猪源性成分的PCR检测技术优化研究

本试验研究目的是对食品和饲料中的猪源性成分PCR检测技术的反应体系进行优化。试验采用20μL的 PCR反应体系,分别测定Taq DNA聚合酶为0U、1U、2U、3U时;25mMol?L-1的MgCl2 为0μL、2μL、4μL、6μL时;dNTP为0μL、0.1μL、0.2μL、0.4μL时,其它PCR反应因素为最大量的结果,以优化猪源性成分PCR反应体系。试验结果：1、优化的猪源性成分PCR反应体系中Taq DNA聚合酶、25mMol?L-1 MgCl2、dNTP适宜浓度分别为2U,2μL,0.4μL。2、优化的猪源性成分PCR反应体系其检测最低猪肉DNA浓度为0.04 ng?μL-1。结论：本研究优化出的猪源性成分PCR反应体系经二重PCR反应技术进行验证,不仅快速,简便,准确性与灵敏度高,并且经济、高效。     

球团矿还原的动力学模型分析

基于还原炉控温还原实验,通过分析CO和H2还原球团矿过程中的反应速率模型,提出两种气体混合后还原球团矿的反应动力学模型,得到还原过程中阻力和反应速率随温度及还原度的变化规律,得出结论：CO还原球团矿时,内扩散阻力所占比例随着温度及还原度增加而变大;H2还原球团矿时,内扩散属于速率控制环节;混合气还原球团矿时,反应速率随温度升高而增大,温度低于500 ℃时,CO浓度增加,反应速率降低,而温度超过500 ℃后,反应速率则随着CO浓度的增加而增大;混合气反应速率模型的计算值与实验结果一致。     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量4 k Da的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

巴西橡胶树SSR反应体系的优化

摘 要： 以巴西橡胶树无性系针选2号为试验材料,对橡胶树SSR-PCR反应的5个主要因素：TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、DNA模板及dNTPs进行优化试验。筛选出了各反应因素的最佳水平,建立了橡胶树SSR-PCR最佳反应体系（20ul）: TaqDNA聚合酶0.8U;Mg2+ 浓度1.5mmol•L-1;引物浓度0.5μmol•L-1;模板DNA 含量50ng; dNTPs浓度 0.25 mmol•L-1。并利用此反应体系,用引物1对14个巴西橡胶树品种进行SSR分析,8%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测显示不同品种间DNA谱带多态性丰富,结果证明,此反应体系是稳定可靠的,这为下一步进行的遗传多样性分析、指纹图谱构建等研究奠定基础     

酶膜耦联反应降解酪蛋白制备抗菌肽

利用木瓜蛋白酶降解分离酪蛋白,采用间歇式酶解反应、间歇式膜分离反应、酶膜耦联反应3种不同的模式制备抗菌肽,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用比浊法测定抑菌率。结果表明,间歇式酶解反应所得的抑菌肽抑菌效果最差;间歇式膜分离反应组酶解时间7 min的透过液抑菌效果最好,抑菌率达23.60%;酶膜耦联反应分离后分子量<4 kDa的组分抑菌效果最佳,透过液抑菌率最高达24.10%。将酶解反应与膜分离耦合来水解酪蛋白,发现水解物的不同分子量成分与抑菌效果有关,证明此方法可用来工业化生产抗菌肽。     

冬虫夏草RAPD反应体系的建立及优化

为建立并优化冬虫夏草RAPD反应体系,通过改变RAPD反应体系中Mg2+、dNTP、引物、模板等主要成分的浓度,结合RAPD扩增效果,建立冬虫夏草RAPD反应体系,然后通过改变主要热循环参数,优化冬虫夏草RAPD反应体系。结果表明：适合冬虫夏草的RAPD反应体系为25 μL体系中内含1×PCR缓冲液、1.5 μmol/μL Mg2+、320 μmol/L dNTP、24 ng引物、20 ng模板、1 U Taq酶;扩增程序的优化结果为：95℃预变性5 min,然后35个循环（94℃变性45 s,36℃复性1 min,72℃延伸2 min）,循环结束后72℃延伸7 min。综上,RAPD技术可用于冬虫夏草的鉴定、评价分析。     

茶树cDNA-AFLP银染技术体系的建立

为了挖掘安白茶白化期相关的差异基因,建立并优化了茶树叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析。在安吉白茶叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20 μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、Mg2+、dNTP及Taq DNA聚合酶的用量。PCR预扩增20 μL反应体系中,引物75 ng/20 μL,Mg2+ 2.0 mM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶1 U时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20 μL反应体系中,引物75 ng/20 μL,Mg2+ 2.5 mM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶1.5 U时选择性扩增效果较好。通过试验,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系。     

罗非鱼鱼排蛋白酶解液美拉德反应生香工艺优化研究

为了对罗非鱼鱼排蛋白酶解液美拉德反应生香工艺进行研究,以风味总体接受性为指标,对反应温度、时间、pH值、还原糖添加量4个因素采用响应面法进行多元回归拟合,优化美拉德反应条件,并用HPLC、GC-MS对反应产物进行分析。结果表明：美拉德反应最佳工艺条件为反应时间57 min,反应温度111℃,pH 6.0,还原糖（葡萄糖:木糖=2:1）添加量2.0%;反应产物中有机酸含量较反应前酶解液中有机酸含量丰富,核酸关联物较反应前多了呈味的鸟苷酸;反应产物中挥发性成分包括68种风味化合物,分别是醇类6种、醛类7种、酮类5种、芳香族7种、酯类11种、呋喃8种、吡嗪9种、吡咯1种、烃类7种、酸类5种和含硫化合物2种。罗非鱼鱼排蛋白酶解液经美拉德反应,产物呈透明红褐色,具有独特的鱼香味（香味浓郁）。     

黄瓜SSR反应体系的建立

为摸索适宜黄瓜的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg^2 浓度、、dNTP浓度、DNA模板浓度、引物浓度、Taq聚合酶浓度对扩增结果的影响,并比较了琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶体系在检测扩增产物多态性方面的差异。结果表明：在25μLPCR反应体系中,Mg^2 的最适浓度为0．2mmol／L;dNTP最适浓度为0．2mmol／L;反应体系中Taq聚合酶宜加入1U,引物应加入30ng;DNA最适浓度为5ng/μL。     

无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化

以大粒无核葡萄‘皇家秋天’的基因组DNA为模板,对无核葡萄SRAP-PCR反应体系的主要成分及反应退火温度进行优化。获得的最优SRAP-PCR反应程序为94℃预变性5 min,94℃变性1 min,38℃复性1 min,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min,56℃复性1 min,72℃延伸1 min,35个循环;72℃终延伸10 min。25 μL体系中,模板DNA 40 ng,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.2 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.6 U。实验结果表明,优化后的SRAP-PCR反应体系扩增多态性高,带型清晰,稳定性好。     

三种氨基酸及其美拉德反应产物对丙烯酰胺生成的抑制作用

食品中的丙烯酰胺(AA)主要是由食品中含有的还原糖和氨基酸,在120℃以上的高温油炸、煎炸或烧烤时通过美拉德反应而生成。研究了赖氨酸、甘氨酸和牛磺酸等氨基酸及由这3种氨基酸与葡萄糖或果糖生成的6种美拉德反应产物对Asn-Glc和Asn-Fru模拟反应体系中AA生成的抑制作用和反应体系的褐变程度,及其抗氧化性的影响。结果表明,氨基酸及美拉德反应产物对模拟体系中AA的生成均有显著的抑制作用;添加氨基酸及美拉德反应产物使模拟体系吸光度增高,但赖氨酸—果糖美拉德反应产物添加后模拟体系吸光度无明显变化;所有添加物均使模拟体系的DPPH及ABTS自由基清除率显著增高。     

光萼荷属植物SRAP-PCR反应体系建立与引物筛选

为了建立光萼荷属植物(Aechmea) SRAP-PCR反应体系,为今后光萼荷属植物种质资源研究提供技术支持,本研究通过L16(45)正交试验设计,对光萼荷属植物SRAP反应体系中的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA浓度等5个因素进行优化实验,并筛选多态性SRAP引物组合。结果表明,光萼荷属植物的最佳SRAP反应体系为1.50 mmol/L Mg2+、400 μmol/L dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、15 μmol/L引物、30 ng模板DNA及1×PCR buffer。各因素对SRAP-PCR扩增反应结果影响的差异较大,依次为模板DNA>Taq DNA聚合酶>dNTPs>引物>Mg2+。从56对SRAP引物组合中筛选出51对扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物组合,多态性引物比率达90%以上。通过不同光萼荷属植物和不同引物组合对该反应体系进行验证,均获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明本研究建立的光萼荷属植物SRAP-PCR反应体系稳定可靠。     

西瓜SRAP-PCR反应程序的建立与体系的优化

以西瓜品种中华拳王为试材,探索了西瓜SRAP-PCR反应程序,并对西瓜SRAP-PCR反应体系的各影响因子进行了梯度设置试验,筛选和建立了可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP-PCR反应程序和体系。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;94℃变性1 min,50℃退火1min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸5 min;4℃保存。反应体系(Total为15μL):DNA 100 ng,Mg2 2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Primer 60 ng,Taqpolymerase 0.75 U。结果表明,该程序和体系能很好地满足西瓜基因组SRAP扩增的要求,SRAP标记应用于西瓜遗传研究是可行的。     

碘价快速测定法:醋酸汞为反应加速剂

<>概况:用标准法和韦氏快速法和汉氏快速法测定了奶油和几种常用油脂121个样品。快速法中,加入了2.5%醋酸汞的醋酸溶液作为反应加速剂。从测得结果看,韦氏法反应1分钟,汉氏法反应3分钟     

克氏原螯虾ISSR体系优化

为了获得最佳的克氏原螯虾ISSR-PCR 反应体系,采用单因素实验法将反应体系的Taq 聚合酶、 dNTPs和Mg2+ 3 个主要因素设定5 个梯度,根据每个因素量的变化对扩增结果产生的影响进行了研究,最后确定最佳反应体系为：总体积10 μL,1 μL 10×Taq Buffer、dNTPs 浓度0.6 mmol/L、0.6 U Taq DNA polymerase、MgCl2浓度1.8 mmol/L、20 ng DNA,引物浓度0.8 μmol/L。     

“无核白”葡萄在干制工艺中的褐变机制

以“无核白”葡萄为试材,采用晾干（Air-dried, AD）和晒干（Sun-dried, SD）两种工艺干制,探究葡萄在不同干制工艺中的褐变机制。结果表明：在SD过程中,美拉德反应是导致样品褐变的主要反应,发生在样品干基率高于62%左右之后的干制过程中;在AD过程中,酶促反应是导致样品褐变的主要反应,贯穿整个干制过程;SD过程发生的褐变度高于AD过程。     

北沙参SRAP分子标记体系的建立与优化

为北沙参的遗传多样性分析提供一种科学的途径。采用SRAP标记技术,以北沙参基因组DNA为模板,优化了SRAP反应体系的各主要参数。建立了稳定可靠的SRAP-PCR反应体系;20μL反应体系中,DNA的量为80ng、Mg2+ 2.5mmol/L、dNTPs 0.25mmol/L、TaqDNA聚合酶为1U、正反向Primer浓度均为0.1μmol/L。该体系适合北沙参遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究。     

鼠尾草属植物基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以鼠尾草属植物叶片为材料,提取基因组DNA,并对RAPD反应条件进行了系统优化.结果表明,采用核DNA法提取的DNA质量较高,适宜于RAPD分析;RAPD扩增最佳反应体系为20μl反应体系中,10×buffer 2.0μl,模板DNA 20 ng,Mg 浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6μmol/L,dNTPs浓度0.2mmol/L,Taq酶1.0U.扩增反应程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1main,72℃延伸2main;40个循环;72℃后延伸10main,4℃保存.     

绣球属植物SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

为了确定绣球属植物SRAP-PCR最适宜的反应体系,以19种绣球属植物为材料,利用单因素分析法对影响SRAP-PCR反应体系的5个因素（DNA模板量,Mg2+浓度,dNTPs浓度,Taq聚合酶量和引物浓度）在11个水平上进行优化试验。结果表明,最佳的25 μL反应体系为：10×PCR Buffer 2.5 μL,DNA模板量30 ng,Mg2+浓度1.6 mmol/L、dNTPs浓度0.6 mmol/L,Taq聚合酶量3.5 U,引物浓度为0.2 μmol/L。单因素分析法获得的最佳反应体系适合绣球属植物SRAP的遗传多样性研究。     

红叶石楠RAPD反应体系的优化

建立并研究适合红叶石楠的RAPD的最佳反应体系,为以后开展红叶石楠的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。采用改进后的CTAB法,成功地提取了红叶石楠基因组DNA,通过单因素试验,研究了Mg2+、dNTP、引物的浓度和模板DNA,Taq酶的用量对RAPD反应的影响,建立适合于红叶石楠的RAPD反应体系。结果表明,在25 μL的RAPD反应体系中最佳反应条件分别是10×PCR Buffer 2.5 μL、Mg2+ (25 mmol/L) 2.0 μL、引物(20 μmol/L) 2.0 μL、dNTPs (2.5 mmol/L) 1.8 μL、DNA模板(49.5 μg/mL) 2.0 μL、Taq聚合酶0.3 μL (5 U/μL)。适宜的PCR循环程序为94℃预变性4 min,然后44个循环（94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min）后,72℃延伸10 min,最后16℃保存。改进的CTAB法能成功地提取红叶石楠基因组DNA,利用单因素试验设计所建立的RAPD反应体系,通过重复试验证明了该体系稳定可靠,可应用于红叶石楠遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为红叶石楠在分子生物学研究奠定了基础。