单增李斯特菌基因组DNA提取方法比较

为了选择一种简单、快速、有效的单增李斯特菌基因组DNA的提取方法,采用溶菌酶-蛋白酶K法、氯仿/异戊醇法、液氮冻融法提取单增李斯特菌基因组DNA,利用PCR扩增结果判断所得DNA样品的质量.结果为,3种不同方法均能扩增出234 bp条带,溶菌酶一蛋白酶K法提取的DNA模板检出限最低,为1.25 x 10,CFU/mL.结论为,溶菌酶-蛋白酶K法提取的DNA模板进行PCR扩增检出限最低,该方法提取的基因组DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究.     

从活性污泥中提取微生物总DNA的方法比较

[目的]探索适宜的畜禽废水中活性污泥微生物总DNA提取的方法。[方法]采用2种方法提取畜禽废水中活性污泥微生物总DNA,即"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法以及"溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法。通过对这2种方法进行比较,以确定最佳试验方案。[结果]紫外分光光度法分析表明,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法所得的OD260/OD280大于1.81。电泳结果显示,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法提取DNA亮度高,有大片断DNA的存在且拖带较少,条带集中,能成功进行16S rDNA的PCR扩增;通过PCR扩增所得的DNA的纯度检测结果显示,扩增出了条带分子约为1 500 bp的特异性条带"。溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法所提取的DNA没有得到较好的效果,点样孔较亮则可能存在一定的蛋白质残留,或其他杂质等,通过PCR扩增没有扩出特异性条带。[结论]"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法为畜禽废水中微生物群落在分子水平上的研究提供了1种简便、可靠的DNA提取方法,为分析畜禽废水中细菌多样性提供了条件。     

转基因玉米根际土壤DNA的提取

[目的]探索转基因玉米根际土壤DNA提取的方法。[方法]采用直接裂解方式,通过玻璃珠、溶菌酶和SDS共同作用于转基因玉米MON863和Bt 176的根际土壤中,提取微生物DNA。[结果]该方法能从两种转基因玉米根际土壤中提取到20 kb的完整DNA片段。[结论]所得DNA完全适用于PCR扩增和酶切的要求。     

适于ISSR-PCR扩增的松毛虫基因组DNA的提取

为了方便稳定地获得松毛虫基因组DNA,寻找适合于松毛虫ISSR-PCR扩增的DNA的提取方法,分别用SDS-蛋白酶K法和CTAB法对松毛虫雌成虫进行基因组DNA的提取。结果显示:用SDS-蛋白酶K法提取的基因组DNA带型整齐,无降解,DNA得率和纯度都较高,操作简单无需纯化,用于ISSR扩增时其稳定性和重复性都很好;而用CTAB法提取出的DNA浓度低,杂质较多,琼脂糖凝胶电泳甚至检测不出,此方法提取的DNA作为ISSR反应模板时需要进行纯化。     

桉树人工林根际土壤DNA提取的优化

通过优化土壤微生物总DNA的提取方法,获得高纯度、高得率和完整性好的总DNA,为桉树种植地土壤微生物群落多样性的分析奠定基础。综合比较已报道的土壤微生物DNA提取方法的优缺点,设计了7种从巨桉(Eucalyptus grandis Hill ex Maiden)人工林根际土壤中直接提取微生物DNA的方法,并通过PCR扩增、DGGE电泳及荧光定量PCR分析比较了不同方法所提取DNA的质量以及对后期分子生物学研究的适用性。结果表明,使用PVPP和硫酸铝铵联用吸附腐殖酸杂质后,采用PEG 8 000沉淀能够有效地提取桉树根际土壤DNA。该方法提取的DNA纯度最高,OD260 nm/OD230 nm达到2.45,OD260 nm/OD280 nm达到1.78,DNA得率为5.56μg/g土壤,适用于PCR扩增和荧光定量分析,并且通过DGGE电泳分离出最丰富的条带,是一种高效的提取土壤微生物DNA方法。     

一种适用于PCR的土壤微生物DNA的提取方法

[目的]对土壤微生物的DNA进行提取,以建立一种适用于PCR技术分析的土壤微生物DNA的快速提取方法。[方法]采用了2种不同的直接裂解法提取土壤微生物DNA,并用细菌通用引物27F和1492R进行PCR扩增16SrDNA片段。[结果]2种方法提取的土壤微生物总DNA电泳结果显示没有差别,但是只有CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取的总DNA不需要纯化,在增加Mg^2＋用量的条件下,只需用第一轮非特异PCR产物作为模板即可扩增出16SrDNA片段。[结论]CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取土壤DNA,方法操作简单、快捷。同时适用于PCR分析。为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定了基础。     

不同施肥处理对毛竹根际微生物影响及其PCR-DGGE分析

采用PCR-DGGE技术对不同施肥处理毛竹根际微生物多样性特征进行研究.结果表明:采用改进的蛋白酶K-CTAB法提取的毛竹土壤DNA经PCR扩增的产物经DGGE检测后得到的电泳条带清晰且分离效果好,可以明显反映出毛竹根际微生物多样性的变化.根际微生物种群组成特征受施肥量、肥料种类影响很大,施肥能够增加毛竹根际微生物的多...     

SDS-CTAB法提取烟草病圃土壤微生物总DNA

采用SDS-CTAB法提取了烟草病圃土壤中微生物的总DNA,经过纯化后获得的DNA大小约为21 kb,OD260/OD280高于1.70;用细菌和真菌保守序列引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳能检测到预期大小的扩增条带。     

广藿香根际土壤微生物总DNA提取方法的优化

提取高质量的土壤微生物DNA是进行后续分子生物学试验的前提。在3种常用土壤微生物DNA提取方法的基础上,提出了1种新的优化方案,包括使用添加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的磷酸缓冲液对土壤进行预洗、联合使用SDS-CTAB和蛋白酶K来破碎细胞、用酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)除蛋白质和淀粉等杂质、使用PEG8000沉淀DNA、用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化DNA等。比较分析了优化的方法与其他3种常用方法所获得的总DNA产率和纯度的差别,结果表明,优化的方法所提取DNA的D260 nm/D230 nm、D260 nm/D280 nm值均高于其他3种方法,且PCR扩增条带清晰、DNA产率高,土壤中DNA得率达88.76μg/g,表明该方法适宜提取土壤中的微生物DNA,从而为研究广藿香根际土壤微生物种类及其多样性奠定了基础。     

4种不同土壤微生物DNA提取方法对DGGE分析微生物群落的影响

分别应用高盐法、玻璃珠破碎法、冻融法和试剂盒法4种不同土壤微生物DNA提取方法提取水稻稻田土壤微生物DNA,并通过细菌16SrRNA V3区通用引物GC338f-530R和真菌18SrRNA特异性引物NS1-GCFung进行PCR扩增结合变性梯度凝胶电泳(CGGE)分析,对4种DNA提取方法进行评价。结果表明,玻璃珠破碎法和试剂盒法提取的DNA均能满足土壤微生物多样性分析的要求;其中试剂盒方法操作简单,提取的DNA质量较高,但DNA产量较低且成本昂贵;玻璃珠破碎法用时较长,步骤繁琐,DNA产量较高,纯度较低,但对后续PCR扩增和DGGE分析没有明显影响,且成本低廉。     

几种提取乌苏里貉毛囊核酸方法的比较(英文)

[目的]该研究旨在探讨提取乌苏里貉毛囊核酸的可靠方法。[方法]本实验分别利用改进的有机酚法,chelex-100法,PCR缓冲液法和试剂盒法,从乌苏里貉毛发中提取核酸DNA,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并且对四种方法进行比较。[结果]经分光光度计测定和凝胶电泳检测,本实验研究结果表明chelex-100提取的核酸有蛋白质等杂质,PCR缓冲液法提取核酸浓度低有机酚法和试剂盒法提取的DNA浓度高,且没有杂带。[结论]本研究为进一步探索高效,简便的提取乌苏里貉毛囊核酸DNA提供了有力的科学理论基础。     

土壤镰刀菌种群检测的巢式PCR-DGGE方法的建立

本试验比较了4种提取小麦-玉米轮作免耕田土壤DNA的方法,并对巢式PCR反应体系和扩增条件进行了优化,建立了适合检测土壤中镰刀菌多样性的PCR-DGGE体系。结果表明:土壤DNA的质量是影响PCR扩增结果的关键因子,试剂盒Fast DNA SPINfor Soil所提土壤DNA片段接近23 bp,A260/A280比值为1.84,DNA产量为18.1μg/g,更适合进行PCR反应。DNA模板的浓度决定PCR扩增结果,第一轮PCR扩增的DNA模板适宜量为2～5 ng,以第一轮PCR产物的原液为模板进行第二轮PCR扩增,在退火温度为67℃时扩增结果最好。PCR产物在变性范围为45%～60%的丙烯酰胺梯度凝胶中电泳7～8 h,其条带能够完全分离,可以用作土壤中镰刀菌多样性的检测。     

一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法(英文)

[目的]介绍一个从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]本实验采用的是,在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征摸索出来的改进方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段,通过测序检测,同时提取马鹿肌肉和皮毛样品的DNA作为对照,进一步证实了提取的可靠性。[结论]该方法提取过程中不需要用蛋白酶K;所提取的DNA不需要用DNA纯化试剂盒纯化,可直接用PCR扩增,因此,费用量很低。     

一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法

[目的]介绍一种从马鹿粪便中提取DNA的改进方法。[方法]在传统的CTAB裂解法的基础下,根据马鹿粪便的特征进行改进所得的DNA提取方法。[结果]采用该方法从天山马鹿粪便中提取了高质量的粪便DNA并扩增出了天山马鹿线粒体细胞色素b基因片段,通过测序检测,同时以提取的马鹿肌肉和皮毛样品DNA作为对照,进一步证实了提取的可靠性。[结论]该方法提取过程中无需使用蛋白酶K;所提取的DNA无需使用DNA纯化试剂盒纯化,可直接用于PCR扩增,因此,试验费用很低。     

从不同材料中提取马DNA方法的比较研究

[目的]通过对5种从不同材料中提取马DNA的方法进行比较研究,寻找最适的提取方法。[方法]采用酚仿抽提法、蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法分别从血液、毛发材料中提取马DNA,并通过PCR扩增对提取产物进行检测。[结果]通过蛋白酶K直接消化法、酸碱裂解法可从微量血液和毛发中提取到马DNA,均可达到采用酚仿抽提法从血液中提取马DNA的效果,并能满足后续分子生物学试验的要求。[结论]通过比较分析,该研究中以酸碱裂解法最佳。     

一种高效提取高海拔地区土壤微生物总DNA的方法

为优质、高效地提取高海拔地区土壤微生物基因组DNA,在综合了多种土壤微生物DNA提取方法的基础上,采用双酶-改良酚氯仿DNA提取法提取了3份高海拔地区土壤样品的DNA,同时比较了其他3种常用方法的提取产率和纯度,该方法优于其他3种方法。采用PVP缓冲液预洗,去除腐殖酸;DNA提取液、溶菌酶和蛋白质酶K共同裂解土壤微生物细胞,保证获得大片段的DNA,提高DNA产率;酚氯仿法抽提,简便易操作,能有效地去除蛋白质和其他杂质。该方法是一种简便高效、适用于高海拔、生境类型复杂的土壤样品DNA提取的方法,DNA质量可满足PCR扩增的要求。     

松阿扁叶蜂SSR-PCR反应体系的优化

以SDS-蛋白酶K法提取的松阿扁叶蜂(Acantholyda posticalis Matsumura)基因组DNA为模板,利用L16(45)正交设计对影响松阿扁叶蜂SSR-PCR反应的主要参数DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物和dNTPs进行优化.结果表明,松阿扁叶蜂SSR-PCR最优的反应体系为25 μL体系中含1.00U Taq DNA 聚合酶、3.00 mmol/L Mg2+、3.75 mmol/L dNTPs、25.00 ng/μL DNA模板和10.00 μmol/L引物.     

多重PCR鉴定水牛胚胎性别的研究

【目的】建立多重PCR鉴定水牛胚胎性别的技术体系,为下一步优化多重巢式PCR方法奠定基础。【方法】采用热裂解法、蛋白酶K＋二硫苏糖醇（DTT）法和吐温-20＋DTT法分别提取水牛卵裂球DNA,比较3种方法对G3PDH基因的扩增效果;同时设计1对检测引物和1对内标引物用于胚胎性别鉴定,提取胚胎DNA后进行多重PCR检测。【结果】吐温-20＋DTT法具有良好的裂解效果,其有效检出率为97.1%;而经吐温-20＋DTT法抽提的DNA用于多重PCR检测,其胚胎鉴定率达到100.0%。【结论】采用吐温-20＋DTT法处理水牛胚胎样品后再进行多重PCR性别鉴定可以简化操作步骤、提高鉴定效率,但样品数量不宜太少。