。     

反刍月形单胞菌乙酸生成缺陷株的构建及相关酶活性分析

[目的]构建反刍月形单胞菌乙酸生成的缺陷株并分析其发酵特性。[方法]应用转座子标签法,通过转座子供体菌E.coliS17-1/pZJ25∷Tn5对受体菌反刍月形单胞菌进行转座子诱变,采用含卡那霉素和氟乙酸纳的选择性培养基筛选接合子。[结果]共筛选出稳定的对卡那霉素和氟乙酸具有抗性的转座工程菌7株。对反刍月形单胞菌的突变株进行16S rRNA鉴定和Tn5的PCR鉴定,及乙酸激酶（AK）和磷酸乙酰转移酶（PTA）酶比活力分析,确定突变株属于pta基因缺失型氟乙酸抗性菌株。[结论]该研究为进一步研究反刍兽瘤胃微生物乙酸的细胞代谢网络和调控奠定基础。     

丙酮酸转运抑制剂对荔枝酿酒酵母代谢醋酸的影响

为降低荔枝酒中挥发酸含量,以同时利用可发酵性糖和乙酸的酿酒酵母为出发菌株,研究丙酮酸转运抑制剂对酿酒酵母代谢醋酸的影响。结果表明:在荔枝酒酿造过程中,添加0.5~0.75mmol/L的α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-CCA)对酿酒酵母代谢醋酸具有显著影响,促使酿酒酵母表达较高的乙醇脱氢酶(ADH)、乙酰辅酶A合成酶(ACS)、异柠檬酸裂解酶(ICL)和苹果酸合成酶(MS)的酶活性,提高酿酒酵母代谢醋酸的能力。添加0.5mmol/L的α-CCA,酿酒酵母代谢醋酸的量比对照提高150mg/L。     

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为降低荔枝酒中挥发酸含量,以同时利用可发酵性糖和乙酸的酿酒酵母为出发菌株,研究丙酮酸转运抑制剂对酿酒酵母代谢醋酸的影响.结果表明:在荔枝酒酿造过程中,添加0.5～0.75 mmol/L的α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-CCA)对酿酒酵母代谢醋酸具有显著影响,促使酿酒酵母表达较高的乙醇脱氢酶(ADH)、乙酰辅酶A合成酶(ACS)、异柠檬酸裂解酶(ICL)和苹果酸合成酶(MS)的酶活性,提高酿酒酵母代谢醋酸的能力.添加0.5 mmol/L的α-CCA,酿酒酵母代谢醋酸的量比对照提高150 mg/L.     

运城盐湖9种盐生植物几种防御酶活性的研究

对运城盐湖9种盐生植物几种防御酶活性进行了测定。结果表明：盐生植物的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性均较高,普遍高于非盐生植物;植物地上部分中SOD、POD和CAT的活性高于其地下部分。     

The selective cause of an ancient adaptation

Phylogenetic analysis reveals that the use of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) by prokaryotic isocitrate dehydrogenase (IDH) arose around the time eukaryotic mitochondria first appeared, about 3.5 billion years ago. We replaced the wild-type gene that encodes the NADP-dependent IDH of Escherichia coli with an engineered gene that possesses the ancestral NAD-dependent phenotype. The engineered enzyme is disfavored during competition for acetate. The selection intensifies in genetic backgrounds where other sources of reduced NADP have been removed. A survey of sequenced prokaryotic genomes reveals that those genomes that encode isocitrate lyase, which is essential for growth on acetate, always have an NADP-dependent IDH. Those with only an NAD-dependent IDH never have isocitrate lyase. Hence, the NADP dependence of prokaryotic IDH is an ancient adaptation to anabolic demand for reduced NADP during growth on acetate.     

Microbodies in germinating fern spores: evidence for glyoxysomal activity

Enzymes of the glyoxylate cycle, isocitrate lyase and malate synthase, are active during the germination of spores of the fern Dryopteris filix-mas. Increases in activity of both enzymes are correlated with the breakdown of lipid reserves. The occurrence of these enzymes suggests that the microbodies previously described in these spores are glyoxysomes.     

华北落叶松和日本落叶松种子超干保存活力和生理特性研究

采用室温硅胶干燥法,研究了超干处理和加速老化(50℃,30 d)对华北落叶松和日本落叶松种子活力和生理特性的影响.对2种落叶松不同含水量种子老化前后的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、相对电导率、脱氢酶活性和异柠檬酸裂解酶进行测定.结果表明:含水量50～28 g/kg的华北落叶松和含水量48～28 g/kg的日本落叶...     

甘蓝型杂交油菜种子胎萌发生及其对种子质量的影响

研究了甘蓝型杂交油菜杂种秦油 2号、不育系陕 2 A和保持系陕 2 B种子胎萌发生情况及其对种子质量的影响 .结果表明 :这些种子的胎萌发生在开花后 19d左右 ,并随着种子发育日趋成熟而有不断增多的趋势 ,而常规品种垦 C1种子胎萌发生在成熟后期 (开花后 31d) .甘蓝型杂交油菜种子因胎萌引起生活力和活力降低 ,种子胎萌也引起种子含油量下降和可溶性糖含量升高 ,但是对种子蛋白质含量无明显影响 ,这可能与种子胎萌时相应代谢途径中关键酶异柠檬酸裂解酶活性上升有关     

茂丰6%抗坏血酸水剂对烟草花叶病毒活性及生化机制的影响

采用半叶法测定了经茂丰6%抗坏血酸水剂处理的烟叶抗烟草花叶病毒(TMV)的活性-钝化、保护及治疗的作用,检测了经茂丰诱导后烟叶中抗性相关酶系-苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性及叶绿素含量。结果表明,其抗性相关酶系及叶绿素含量的增加与茂丰诱导的抗病作用密切相关,即茂丰具有抗TMV活性和明显的治疗、保护作用。     

脐橙果实发育过程中有机酸代谢相关酶的研究

以罗伯逊脐橙为试材,研究了脐橙果实有机酸代谢相关酶的活性变化动态,及其与果实有机酸积累关系,旨在探索影响脐橙果实有机酸含量的重要酶。结果表明:果实有机酸的积累期,CS、PEPC活性随有机酸积累而增大,并呈显著正相关;有机酸降解期,IDH的活性与有机酸含量呈极显著负相关;而MDH和ACO对酸含量的影响小。因而可认为PEPC和CS是影响果实有机酸合成的重要酶,而影响有机酸分解的重要酶则是IDH。     

棉花黄萎病菌毒素对棉花生化代谢的影响

为明确棉花黄萎病菌毒素对棉花生化代谢的影响,采用棉花黄萎病菌毒素处理棉花黄萎病抗病和感病品种的棉苗后,测定棉株体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性以及丙二醛(MDA)和木质素含量的动态变化。结果表明,抗病品种陕7191对病菌毒素的抗性显著高于感病品种中棉19;接种毒素后2品种棉苗叶片SOD活性都降低,感病品种降幅高于抗病品种;感病品种POD活性升高较快,到达峰值后迅速下降,而抗病品种POD活性持续上升;2品种PAL活性变化趋势相似,接种后抗病品种活性始终高于感病品种;2品种MDA和木质素含量均增多,感病品种MDA含量的增幅和增量高于抗病品种。     

Effects of Wounding and Exogenous Jasmonic Acid on the Peroxidation of Membrane Lipid in Pea Seedlings Leaves

The changes of malondialdehyde （MDA）, H2O2, and O2^7 content, or the activities of superoxide dismutase （SOD）, catalase （CAT）, ascrobate peroxidase （APX）, peroxidase （POD）, phenylalanine ammonia lyase （PAL）, and polyphenol oxidase （PPO） in pea seedlings （Pisum sativum L.） under wounding and treatment of exogenous jasmonic acid （JA） were investigated. The results showed that the activities of both phenylalanine ammonia lyase （PAL） and polyphenol oxidase （PPO） were significantly increased by wounding and application of JA. The metabolism of reaction oxidative species （ROS） was enhanced, especially O2^7 and H2O2 appeared to rapidly increase. The activities of antioxidant enzymes such as SOD, CAT, APX and POD were also increased. Treatment of JA of 1 or 10 μmol L^-1 could effectively induce plant defense response, and thus decrease the peroxidation of cell membrane lipid. However, high concentration of JA （100 μmol L^-1） resulted in unbalance of metabolism of ROS and promoted the peroxidation of cell membrane lipid. We thus suggested that JA, under the suitable concentration, could induce defense response of pea seedlings to wounding.