藏茴香总DNA提取方法探究

本试验取藏茴香叶片制成干样、鲜样,采用SDS法、CTAB法、改良SDS法、改良CTAB法、试剂盒法五种提取方法对其总DNA进行提取,比较DNA样品的纯度、得率、完整度等指标,以期获得优质高效的藏茴香总DNA的提取方法。试验结果如下:材料选用藏茴香叶片干样所提取的总DNA效果好。用试剂盒法和改良CTAB法提取的藏茴香总DNA样品质量优良、完整性好、纯度高,明显优于其他方法;使用改良CTAB法和试剂盒法所提取的藏茴香DNA进行PCR检测,获得了明亮清晰的扩增图谱;从成本方面考察,试剂盒法远高于其他方法。因此,改良CTAB法提取藏茴香干样总DNA效果最佳。     

杏叶片与果实总RNA提取方法研究

以杏叶片及幼果为材料,分别从操作耗时、RNA质量和产量等方面比较了CTAB法、改进CTAB法、SDS法、改进SDS-酚法和RNA提取试剂盒Trizol等5种不同的RNA提取方法。结果表明：5种方法均能从幼嫩叶片中提取到总RNA;经电泳检测,28SrRNA和18SrRNA两条主带清晰,A260/A280大于1.8。在叶片RNA提取过程中,改良的CTAB法及Trizol法能获得高质量的RNA,产量也分别达到395.21和839.25μg/g。其中改良SDS以及改良CTAB能更有效减少果实RNA的提取中酚类物质和多糖等杂质的影响,获得质量高的总RNA。每种方法提取的叶片和果实的RNA经反转录后形成cDNA,并进行RT-PCR扩增,成功扩出看家基因泛素蛋白UBQ片段,说明了RNA能够很好地应用于文库构建、基因克隆等研究。     

板栗子叶总RNA提取方法研究?

为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。     

水茄果实总RNA提取方法的比较分析

水茄果实中富含多糖、蛋白、色素和其他代谢物质,影响其总RNA提取的质量。本研究中比较Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法和两种试剂盒法5种方法提取的水茄果实总RNA,用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性,Onedrop光谱仪检测总RNA的浓度和纯度。结果表明:改良Trizol法最为有效,该方法提取的总RNA在琼脂糖凝胶上得到清晰的28S和18S条带,OD_(260nm)/OD280nm值在1.8~2.1之间、OD_(260nm)/OD_(230nm)的比值大于2.0;改良CTAB法获得的RNA质量较好,但步骤较为繁琐,耗时长;Trizol法和试剂盒法得到总RNA浓度较低。RT-PCR试验进一步表明,以改良Trizol法获得的总RNA可用于基因分离,所得条带清晰,与目的片段大小一致且比对正确。     

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。     

火炬松总RNA提取方法的比较

植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。     

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。     

剑麻不同组织RNA提取方法比较分析

本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。     

紫叶李叶片总RNA提取方法的改进与比较

从紫叶李叶片中提取高质量RNA是研究叶色相关基因表达调控的必要前提。实验室常用的RNA提取方法和RNA提取试剂盒有很多种,每种方法只适合某些组织材料。对彩叶植物来说,组织中的次生代谢物含量很高,叶片中的花色素苷、多糖更是高质量核酸提取过程中难以去除的干扰成分。本文利用CTAB法、SDS法以及Trizol法从富含花青素类物质的彩叶植物紫叶李叶片中提取总RNA。电泳检测显示:CTAB法提取的总RNA其28S、18S条带清晰,紫外光谱分析A260/A280比值为1.93,A260/A230比值为2.04,RNA产量可达141μg·g-1·FW-1;而且通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合反转录PCR的要求,而且能去除色素分子的干扰。SDS法提取的总RNA产量较低,且纯度不高。而Trizol法很难从紫叶李中提出完整的RNA。因此CTAB法是一种从富含花青苷的紫叶李叶片中有效提取高质量总RNA的方法。     

黄山木兰叶片基因组DNA提取方法的比较研究

以珍贵渐危植物黄山木兰的嫩叶为材料,利用改良CTAB法、SDS法、高盐低p H法和Bio Teke试剂盒法提取基因组DNA,通过超微量紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化和EST-SSR引物扩增法系统地检测DNA的质量及得率。结果表明,在DNA纯度和得率方面,改良CTAB法提取的DNA结果最佳,Bio Teke试剂盒法提取的DNA纯度较好但得率较低,SDS法和高盐低p H法提取的DNA有明显的蛋白质杂质、多糖及其他次生代谢物和RNA的污染;酶切消化结果中改良CTAB法和Bio Teke试剂盒法表现良好;EST-SSR引物扩增结果中唯有改良CTAB法提取的DNA扩增目的基因条带数目最多且清晰。综合分析,改良CTAB法是最适合黄山木兰叶片基因组DNA提取的方法。     

玛咖贮藏根总RNA提取方法的比较

为了筛选出适合玛咖贮藏根总RNA的提取方法,本研究比较了改良异硫氰酸胍法、CTAB法、Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法等4种方法对玛咖根总RNA提取的效果。结果表明:改良异硫氰酸胍法提取效果不理想,CTAB法存在DNA污染;Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法能有效去除多糖,提取出质量高、完整性好的RNA,OD260/OD280值大部分都在1.8~2.0之间,但Trizol法提取RNA的平均得率(156.3μg/g)是E.Z.N.A.TMPlant mi RNA Kit试剂盒法提取RNA的平均得率(48.6μg/g)的3.2倍,说明Trizol法可作为玛咖根总RNA提取的首选方法。     

血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究

血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。     

花生总RNA提取方法比较研究

通过对2种RNA提取方法（改良CTAB法和Trizol法）和2种RNA提取试剂盒（AXYGEN总RNA提取试剂盒和TIANDZ总RNA提取试剂盒）进行比较研究,以期获得质量较好的花生不同器官的总RNA,为后续分子生物学实验奠定基础。实验结果表明,与TRIZOL法及2种RNA提取试剂盒相比,改良CTAB法提取的花生总RNA完整性好,得率高,稳定性好,并且无DNA污染,可以进一步满足半定量RT-PCR等实验需要。     

一种快速提取小麦基因组DNA的改良CTAB方法

旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。以小麦幼叶为材料,用改良CTAB法、改良SDS法、沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。改良CTAB法提取小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。     

油茶叶片总RNA提取的改良Trizol法及比较

为了探讨油茶叶片高质量RNA的提取方法,改良了常规的Trizol法提取RNA的条件。运用常规Trizol法、改良Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA,并运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析方法比较了各种样品RNA的质量。本研究表明,常规Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA的质量较差,改良Trizol法二在RNA提取时加入了PVP和巯基乙醇和氯化钠,能很好地去除油茶叶片中多糖和多酚物质,获得的总RNA质量高,完整性强,可以用于反转录和基因扩增分析。本研究将为油茶的分子生物学研究提供帮助。     

一年生三七地上茎总RNA提取方法的隶属函数辅助比较

用EASYspin Plus Plant RNA试剂盒法、CTAB-LiCl法、异硫氰酸胍(GI)法和Trans Zol试剂盒法提取了一年生三七绿、紫和绿紫过渡地上茎的总RNA,并借助隶属函数法综合评价了RNA的得率和纯度。结果表明:对于3种地上茎,4种方法所得RNA的得率趋势均为:EASYspin Plus Plant RNA试剂盒法CTAB-LiCl法GI法Trans Zol试剂盒法,RNA完整性的趋势却为:EASYspin Plus Plant RNA试剂盒法Trans Zol试剂盒法CTAB-LiCl法GI法,不同方法提取的同种地上茎RNA的OD_(260)/OD_(280)值不相同。提取方法相同时,地上茎颜色制约着所得RNA的得率和OD_(260)/OD_(280),但与RNA的完整性无关。但是,地上茎相同时,4种方法所得RNA得率间的差异达到极显著水平,但RNA的OD_(260)/OD_(280)值间的差异未达到显著水平;方法相同时,3种地上茎RNA得率间的差异达到显著水平,但RNA的OD_(260)/OD_(280)值间的差异未达到显著水平。因此,EASYspin Plus Plant RNA试剂盒法提取一年生三七地上茎RNA的效果最佳。     

一种适合葡萄多种组织的总RNA提取方法

为了解决葡萄组织中总RNA提取难度大的问题,以感染葡萄卷叶病毒-3的葡萄品种‘蛇龙珠’为试验材料,采用CTAB结合SDS法对总RNA提取方法进行了研究,建立了一套适合葡萄叶片、叶柄及韧皮部等多种组织总RNA提取的方法。结果表明,该方法在多种组织中均能获得高质量的RNA,OD260/OD280=1.8~1.9,电泳结果表明,所得RNA完整性好,无降解。同时用所得RNA进行了GLRaV-3的检测,电泳结果表明该法所得RNA可满足葡萄病毒病RT-PCR检测的质量要求。该方法操作简单,结果稳定,对其他富含多酚、多糖类植物组织总RNA的提取具有借鉴意义。     

三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究

为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果.结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染.用TRJzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染.若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质.可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选.     

适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法研究

为了有效消除次生物质、多糖和多酚类物质的严重干扰,获得高质量适宜于实时荧光定量分析的当归总RNA,本研究采用CTAB法、试剂盒法和Trizol法分别提取当归根、茎、叶组织的总RNA,并通过紫外可见光分光光度计、非变性琼脂糖凝胶电泳和反转录荧光定量PCR检测总RNA的纯度、产率、完整性及质量。结果表明：CTAB法提取的当归根、茎、叶组织总RNA纯度较高、完整性较好且叶组织总RNA得率较高;试剂盒法所提的总RNA完整性亦较好,但纯度略差且各组织的得率均较低;Trizol法提取的茎组织总RNA能满足荧光定量PCR要求,但提取的根和叶组织总RNA均出现严重污染,无法满足后续研究要求。因此,CTAB法是一种经济、可靠、适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法。本研究结果为今后有效开展当归分子生物学研究奠定了方法学基础,也为其他药用植物总RNA的提取提供了参考。     

百合鳞片总RNA提取方法的比较

为了筛选出适合百合鳞片的总RNA的提取方法,本研究以东方百合品种Siberia的鳞片为材料,比较了Trizol法、改良Trizol法、RNA提取试剂盒以及改良CTAB法提取RNA的效果。结果表明:Trizol法、改良Trizol法及RNA plant plus Reagent提取试剂盒均不能提取到完整的RNA;离心柱型植物总RNA提取试剂盒存在DNA污染;改良CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5～2倍,D260/D280值都在1.9～2.1之间,D260/D230值大于2,两个样品的平均得率分别为103.57μg/g和119.21μg/g,说明此方法适合百合鳞片RNA的提取。RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从百合鳞片中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学实验。